本发明专利技术涉及一种桔梗汤物质基准及其建立方法，属于中药制药质量标准控制领域。本发明专利技术遵照古籍处方对桔梗汤进行煎煮提取，采用现代浓缩与干燥工艺，首次制得了桔梗汤物质基准。本发明专利技术还建立了该桔梗汤物质基准的指纹图谱，该桔梗汤物质基准指纹图谱与对照指纹图谱的相似度高达0.940～0.994，具有很强的代表性，能够用来对桔梗汤物质基准进行质量控制。本发明专利技术制得的桔梗汤物质基准和建立的桔梗汤物质基准指纹图谱在桔梗汤物质基准的新药制剂的制剂工艺和质量控制中应用前景广阔。本发明专利技术还提供了一种测定桔梗汤中指标成分的从饮片到桔梗汤煎液再到桔梗汤物质基准的量值传递关系的方法，适用于桔梗汤物质基准的全过程系统研究。
【技术实现步骤摘要】
桔梗汤物质基准及其建立方法
本专利技术涉及桔梗汤物质基准及其建立方法，属中药制药质量标准控制领域。
技术介绍
中药经典名方开发已成为当下中医药界研究的热点之一，而其中经典名方物质基准的成功研制对于整个中药经典名方的申报极为关键。2018年5月29日，国家药品监督管理局发布了《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管理规定》(以下简称《规定》)。《规定》明确了古代经典名方制剂研制的两个阶段：经典名方物质基准研制与制剂研制。经典名方物质基准是参照古籍中经典名方制备方法而得的重要药用物质标准，除成型工艺外，其余制备方法应与古籍记载基本一致。具体而言，经典名方物质基准是以中医药理论为指导，临床应用为基础，遵循传统制法，结合现代科学技术，从来源上控制原药材质量，经过药材前处理、饮片炮制、煎煮、浓缩、干燥成型等标准化工艺制成的质量均一、稳定、可控的浸出物。经典名方物质基准既是检测经典名方制剂质量的基准，同时又需反映整方的物质基础。而针对经典名方的制剂研究，决定其成功研发的关键在于如何突破中药经典名方物质基准的质量控制技术及全面、准确阐明药材-饮片-物质基准的成分群量值的传递规律。桔梗汤由桔梗和甘草组成，出自东汉时期张仲景《伤寒论》的杂病部分《金匮要略》中：“桔梗一两，甘草二两。上二味，以水三升，煮取一升，分温再服，则吐脓血也”，并言其主治“肺痈，咳而胸满，振寒脉数，咽干不渴，时出浊唾腥臭，久久吐脓如米粥者。”其中桔梗辛苦而平，有宣肺祛痰，利咽排脓之功；甘草甘平，有补心脾气，祛痰止咳，缓急止痛，解热毒及药食毒的功效。两药配伍，相得益彰，甘草泻火解毒以治本，桔梗宣通肺气祛痰排脓，标本兼顾，故其宣肺止咳，利咽解毒，祛痰排脓之功增强。现代有大量桔梗汤治疗各类疾病的临床应用报道，邓森田用桔梗甘草汤治疗急慢性咽喉炎48例，总有效率为97.91％，于洁采用桔梗甘草汤加味治疗慢喉喑57例。临床观察发现，总有效率为92.98％。杨全胜采用紫百甘桔汤治疗外感咳嗽26例。结果治愈16例，占61.54％，好转10例，占38.46％，总有效率100.00％。同时，有学者对桔梗、甘草协同配伍的药效作用及增效机理进行了深入研究，结果显示两者在抗炎、祛痰方面具有协同作用。如刘彬研究发现，甘草皂苷、桔梗皂苷单用及合用在一定剂量范围内，皆可以显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀，提高小鼠气管酚红排分泌量，两药显示出协同作用，其机理为桔梗和甘草皂苷协同抑制巨噬细胞中TNF-α和PGE2产生，并呈剂量依赖关系。目前，对桔梗汤的研究多关注于药理学研究及现代的提取工艺研究，而对于桔梗汤的遵古制法及其指纹图谱和药效成分量值传递关系的研究还较少，目前还未见桔梗汤物质基准的报道。因此，针对目前经典名方桔梗汤质量评价方法不足的现状，建立桔梗汤物质基准对推进其成方制剂的发展具有重要意义。
技术实现思路
针对目前经典名方桔梗汤质量评价方法不足的现状，本专利技术的目的之一是提供桔梗汤物质基准的指纹图谱及其建立方法和应用，本专利技术的另一目的是提供桔梗汤物质基准及其建立方法和应用。本专利技术提供了一种桔梗汤物质基准的指纹图谱，其特征在于：所述指纹图谱中包含芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸和桔梗皂苷的特征峰。进一步地，所述指纹图谱中还包含30个以上的特征峰。进一步地，所述指纹图谱如图2b所示。本专利技术还提供了上述指纹图谱的建立方法，所述方法为取桔梗汤物质基准，配置成桔梗汤物质基准溶液，采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法建立桔梗汤物质基准的指纹图谱；其中，所述高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：A相为0.05％～0.5％的甲酸水溶液，B相为乙腈，梯度洗脱条件如下表所示：表中，B％表示流动相中B相的体积百分数；所述蒸发光散射检测的参数为：漂移管温度100～110℃,N2压力12～15psi；优选的，所述梯度洗脱条件中，每两个相邻时间点之间流动相中B相的体积百分数是随时间匀速变化的；A相为0.1％的甲酸水溶液；流速0.8～1.2mL/min，柱温28～35℃，进样量10μL；所述蒸发光散射检测的参数为：漂移管温度108℃,N2压力13.8psi。进一步地，所述桔梗汤物质基准溶液的配制方法为：取桔梗汤物质基准，加入水溶解后加甲醇，超声提取，离心过滤，取上清液蒸干，残渣加水溶解后，加无水乙醇，静置过夜，离心、滤过、蒸干，加甲醇溶解，即得；优选的，所述桔梗汤物质基准溶液的配制方法为：取桔梗汤物质基准1～2g于50mL容量瓶，加入10～30mL纯水溶解后加甲醇至容量瓶刻度，超声提取10min，离心过滤，取上清液蒸干，残渣加水10～20mL，加无水乙醇定容至50mL容量瓶，静置过夜，离心、滤过、蒸干，加50％甲醇定容到5mL容量瓶，即得。本专利技术还提供了一种桔梗汤物质基准，所述桔梗汤物质基准的指纹图谱如上所述。进一步地，所述桔梗汤物质基准的建立方法包括以下步骤：(1)桔梗汤的制备：取桔梗药材、甘草药材，加水，煎煮得煎液，过滤，即得桔梗汤；所述桔梗药材、甘草药材的质量比为1：2，所述桔梗药材和甘草药材的总质量与水的质量体积比为1：14g/mL，所述煎液与水的体积比为1：3；(2)桔梗汤物质基准的制备：取步骤(1)中桔梗汤，浓缩得到浓缩汤液，干燥，得桔梗汤物质基准。进一步地，所述桔梗汤物质基准的建立方法包括以下步骤：(1)桔梗汤的制备：取桔梗饮片14g、甘草饮片28g，加水600mL，煎煮至200mL煎液，过滤，即得桔梗汤；(2)桔梗汤物质基准的制备：取步骤(1)中桔梗汤，使用旋转蒸发仪旋蒸至体积为30～50mL的浓缩汤液；进行冷冻干燥，得桔梗汤物质基准。进一步地，步骤(1)中，所述煎煮条件为：煎煮前浸泡15min～1h，然后使用电炉加盖煎煮，武火煮沸后，文火煎煮至200mL煎液；所述武火功率为1000W～2000W，文火功率为50W～100W；和/或，所述过滤使用50目～400目的筛布；和/或，步骤(2)中，所述旋蒸条件为：在真空度0.06～0.10Mpa，温度40～60℃，转速40～80rpm下旋蒸；和/或，所述冷冻干燥条件为：冷凝器温度-80～-40℃，真空度150～250mT，预冻温度-55～-35℃，预冻1～5h，升华温度-30℃～-10℃，升华时间10h～24h，解析干燥温度10℃～35℃，解析干燥时间1h～5h；优选的，步骤(1)中，所述煎煮条件为：煎煮前浸泡30min，然后使用电炉加盖煎煮，武火煮沸后，文火煎煮至200mL煎液；所述武火功率为1200W，文火功率为50W；和/或，所述过滤使用100目的筛布；和/或，步骤(2)中，所述旋蒸条件为：在真空度0.08Mpa，温度50℃，转速60rpm下旋蒸；和/或，所述冷冻干燥条件为：冷凝器温度-60℃，真空度200mT，预冻温度-45℃，预冻3h，升华温度-20℃，升华时间18h，解析干燥温本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种桔梗汤物质基准的指纹图谱，其特征在于：所述指纹图谱中包含芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸和桔梗皂苷的特征峰。/n
【技术特征摘要】
20200525 CN 20201045043131.一种桔梗汤物质基准的指纹图谱，其特征在于：所述指纹图谱中包含芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸和桔梗皂苷的特征峰。
2.根据权利要求1所述的指纹图谱，其特征在于：所述指纹图谱中还包含30个以上的特征峰。
3.根据权利要求2所述的指纹图谱，其特征在于：所述指纹图谱如图2b所示。
4.权利要求1～3任一项所述指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述方法为取桔梗汤物质基准，配置成桔梗汤物质基准溶液，采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法建立桔梗汤物质基准的指纹图谱；
其中，所述高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
流动相：A相为0.05％～0.5％的甲酸水溶液，B相为乙腈，
梯度洗脱条件如下表所示：
表中，B％表示流动相中B相的体积百分数；
所述蒸发光散射检测的参数为：漂移管温度100～110℃,N2压力12～15psi；
优选的，所述梯度洗脱条件中，每两个相邻时间点之间流动相中B相的体积百分数是随时间匀速变化的；A相为0.1％的甲酸水溶液；流速0.8～1.2mL/min，柱温28～35℃，进样量10μL；所述蒸发光散射检测的参数为：漂移管温度108℃,N2压力13.8psi。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述桔梗汤物质基准溶液的配制方法为：取桔梗汤物质基准，加入水溶解后加甲醇，超声提取，离心过滤，取上清液蒸干，残渣加水溶解后，加无水乙醇，静置过夜，离心、滤过、蒸干，加甲醇溶解，即得；
优选的，所述桔梗汤物质基准溶液的配制方法为：取桔梗汤物质基准1～2g于50mL容量瓶，加入10～30mL纯水溶解后加甲醇至容量瓶刻度，超声提取10min，离心过滤，取上清液蒸干，残渣加水10～20mL，加无水乙醇定容至50mL容量瓶，静置过夜，离心、滤过、蒸干，加50％甲醇定容到5mL容量瓶，即得。
6.一种桔梗汤物质基准，其特征在于：所述桔梗汤物质基准的指纹图谱如权利要求1～3任一项所述。
7.根据权利要求6所述的桔梗汤物质基准，其特征在于：所述桔梗汤物质基准的建立方法包括以下步骤：
(1)桔梗汤的制备：取桔梗药材、甘草药材，加水，煎煮得煎液，过滤，即得桔梗汤；所述桔梗药材、甘草药材的质量比为1：2，所述桔梗药材和甘草药材的总质量与水的质量体积比为1：14g/mL，所述煎液与水的体积比为1：3；
(2)桔梗汤物质基准的制备：取步...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢兴亮，范志源，盛艳梅，夏玲玲，
申请(专利权)人：成都医学院，
类型：发明
国别省市：四川;51
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