一种基于荧光分析的农药-靶标蛋白筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种基于荧光分析的农药‑靶标蛋白筛选方法。本发明专利技术方法选取环境敏感荧光探针与蛋白预结合得到超分子体系，根据蛋白与农药作用前后探针的荧光变化指示相应蛋白与农药的结合过程；该方法涉及体系组成灵活可控，可根据不同蛋白选择预结合的荧光探针，进而加入特定农药进行快速筛选，获得与该农药存在强结合作用的潜在靶标蛋白。本发明专利技术通过检测荧光信号的变化，将农药与靶标蛋白作用直观得展现为光谱数据，为目前农药靶标研究领域提供一种简单、普适、快速的分析方法，特别适用于筛选新药、导向农药的靶标蛋白，以及计算结合常数、吉布斯自由能变化等。

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光分析的农药-靶标蛋白筛选方法
本专利技术属于生物化学
，具体涉及一种基于荧光分析的农药-靶标蛋白筛选方法。
技术介绍
传统农药大多通过与特定的受体(靶标蛋白)结合而产生功效，对具备定向转运的新型导向农药而言，确定农药的靶标蛋白有助于阐明导向农药转运、富集过程，因此建立简便有效的分析方法分析农药与靶标蛋白相互作用是研发新型导向农药、阐明药物作用机理的重要研究内容。目前已有技术包括同位素标记(CN201810712528.X)、质谱分析(CN201710103155.1)、等温量热滴定等。利用以上方法可得到蛋白与小分子作用的结合常数(Ka)、吉布斯自由能变化(ΔG)、结合比例(n)、熵变(ΔS)、焓变(ΔH)等一系列理化参数，但已有方法所需仪器较为昂贵，且样品处理过程较为繁复，因此仍需研发简便有效的分析方法用于农药-靶标蛋白互筛。荧光分析法已被用于分析蛋白质-小分子相互作用，例如由ThermoFisher提供的LanthaScreenEu激酶结合测定法，以及专利CN111065926A给出基于荧光染料附接核酸用于表征蛋白-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于荧光分析的农药-靶标蛋白筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1.选择能够与实验蛋白结合的环境敏感荧光探针，分别配制蛋白母液a和荧光探针母液b；稀释蛋白母液a后加入适量荧光探针母液b混溶得到超分子体系c，测试体系c的荧光光谱；/nS2.配制待测农药母液d，分别向体系c中滴加不同浓度的待测农药，混合均匀后测试不同滴定浓度下的荧光光谱；/nS3.根据步骤S1、S2测得的荧光信号建立与待测农药浓度的量化关系，使用Benesi-Hildebrand公式计算得到解离常数K

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光分析的农药-靶标蛋白筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.选择能够与实验蛋白结合的环境敏感荧光探针，分别配制蛋白母液a和荧光探针母液b；稀释蛋白母液a后加入适量荧光探针母液b混溶得到超分子体系c，测试体系c的荧光光谱；
S2.配制待测农药母液d，分别向体系c中滴加不同浓度的待测农药，混合均匀后测试不同滴定浓度下的荧光光谱；
S3.根据步骤S1、S2测得的荧光信号建立与待测农药浓度的量化关系，使用Benesi-Hildebrand公式计算得到解离常数Kd，进一步计算得到待测农药与实验蛋白的结合常数Ka、ΔG。


2.根据权利要求1所述的基于荧光分析的农药-靶标蛋白筛选方法，其特征在于，所述的步骤S3中的Benesi-Hildebrand公式为：y＝Bmaxx/(Kd+x)，其中x为农药浓度，y为实验获得x滴定浓度下的荧光信号，Bmax为顶部渐近线，Kd为解离常数；使用Benesi-Hildebrand公式计算得到解离常数Kd后，根据Ka＝1/Kd计算得到结合常数Ka，将Ka代入热力学公式ΔG＝-RTln(Ka)，其中R为自然常数，T为温度，Ka为结合常数，计算得到ΔG。


3.根据权利要求1所述的基于荧光分析的农药-靶标蛋白筛选方法，其特征在于，所述的实验蛋白为乙酰胆碱酯酶、GABA受体、烟碱乙酰胆碱受体、鱼尼丁受体或血清蛋白。


4.根据权利要求3所述的基于荧光分析的农药-靶标蛋白筛选方法，其特征在于，所述的血清蛋白为人血清蛋白、牛血清蛋白或卵血清蛋白。...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐汉虹，秦天依，赵晨，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44