一种仿生纳米探针及其制备方法和应用技术

一种仿生纳米探针及其制备方法和应用，属于生物纳米材料制备与应用领域；本发明专利技术的方法是先通过冻融法制备海胆式双重适配体金纳米粒子探针，随后将该仿生探针加入到血液样品中进行对目标CTC的识别与标记，然后对样品进行离心重悬清洗，最后将样品通入电感耦合等离子体质谱仪和培养孔板中进行单细胞检测和荧光成像分析。本发明专利技术的方法制备的仿生双重适配体金纳米粒子探针应用于单循环肿瘤细胞的在线检测方面，荧光性能好，作为纳米荧光探针具有良好的应用前景。新型的单个CTC在线二维检测方法，使用高效识别的海胆式双重适配体金纳米粒子探针，通过高检测效率电感耦合等离子体质谱的时间分辨检测模式和荧光成像进行单个CTC的在线分析。

【技术实现步骤摘要】
一种仿生纳米探针及其制备方法和应用
本专利技术属于生物纳米材料制备与应用领域，具体涉及一种修饰荧光基团的双重适配体金纳米粒子探针及其制备方法和应用。
技术介绍
癌症，即恶性肿瘤，是100多种相关病症的统称，对生命体致死率极高，至今仍未攻克，因此成为当今分析化学、生物化学、医学研究的重点。研究表明，高达90％的癌症相关死亡是由转移性癌症引起的，即恶性肿瘤细胞从原病灶脱落，进入外周血，并发生向其他组织器官转移扩散，造成病情进一步恶化，甚至死亡。这些进入血液发生转移的恶性肿瘤细胞称为循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCells，CTCs)。目前肿瘤诊断很大程度上依赖于组织切片的形态特征。但由于其准确性差、早期诊断能力差，导致传统方法逐渐由解剖病理学向分子病理学转变。CTCs作为一类新的分子病理学临床生物标记物被广泛研究。例如，患者血液中CTCs的筛查，可以作为恶性肿瘤细胞早期发现、预后、复发识别的信息来源。研究表明，大量群体CTCs分析可能会丢失不同单个细胞的重要信息，因为不同CTC之间具有细胞异质性。因此对单个CTC的进一步分子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种仿生纳米探针，其特征在于，其为双重适配体金纳米粒子探针；所述的双重适配体分别为Sgc8和SYL3C；其序列分别为：Sgc8：5’thiol-C6-ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGA-6-FAM；SYL3C：5’thiol-C6-TTTTTTTTTTCACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTG-AMCA。/n

【技术特征摘要】
1.一种仿生纳米探针，其特征在于，其为双重适配体金纳米粒子探针；所述的双重适配体分别为Sgc8和SYL3C；其序列分别为：Sgc8：5’thiol-C6-ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGA-6-FAM；SYL3C：5’thiol-C6-TTTTTTTTTTCACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTG-AMCA。


2.一种权利要求1所述仿生纳米探针的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：
步骤1：将两种适配体加入标准金纳米粒子溶液中混匀，形成含适配体的金纳米粒子溶液；具体步骤为：
(1)平均粒径为30.2nm，浓度为58.5μg/mL的标准金纳米粒子溶液溶于水中形成水溶液，并经过短暂的超声分散，形成均匀分散的单颗粒金纳米粒子溶液，浓度为0.5～5nM；
(2)将第一种适配体在10000～13000rpm转速下离心50～75s，再用TE缓冲溶液配制为80～120μM的适配体工作液；
(3)将第二种适配体在10000～13000rpm转速下离心50～75s，再用TE缓冲溶液配制为80～120μM的适配体工作液；
(4)将装有第一种适配体的离心管置于89～95℃的水浴1.5～3min，随后逐步冷却至室温进行DNA链退火，使得适配体链充分展开，恢复其自身DNA结构；
(5)将装有第二种适配体的离心管置于89～95℃的水浴1.5～3min，随后逐步冷却至室温进行DNA链退火，使得适配体链充分展开，恢复其自身DNA结构；
(6)取5～10μL80～120μM的退火后的第一种适配体加入到0.8～1.2mL0.5～5nM的金纳米粒子溶液中，混匀，形成含有第一种适配体和标准金纳米粒子的混合溶液；
(7)取5～10μL80～120μM的退火后的第二种适配体加入到步骤(6)中得到的混合溶液中，混匀，形成含有两种适配体以及标准金纳米粒子的混合溶液；
步骤2：将含适配体的金纳米粒子溶液置于-15～-30℃环境中1.5～2.5h，随后于室温下融解，形成双重适配体金纳米粒子探针。


3.根据权利要求2所述的一种仿生纳米探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1中两种适配体分别为Sgc8和SYL3C；该两种适配体的序列分别为：Sgc8：5’thiol-C6-ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGA-6-FAM；SYL3C：5’thiol-C6-TTTTTTTTTTCACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTG-AMCA。


4.一种权利要求1所述仿生纳米探针的应用，其特征在于，所述的仿生纳米探针用于单循环肿瘤细胞的在线检测。


5.根据权利要求4所述的仿生纳米探针的应用，其特征在于，具体包括：
步骤1：将制得的双重适配体金纳米粒子探针引入电感耦合等离子体质谱仪中进行时间分辨模式检测；
步骤2：按照体积比为1:100～1:1的比例，向生物样品中加入制备好的双重适配体金纳米粒子探针，混合均匀形成样品-探针混合液，冰浴20～40min后，双重适配体金纳米粒子探针则识别修饰到生物样品中循环肿瘤细胞表面，形成初步处理后的生物样品；
步骤3：将步骤2中初步处理后的生物样品以750～1100rpm的转速，离心洗涤2.5～5min，得到纯净的样品；
步骤4：将步骤3中得到的样品的一部分引入电感耦合等离子体质谱仪中进行时间分辨模式的检测；
步...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明丽，王建华，张璇，魏星，
申请(专利权)人：东北大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21