一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法及基质血清技术

本发明专利技术涉及生物制品技术领域，具体公开了一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法，该方法包括以下步骤：S1.称取硫酸铵加入至阴性血浆或阴性血清中混合，离心取上清液I；S2.称取活性炭和硅藻土或右旋糖酐，加入生理盐水混匀，离心弃上清，留混合沉淀A；S3.向混合沉淀A中加入上清液I，混匀离心，取上清液II；S4.称取活性炭和硅藻土或右旋糖酐，加入生理盐水混匀，离心弃上清，留混合沉淀B；S5.向混合沉淀B中加入上清液II，混匀离心，取上清液III，过滤得基质血清。该方法可以有效地去除血浆、血清中绝大部分的蛋白和脂类物质，排除基质效应对临床检测结果的影响，提高了基质血清的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法及基质血清
本专利技术涉及生物制品
，尤其是涉及一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法及基质血清。
技术介绍
质量控制的目的就是检测分析过程中的误差，控制与分析有关的各个环节，确保实验室结果准确可靠。全面的质量控制包括分析前、分析中、分析后的三个主要过程的质控，只有正确认识和检测及控制这三个过程的各个环节误差，才能保证最后检验结果质量。而质量保证的关键在于如何正确理解认识及较好选用质控血清，所以质控血清的质量好坏直接影响到检验结果的可靠性和准确性。多年以来，基质效应的存在是困扰实验室检测的一个重大难题，这是因为几乎所有的样品都存在着基质效应，无论检测其中的哪一个分析物，都会收到基质效应不同程度的影响。而造成基质效应的原因则与待测样品的组成成分和质控材料的组成和处理的技术有关。因而基质效应对临床检测的影响不能够忽视。目前也有很多相关的研究减弱基质效应的方法，例如，中国专利CN105675772B公开了一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，以液相色谱-串联质谱联用检测方法检测果蔬中农药残留时，采用小体积进样：当样品为弱基质效应样品时，进样体积小于5μL；当样品为中等强度基质效应样品时，进样体积小于等于2μL；当样品为强基质效应样品时，先通过一定程度的基质稀释，再采用小体积进样。该方法可以减弱基质效应，但是操作起来较为繁琐，并且该方法没有直接对质控血清本身或分离方法作出改进，因此，还有改善的空间。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法，该方法可以有效地去除血浆、血清中绝大部分的蛋白和脂类物质，排除基质效应对临床检测结果的影响，提高了基质血清的稳定性，且制得的基质血清与临床样本的基体相一致。本专利技术的第一目的是提供了一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法，该方法包括以下步骤：S1.称取硫酸铵加入至阴性血浆或阴性血清中混合，离心取上清液I；S2.称取活性炭和硅藻土或右旋糖酐，加入生理盐水混匀，离心弃上清，留混合沉淀A；S3.向步骤S2中的混合沉淀A中加入步骤S1的上清液I，混匀离心，取上清液II；S4.称取活性炭和硅藻土或右旋糖酐，加入生理盐水混匀，离心弃上清，留混合沉淀B；S5.向步骤S4中的混合沉淀B中加入步骤S3的上清液II，混匀离心，取上清液III，过滤得基质血清。本专利技术专利技术人经过大量研究及试验发现，采用上述的方法可以有效去除血浆、血清中的绝大部分的蛋白质和脂类物质，排除了基质效应对临床检测结果的影响，使得制备的基质血清稳定性更强，进而通过基质血清稀释得到质控物稳定性也较强，能满足实际测量需要。通过加入硫酸铵至阴性血浆或阴性血清中，硫酸铵在血清或血浆溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来；通过在阴性血浆中加入活性炭和硅藻土，活性炭的多孔结构提供了大量的表面积，从而使其非常容易达到吸附杂质的作用。硅藻土具有微细多孔结构，具有强大的吸附能力；再次加入活性炭和硅藻土，使得吸附效果比一次性加入活性炭和硅藻土好，活性炭吸附杂质到一定程度后吸附与脱吸附处于平衡状态时，吸附效力会有所减弱。通过在阴性血清中加入活性炭和右旋糖酐，右旋糖酐起到分子筛的作用；再次加入活性炭和右旋糖酐，使得吸附效果比一次性加入活性炭和硅藻土好，活性炭吸附杂质到一定程度后吸附与脱吸附处于平衡状态时，吸附效力会有所减弱。其中脂类包括总胆固醇、甘油三酯和磷脂等。蛋白质包括总蛋白、白蛋白和球蛋白等。作为本专利技术所述方法的优选实施方式，所述步骤S2和步骤S4中，所述硫酸铵在阴性血浆中的质量浓度为50％～100％，所述活性炭和硅藻土的质量比为(5-8):(1-2)。在本专利技术的技术方案中，硫酸铵在阴性血浆中的质量浓度为50％～100％；活性炭和硅藻土通过设置特定的比例，使得阴性血浆中分离蛋白质和脂类的效果较佳，排除了基质效应对临床检测结果的影响，使得制备的基质血清稳定性更强。作为本专利技术所述方法的优选实施方式，所述步骤S2和步骤S4中，所述硫酸铵在阴性血清中的质量浓度为50％～100％，所述活性炭和右旋糖酐的质量比为(5-8):(1-2)。活性炭和右旋糖酐通过设置特定的比例，使得阴性血清分离蛋白质和脂类的效果较佳，排除了基质效应对临床检测结果的影响，使得制备的基质血清稳定性更强，提高临床检测结果的可靠性和准确性。作为本专利技术所述方法的优选实施方式，所述步骤S2和步骤S4中，所述生理盐水中氯化钠的浓度为0.9％。在本专利技术的技术方案中，在形成混合沉淀A和混合沉淀B过程中，均需加入浓度为0.9％的生理盐水用于浸泡活性炭/硅藻土/右旋糖苷，使其达到充分湿润的效果。作为本专利技术所述方法的优选实施方式，所述步骤S2和步骤S4中，离心速度为4000-5000rpm，离心时间为20-30min。本专利技术第二目的是提供了一种基质血清，其基质血清采用上述的分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法得到。本专利技术的基质血清用于稀释HCV阳性血清样本的检测结果较好，与理论值浓度相差最小；本专利技术稀释的HCV阳性血清样本，放置25℃环境能稳定保存5天，而对比例1～3均出现核酸降解的情况，甚至是检测不出。因此本专利技术的基质血清用于稀释HCV血清样本，具有稀释效果好，稳定性好的优点。本专利技术第三目的是提供了上述基质血清在制备HCVRNA质控物中的应用。本专利技术第四目的是提供了上述基质血清在制备HBsAg质控物中的应用。本专利技术第五目的是提供了上述基质血清在制备糖抗原125质控物中的应用。本专利技术第六目的是提供了上述基质血清在稀释临床样本中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1)本专利技术提供了一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法，该方法可以有效地去除血浆、血清中绝大部分的蛋白和脂类物质，排除基质效应对临床检测结果的影响，提高了基质血清的稳定性；2)本专利技术提供了一种基质血清，该基质血清与临床样本的基体相一致，主要用于制备质控物和稀释临床样本，其原理是采用去除不含待测物或干扰物的基质血清作为稀释液，达到降低检测样本基质效应的效果，提高临床检测结果的可靠性和准确性。具体实施方式为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1、一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法，包括以下步骤：S1.称取76.8g硫酸铵粉末，加入至100mL阴性血浆中，边搅拌边缓慢向溶液中加入，静置30min，4000rpm离心，20～30分钟，留取上清液I；S2.称取0.9g氯化钠，溶解在40mL灭菌纯水中，最后定容到100mL，形成浓度为0.9％的生理盐水。S3.称取0.5g活性炭和0.1g硅藻土，加入20mL步骤S2中制备的生理盐水震荡混匀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1.称取硫酸铵加入至阴性血浆或阴性血清中混合，离心取上清液I；/nS2.称取活性炭和硅藻土或右旋糖酐，加入生理盐水混匀，离心弃上清，留混合沉淀A；/nS3.向步骤S2中的混合沉淀A中加入步骤S1的上清液I，混匀离心，取上清液II；/nS4.称取活性炭和硅藻土或右旋糖酐，加入生理盐水混匀，离心弃上清，留混合沉淀B；/nS5.向步骤S4中的混合沉淀B中加入步骤S3的上清液II，混匀离心，取上清液III，过滤得基质血清。/n

【技术特征摘要】
1.一种分离血浆或血清中蛋白质和脂类的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.称取硫酸铵加入至阴性血浆或阴性血清中混合，离心取上清液I；
S2.称取活性炭和硅藻土或右旋糖酐，加入生理盐水混匀，离心弃上清，留混合沉淀A；
S3.向步骤S2中的混合沉淀A中加入步骤S1的上清液I，混匀离心，取上清液II；
S4.称取活性炭和硅藻土或右旋糖酐，加入生理盐水混匀，离心弃上清，留混合沉淀B；
S5.向步骤S4中的混合沉淀B中加入步骤S3的上清液II，混匀离心，取上清液III，过滤得基质血清。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2和步骤S4中，所述硫酸铵在阴性血浆中的质量浓度为50％～100％，所述活性炭和硅藻土的质量比为(5-8):(1-2)。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2和步骤S4中，所述硫酸铵在阴性血清中的质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：李尔华，高旭年，钟凤然，吴淑贤，
申请(专利权)人：广州邦德盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44