LFD-RPA可视化快速检测曼氏血吸虫核酸的引物、探针、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种LFD‑RPA可视化快速检测曼氏血吸虫核酸的引物、探针、试剂盒及方法，引物序列如SEQ ID NO.1～2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术以曼氏血吸虫COX1(SmCOX1)基因为靶序列设计了RPA引物及探针，并采用RPA扩增技术结合侧流层析引流试纸条法，实现了曼氏血吸虫核酸的敏感、快速可视化检测，对曼氏血吸虫基因组DNA检测限可达10fg，可检出曼氏血吸虫感染早期小鼠血清及粪便中的曼氏血吸虫SmCOX1靶核酸片段，操作简单且快捷，无需特殊仪器，反应温度与室温接近，可肉眼观察结果，有利于实现实验室及现场曼氏血吸虫感染中间宿主及终宿主的检测与监测。

【技术实现步骤摘要】
LFD-RPA可视化快速检测曼氏血吸虫核酸的引物、探针、试剂盒及方法
本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种LFD-RPA可视化快速检测曼氏血吸虫核酸的引物、探针、反应体系、试剂盒及检测方法。
技术介绍
曼氏血吸虫(S.mansoni)、日本血吸虫(Schistosomajaponicum)、和埃及血吸虫(S.haematobium)是对人类危害最大的3种血吸虫。其中，曼氏血吸虫目前主要集中流行于非洲、中东地区、加勒比海地区和南美洲北部巴西委内瑞拉等国家。不同种的血吸虫有其特定的中间宿主螺，光滑双脐螺(Biomphalariaglabrata)是曼氏血吸虫最重要的中间宿主之一，是生活在热带和亚热带淡水中的水生螺，而温度是影响和制约该螺分布和螺群规模的关键因素之一。我国是日本血吸虫病最主要的流行区，没有曼氏血吸虫病流行，但已在广东、深圳等地发现曼氏血吸虫中间宿主篙杆双脐螺的分布。随着全球气候变暖、一体化的实现，国际间交流的日益频繁，导致血吸虫感染者和宿主的活动性增大，大大增加了曼氏血吸虫病在我国传播的潜在风险。<br>血吸虫病的检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一对LFD-RPA可视化快速检测曼氏血吸虫核酸的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：/n上游引物：5'-TCAGGCGGTGGCGATCCTATTTTGTTTCAG-3'；/n下游引物：5'-Biotin-CCACCCCTGTGACACCACCAACCGTAAATA-3'。/n

【技术特征摘要】
1.一对LFD-RPA可视化快速检测曼氏血吸虫核酸的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：
上游引物：5'-TCAGGCGGTGGCGATCCTATTTTGTTTCAG-3'；
下游引物：5'-Biotin-CCACCCCTGTGACACCACCAACCGTAAATA-3'。


2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述下游引物的5'端为生物素化修饰，该对引物所扩增的特异性片段为曼氏血吸虫细胞色素C氧化酶亚基1的第945-1350bp间的序列，大小为406bp。


3.一种LFD-RPA可视化检测曼氏血吸虫核酸的探针，其特征在于，所述探针序列特异性结合于以下扩增序列之间，所述扩增序列为：
TCAGGCGGTGGCGATCCTATTTTGTTTCAGCATTTATTTTGGTTTTTTGGTCATCCAGAGGTTTATGTTTTGATCCTTCCGGGTTTTGGTATAGTTAGGCATATCTGTATGAGTCTAAGGAATAAAGATTCGTCGTTTGGTTATTATGGATTGATTTGCGCTATGGCTTCCATAGTATGCTTAGGTAGAGTAGTATGGGGTCATCATATGTTTATGGTTGGCTTTGATTCGTTAACTGGAGTGTTTTTTAGTTCTATTACTATGATAATAGGTGTTCCTACTGGTATTAAGGTGTTTTCATGACTTTATATGTTGAATAGTTGTGGTATGCGGGTTTTAGATCCCATAGTATGGTGATTAGTCGGTTTTATATTTTTATTTACGGTTGGTGGTGTCACAGGGGTGG；
所述探针序列长度为46-52nt,探针的5'端为荧光素或地高辛修饰，距离探针5'端的30-35nt的中部位置标记一个dspacer作为核酸外切酶的识别位点，探针的3'端为磷酸化修饰。


4.一种LFD-RPA可视化检测曼氏血吸虫核酸的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列为：
5'-FAM-CATCCAGAGGTTTATGTTTTGATCCTTCCG(THF)AGTTTTGGTATAGTTAGGC-C3Spacer-3'。


5.一种LFD-RPA可视化快速检测曼氏血吸虫核酸的引物与探针的组合，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：
上游引物：5'-TCAGGCGGTGGCGATCCTATTTTGTTTCAG-3'；
下游引物：5'-Biotin-CCACCCCTGTGACACCACCAACCGTAAATA-3'...

【专利技术属性】
技术研发人员：许静，邓王平，王丽萍，吕超，秦志强，冯婷，李石柱，周晓农，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心，
类型：发明
国别省市：上海;31