【技术实现步骤摘要】
LFD-RPA可视化通用检测日本血吸虫和曼氏血吸虫核酸的引物、探针、试剂盒及方法
本专利技术涉及生物检测
,尤其涉及一种LFD-RPA可视化快速通用检测日本血吸虫和曼氏血吸虫核酸的引物、探针、反应体系、试剂盒及检测方法。
技术介绍
血吸虫是一种古老的寄生虫病,经过70年的积极防治,我国血吸虫病感染率及感染度已降低至历史极低水平。然而,全球一体化、自然灾害、全球变暖等事件的发生加速了人员流动次数和频率、增加了境外输入性血吸虫病病例出现的可能性,使得我国血吸虫病防治工作面临着新挑战和新困难。尤其是,我国流行区尚现存大量日本血吸虫的中间宿主钉螺,血吸虫感染阳性钉螺的监测及传播风险评价是当前防治工作的重点。,目前针对钉螺是否感染的主要鉴别手段是压碎镜检法及逸蚴法。顾名思义,压碎镜检法,即通过压碎螺壳,在解剖镜或显微镜下用解剖针撕裂组织,观察是否存在不同生长期的虫体。逸蚴法,即通过加水培养螺,尾蚴逸出作为阳性判断标准。前者适用于小规模的钉螺调查,后者适用于大规模的钉螺调查,但两者都存在不同程度的漏检率,极大增大了对样本量 ...
【技术保护点】
1.一对LFD-RPA可视化快速通用检测日本血吸虫和曼氏血吸虫核酸的引物,其特征在于,所述引物的核苷酸序列为:/n上游引物:5'-TTCCTGGTGTCCTAAAACTGCGCACTAAGT-3';/n下游引物:5'-Biotin-AACACGAAGAGTGAACTGAGCCGGTTCCTT-3'。/n
【技术特征摘要】
1.一对LFD-RPA可视化快速通用检测日本血吸虫和曼氏血吸虫核酸的引物,其特征在于,所述引物的核苷酸序列为:
上游引物:5'-TTCCTGGTGTCCTAAAACTGCGCACTAAGT-3';
下游引物:5'-Biotin-AACACGAAGAGTGAACTGAGCCGGTTCCTT-3'。
2.如权利要求1所述的引物,其特征在于,所述下游引物的5'端为生物素化修饰,所述一对引物所扩增的特异性片段为日本血吸虫反转录转座子非长末端重复序列SjR2基因的第670-890bp间的序列,大小为221bp,扩增序列为:
TTCCTGGTGTCCTAAAACTGCGCACTAAGTTATATATTGGAGCTTTCAACGTTCGAACGTTATATCAAGTAGGACAACAGGCTTCCTTAGCTACGACTCTAGAATCCCGCTCCATCGATATCTGCTGCATCTCTGAAACGCGTATACAGGATCCAAGCACAGTCATTCGCTTGACTTCACCTTGTGAAAATAAGGAACCGGCTCAGTTCACTCTTCGTGTT。
3.一种LFD-RPA可视化通用检测日本血吸虫和曼氏血吸虫核酸的探针,其特征在于,所述探针序列特异性结合于以下扩增序列之间,所述扩增序列为:
TTCCTGGTGTCCTAAAACTGCGCACTAAGTTATATATTGGAGCTTTCAACGTTCGAACGTTATATCAAGTAGGACAACAGGCTTCCTTAGCTACGACTCTAGAATCCCGCTCCATCGATATCTGCTGCATCTCTGAAACGCGTATACAGGATCCAAGCACAGTCATTCGCTTGACTTCACCTTGTGAAAATAAGGAACCGGCTCAGTTCACTCTTCGTGTT;
所述探针序列长度为46-52nt,探针的5'端为荧光素或地高辛修饰,距离5'端的30-35nt的中部位置标记一个dspacer作为核酸外切酶的识别位点,探针的3'端为磷酸化修饰。
4.一种LFD-RPA可视化快速通用检测日本血吸虫和曼氏血吸虫核酸的探针,其特征在于,所述探针的核苷酸序列为:
5'-FAM-TTCCTGGTGTCCTAAAACTGCGCACTAAGT(THF)ATATATTGGAGCTTT-C3Spacer-3'。
5.一种LFD-RPA可视化快速通用检测日本血吸虫和曼氏血吸虫核酸的引物与探针的组合,其特征在于,所述引物的核苷酸序列为:
上游引物:5'-TTCCTGGTGTCCTAAAACTGCGCACTAAGT-3';
下游引物:5'-Biotin-AA...
【专利技术属性】
技术研发人员:王丽萍,许静,邓王平,吕超,秦志强,冯婷,李石柱,周晓农,
申请(专利权)人:中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心,
类型:发明
国别省市:上海;31
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