一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻糖合酶的方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种谷氨酸棒杆菌利用EF‑Tu启动子表达海藻糖合酶的方法和应用，通过将谷氨酸棒杆菌ATCC13032中翻译延伸因子EF‑Tu的启动子P

【技术实现步骤摘要】
一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻糖合酶的方法和应用
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻糖合酶的方法和应用。
技术介绍
海藻糖是一种由α,α-1,1-糖苷键联结葡萄糖分子组成的非还原性双糖，其稳定性远超麦芽糖、蔗糖、葡萄糖等其他糖类小分子。海藻糖对生物体组织、细胞和生物大分子具有特异性保护作用。可用于保持细胞活性，防止食品劣化、保持食品新鲜风味、提升食品品质，增强保湿类化妆品功能。因此，海藻糖在医药、食品和化妆品行业具有广阔应用前景。海藻糖可采用化学合成法、微生物发酵法和酶转化法生产。化学合成法生产海藻糖产率低、分离困难，难以实现工业化。微生物发酵法转化率低，发酵液副产物多，使海藻糖的分离纯化困难。日本味之素利用变异谷氨酸生产菌，发酵生产海藻糖产量为40g/L。酶转化法生产海藻糖工艺中海藻糖合成酶以麦芽糖为底物生成海藻糖，且不需要消耗能量物质。海藻糖合成酶可催化麦芽糖和海藻糖之间的异构化反应，即α,α-1,4糖苷键和α,α-1,1糖苷键之间的转化。酶法转化合成海藻糖，转本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻糖合酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n以

【技术特征摘要】
1.一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻糖合酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
以C.glutamicumATCC13032基因组为模板，将PEF-Tu启动子置于海藻糖合酶基因Cgtrs前端，获得PEF-Tu-Cgtrs基因片段；
将PEF-Tu-Cgtrs基因片段克隆至pXMJ19质粒HindIII、XbaI位点处，获得pXMJ19-PEF-Tu-Cgtrs质粒；
将pXMJ19-PEF-Tu-Cgtrs质粒电转化至C.glutamicumATCC13032中，获得pXMJ19-PEF-Tu-Cgtrs/13032菌株。


2.根据权利要求1所述的一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻糖合酶的方法，其特征在于：所述PEF-Tu启动子序列如SEQIDNO.1-4所示。


3.根据权利要求1所述的一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻糖合酶的方法，其特征在于：所述海藻糖合酶基因Cgtrs序列如SEQIDNO.5-35所示。


4.根据权利要求1所述的一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻糖合酶的方法，其特征在于：所述获得PEF-Tu-Cgtrs基因片段过程为
利用引物PEF-Tu-trsHindIIIF1和引物PEF-Tu-trsR1PCR扩增PEF-Tu启动子基因片段，利用...

【专利技术属性】
技术研发人员：满在伟，崔慧慧，刘典典，陈一鸣，蒋心怡，郭静，
申请(专利权)人：山东恒仁工贸有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37