靶向沉默辣椒疫霉纤维素合酶3的植物表达载体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了可通过寄主诱导的基因沉默有效干扰辣椒疫霉纤维素合酶3基因的植物表达载体及其应用。本发明专利技术的植物表达载体可以转录形成具有反向互补结构的双链RNA，由SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的核酸序列分别以正、反向两次插入载体构成。本发明专利技术还公开了这些表达载体在防治辣椒疫霉引起的植物病害上的应用。表达本发明专利技术涉及的载体的植物对辣椒疫霉的抗病性明显增强，侵染这些植物的辣椒疫霉的纤维素合酶3基因表达受到了显著抑制，由于纤维素合酶3基因对于辣椒疫霉的发育和致病是必需的，因此本专利涉及的植物表达载体可有效抑制辣椒疫霉对植物的侵染，为防治辣椒疫霉引起的相关病害提供了一种有效途径。

【技术实现步骤摘要】
靶向沉默辣椒疫霉纤维素合酶3的植物表达载体及其应用
本专利技术涉及农业生物
，具体涉及两种具有不同二级结构转录本的抑制辣椒疫霉纤维素合酶3基因表达的植物表达载体，以及这些植物表达载体在防治辣椒疫霉引起的植物病害上的应用。
技术介绍
辣椒疫霉(Phytophthoracapsici)是一种重要植物病原卵菌，在世界各地均有分布，可侵染茄科、豆科及大多数葫芦科的70多种植物，引起猝倒、萎蔫和根、茎、果实腐烂，从苗期至果期均能发病，造成严重的经济损失。辣椒疫霉引起的辣椒疫病是一种毁灭性病害，可经雨水、土壤和气流等途径传播，造成叶片枯萎、果实腐烂，甚至全株枯死等症状，对作物产量、品质影响极大，严重时可导致减产50％以上。对辣椒疫霉的防治主要依赖于化学防治，但由于杀卵菌剂的种类较少，长期单一使用化学农药已导致辣椒疫霉对多种化学农药产生抗药性，且不断增大剂量施用化学农药对于环境造成严重污染。此外，对辣椒疫霉具有抗性的植物品种资源匮乏，亟需开发新型手段防治辣椒疫霉引起的植物病害。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向辣椒疫霉纤维素合酶3基因并使其沉默的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的序列为序列表中序列1或者序列表中序列2。/n

【技术特征摘要】
1.一种靶向辣椒疫霉纤维素合酶3基因并使其沉默的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的序列为序列表中序列1或者序列表中序列2。


2.一种靶向辣椒疫霉纤维素合酶3基因并使其沉默的植物表达载体，其特征在于，是由SEQIDNo.1或SEQIDNo.2所示的核酸序列分别以正、反向两次插入到对应的植物表达载体构成；优选的，所述植物表达载体是将如式(I)所示编码基因克隆到出发载体，构成可表达靶向辣椒疫霉纤维素合酶3基因并使其沉默的具有反向互补二级结构的RNA分子的重组表达载体；SEQ正向-X-SEQ反向(I)；式(I)中，所述SEQ正向的序列为序列表中序列1或者序列表中序列2；所述SEQ反向的序列与所述SEQ正向的序列反向互补；所述X是所述SEQ正向与所述SEQ反向之间的间隔序列，所述X与所述SEQ正向及所述SEQ反向均不互补。


3.根据权利要求2所述的植物表达载体，其特征在于，所述出发载体为pEarlyGate100，式(I)中，X为UBC基因内含子或植物丙酮酸磷酸激酶基因内含子，所述UBC基因内含子序列如序列表中序列3的自5’端第3307-3378位核苷酸序列所示，所述物丙酮酸磷酸激酶基因内含子如序列表中序列4的自5’端第3467-3845位核苷酸序列所示。


4.根据权利要求3所述的植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体的构建方法为将序列1所述的片段先正向插入pENTR1a质粒得到重组质粒pENTR1a-5’Ces，再将序列反向插入pENTR1a-5’Ces载体的UBC基因内含子的3’端，将得到的重组质粒再利用LR反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘西莉，王治文，钟珊，高翔，李瑜，张博瑞，张思聪，李腾蛟，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11