一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法。用去离子水及无水乙醇对绵羊毛干进行洗涤与浸泡处理，待晾干后用剪刀剪碎，得到毛干碎屑样本，利用inhibitEX Buffer、蛋白酶K溶液、二硫苏糖醇溶液及Buffer AL对样品进行孵育消化，随后离心取上清液加无水乙醇溶解杂质，最后将混合液移入QIAamp收集柱中，用Buffer AW1和Buffer AW2进行洗涤，最终用Buffer ATE将DNA洗脱得到绵羊毛干线粒体DNA。本发明专利技术实现了对绵羊毛干中线粒体DNA的充分提取，浓度高杂质少，提高毛干线粒体DNA的提取效率及纯度，有利于后续鉴定及各种分子生物学实验研究等，适用性广，简单且易于操作。

【技术实现步骤摘要】
一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法
本专利技术属于分子生物
的一种线粒体DNA提取方法，具体涉及一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法。
技术介绍
动物毛发由毛干和毛根两部分组成，主要成分为角蛋白，这种结构使其具有不易腐烂的特点，也因此毛发成为了考古学和法医学的常用对象之一，其中所携带的遗传物质为考古发现和法医鉴定提供了许多信息。比如，利用绵羊皮毛作为纺织纤维在我国有着悠久的历史，在诸多考古遗址中都有毛纤维纺织品文物的发现，提取其中的DNA来科学有效地鉴定纺织品文物中绵羊皮毛的种类，对追溯纺织品起源和研究人类文明具有十分重要的意义。毛发中的DNA主要集中在毛根的毛囊细胞中，毛干部分仅含有少量线粒体DNA，因而一般利用毛发进行遗传物质提取时常选用毛根部分。虽然在从绵羊体上采集的或脱落的毛发中绝大多数都带有完整的毛囊，但在考古学和法医学鉴定中，常常会发生毛囊己经丢失或者毛根部分己经被破坏的情况，因此则需特定地针对毛干样本进行线粒体DNA的提取。但因毛干几乎所有成分都是角蛋白，从中提取遗传物质相对比较困难，但作为绵羊组织，毛干具有细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法，其特征在于，方法步骤如下：/n(1)绵羊毛干的预处理：/n(2)绵羊毛干的裂解消化：向每个装有毛干样品的EP管中加入inhibitEX Buffer试剂，涡旋至混合均匀，加热，涡旋，接着向每个EP管中加入蛋白酶K溶液、二硫苏糖醇溶液和Buffer AL试剂，涡旋混匀，再孵育至消化完全，获得毛干消化液；/n(3)绵羊毛干线粒体DNA的抽提，获得DNA溶液提取结果。/n

【技术特征摘要】
1.一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法，其特征在于，方法步骤如下：
(1)绵羊毛干的预处理：
(2)绵羊毛干的裂解消化：向每个装有毛干样品的EP管中加入inhibitEXBuffer试剂，涡旋至混合均匀，加热，涡旋，接着向每个EP管中加入蛋白酶K溶液、二硫苏糖醇溶液和BufferAL试剂，涡旋混匀，再孵育至消化完全，获得毛干消化液；
(3)绵羊毛干线粒体DNA的抽提，获得DNA溶液提取结果。


2.根据权利要求1所述的一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法，其特征在于：所述(1)具体为：
称取绵羊毛干样品，放入培养皿中，用去离子水冲洗揉搓至无明显杂质脏污后，换干净去离子水浸泡，后将毛干从水中取出，用滤纸吸干水分，放入新的培养皿中，加无水乙醇冲洗揉搓1遍，换新无水乙醇浸泡，后将毛干从无水乙醇中取出，用滤纸吸干乙醇，放入新的培养皿中；晾干后用剪刀将毛干剪成小段，分装至EP管中。


3.根据权利要求1所述的一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法，其特征在于：在所述(2)的孵育过程中，定时翻动EP管，并视情况补加蛋白酶K溶液和二硫苏糖醇溶液。


4.根据权利要求1或3所述的一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，蛋白酶K溶液浓度为20mg/ml，二硫苏糖醇溶液浓度为2mol/L。


5.根据权利要求1所述的一种从绵羊毛干中提取线粒体DNA的方法，其特征在于：所述(3)具体为：
(3.1)将毛干消化液离心析出沉淀，将上清液转移至EP管中，加无水乙醇，涡旋15s后获得混合液；
(3.2)接着取600μl混合液到QIAamp收集柱中，收集柱下装有收集管，盖上盖子，离心，将Q...

【专利技术属性】
技术研发人员：张夏颖，吴小锋，周旸，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33