一种全血DNA提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术属于试剂盒技术领域，尤其为一种全血DNA提取试剂盒，包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液，所述缓冲液由10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，所述裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成，所述蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，所述纯化液由7.5M的氯化锂和氯化钠组成，所述洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris‑HCL和250％的无水乙醇组成。其有益效果是，本发明专利技术使用的试剂中不含苯、氯仿等有毒物质，对人体无危害，提取纯化步骤简单，操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高，便于工作人员进行操作，降低了工作人员的劳动强度，方便研究人员进行后续的实验。

【技术实现步骤摘要】
一种全血DNA提取试剂盒及提取方法
本专利技术属于试剂盒
，具体涉及一种全血DNA提取试剂盒及提取方法。
技术介绍
随着分子生物学技术的发展，基因组水平上的研究已成为热点，在分子遗传学和分子流行病学中，无论是全基因组关联分析（GWAS）、候选SNP位点基因分型，还是基因组文库的建立，都需要从各类样本中提取基因组DNA，由于血液样本取材方便，所含基因组DNA丰富可靠，因此上述许多研究均以血液作为样本提取完整的基因组DNA。虽然传统的酚氯仿提取核酸的方法能够获得质量较好的核酸，但是其中用到的化学物质却有着不可忽视的毒性，而且整个提取过程耗时较长，浪费大量的时间和人力物力，进一步来说，现在普及的柱提法核酸提取试剂也能获得质量很好的核酸，毒性也可以忽略，但是耗费的时间同样不可忽视。
技术实现思路
为解决上述
技术介绍
中提出的问题。本专利技术提供了一种全血DNA提取试剂盒及提取方法，具有操作过程安全便捷、节省了大量的时间和人力物力的特点。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种全血DNA提取试剂盒，包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液。优选的，所述缓冲液由10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，所述裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成。优选的，所述蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，所述纯化液由7.5M的氯化锂和氯化钠组成。优选的，所述洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris-HCL和250％的无水乙醇组成，所述洗涤液2由5mM的Tris-HCL、50mM的NaCL和80％的无水乙醇组成。优选的，所述洗脱液由10mM的Tris、1mM的EDTA组成。一种全血DNA提取方法，包括如下步骤：步骤一：取50～200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，然后向该离心管中加入0.3倍体积的缓冲液，震荡混匀1min，室温静置10min，加入离心机，2000rpm低速离心5min，吸弃上层液体；步骤二：再向每个1.5m离心管中加入等于血液样本8倍体积的红细胞裂解液，将血液样本加入该离心管中，手动振荡混匀，4℃放置20～30min后，2000rpm低速离心15min；离心结束后，吸弃上清液；步骤三：向上述液体中加入20ul蛋白酶K溶液，吹打混匀后，转移至2.0ml离心管中，65℃水浴0.5～3h，沉淀消失后37℃水浴过夜；步骤四：向水浴过夜后的混合液中分别加入800μl纯化液，振荡混匀，放入-20℃冰箱30min～1h；然13000rpm高速离心10min，将离心后的上清液倒入新的2.0ml离心管中；步骤五：向离心管中加入500～800ul洗涤液1和洗涤液2，将该离心管震荡混匀1min，静置30s后，然后吸弃上清液。步骤六：加入30～60ul洗脱液，放置2min，12000rpm，离心2min，收集液体，即为DNA溶液。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术使用的试剂中不含苯、氯仿等有毒物质，对人体无危害，提取纯化步骤简单，操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高，便于工作人员进行操作，降低了工作人员的劳动强度，方便研究人员进行后续的实验。2、本专利技术通过设置缓冲液、蛋白酶K和纯化液，缓冲液能够将全血样本内的红白细胞进行分离，尽可能去除人基因组DNA的影响和干扰，蛋白酶K能够水解破碎细菌细胞，并且降解蛋白，释放细菌基因组DNA，提高了提取试剂盒的提取的工作效率，纯化液能够沉淀糖类、脂类、大量蛋白质和高分子RNA。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为本专利技术的全血DNA提取方法示意图图2为本专利技术的缓冲液配制示意图；图3为本专利技术的裂解液配制示意图；图4为本专利技术的蛋白酶K配制示意图；图5为本专利技术的纯化液配制示意图；图6为本专利技术的洗涤液1配制示意图；图7为本专利技术的洗涤液2配制示意图；图8为本专利技术的洗脱液配制示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1请参阅图1-8，本专利技术提供以下技术方案：一种全血DNA提取试剂盒，包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液，缓冲液能够将全血样本内的红白细胞进行分离，尽可能去除人基因组DNA的影响和干扰，蛋白酶K能够水解破碎细菌细胞，并且降解蛋白，释放细菌基因组DNA，提高了提取试剂盒的提取的工作效率，纯化液能够沉淀糖类、脂类、大量蛋白质和高分子RNA。具体的，所述缓冲液由10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，所述裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成。具体的，所述蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，所述纯化液由7.5M的氯化锂和氯化钠组成。具体的，所述洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris-HCL和250％的无水乙醇组成，所述洗涤液2由5mM的Tris-HCL、50mM的NaCL和80％的无水乙醇组成，所述洗脱液由10mM的Tris、1mM的EDTA组成。一种全血DNA提取方法，包括如下步骤：步骤一：取50～200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，然后向该离心管中加入0.3倍体积的缓冲液，震荡混匀1min，室温静置10min，加入离心机，2000rpm低速离心5min，吸弃上层液体；步骤二：再向每个1.5m离心管中加入等于血液样本8倍体积的红细胞裂解液，将血液样本加入该离心管中，手动振荡混匀，4℃放置20～30min后，2000rpm低速离心15min；离心结束后，吸弃上清液；步骤三：向上述液体中加入20ul蛋白酶K溶液，吹打混匀后，转移至2.0ml离心管中，65℃水浴0.5～3h，沉淀消失后37℃水浴过夜；步骤四：向水浴过夜后的混合液中分别加入800μl纯化液，振荡混匀，放入-20℃冰箱30min～1h；然13000rpm高速离心10min，将离心后的上清液倒入新的2.0ml离心管中；步骤五：向离心管中加入500～800ul洗涤液1和洗涤液2，将该离心管震荡混匀1min，静置30s后，然后吸弃上清液。步骤六：加入30～60ul洗脱液，放置2min，12000rpm，离心2min，收集液体，即为DNA溶液，本专利技术使用的试剂中不含苯、氯仿等有毒物质，对人体无危害，提取纯化步骤简单，操作过程安全便捷、基因组DNA产物含本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液。/n

【技术特征摘要】
1.一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液。


2.根据权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：所述缓冲液由10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，所述裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成。


3.根据权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：所述蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，所述纯化液由7.5M的氯化锂和氯化钠组成。


4.根据权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：所述洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris-HCL和250％的无水乙醇组成，所述洗涤液2由5mM的Tris-HCL、50mM的NaCL和80％的无水乙醇组成。


5.根据权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：所述洗脱液由10mM的Tris、1mM的EDTA组成。


6.一种全血DNA提取方法，包括如下步骤：其...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑德显，陈德跃，任洪迪，胡芹菊，胡晓菁，熊健，杨兴旺，
申请(专利权)人：昆明培根生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53