濒危半红树植物莲叶桐核酸提取的方法技术

本发明专利技术属于分子生物学方面，具体涉及一种针对濒危半红树植物莲叶桐核酸的提取方法。采用改进的裂解液对细胞进行裂解，并通过一定比例的Tris平衡酚‑氯仿‑异戊醇混合液进行抽提，同时为了更彻底的清除糖蛋白，又用等体积的Tris平衡酚进行抽提。再用改进体积的醋酸钠‑异丙醇进行沉淀DNA、纯化DNA，从而获得高质量的基因组DNA。采用本发明专利技术提供的濒危半红树植物莲叶桐核酸提取方法提取的DNA浓度高、纯度高，还不易降解，同时可以防止超氧阴离子自由基或者活性氧对DNA的损害，为后续的PCR扩增、分子标记技术开发、基因组文库构建等分子生物学实验奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
濒危半红树植物莲叶桐核酸提取的方法
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种濒危半红树植物莲叶桐核酸提取的方法。
技术介绍
莲叶桐(Hernandianymphaeifolia(J.Presl)Kubitzki)是莲叶桐科、莲叶桐属常绿乔木，莲叶桐材料因富含多糖、多酚，成分特殊，提取液极其粘稠，且容易褐化，所以核酸提取较困难。传统的SDS法(1)称取0.2g样品用液氮研磨成粉,置于1.5ml离心管中，加入800μL经65℃预热的SDS裂解液(100mmol/LTris-HCl,pH8.0,50mmol/LEDTA,500mmol/LNaCl,2％β疏基乙醇(v/v),5％SDS(m/v)),放入65℃水浴锅中保温20min。(2)于4℃,12000rpm离心10min.上清移入新的1.5ml离心管中，加入等体积的KAc,轻轻旋转混匀，静置片刻，而后4℃,12000rpm/min离心10min。(3)上清移入新的1.5ml离心管中,加入2倍体积的预冷的无水乙醇,轻轻混匀,在－20℃条件下静置30min,于4℃,1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.莲叶桐核酸提取的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)取适量新鲜莲叶桐叶片，置于预冷的研钵中，加入液氮充分研磨，将粉末转至离心管中，加入预热温度为65℃的裂解液，混匀，加入RNA酶，涡旋振荡1min；裂解液组成为：100mmol/L Tris-HClpH8.0，50mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，2％(v/v)β疏基乙醇，5％(m/v)SDS，2％(m/v)PVP；/n(2)混匀后65℃水浴10min，加入等体积的抽提液振荡混匀，抽提液组成为Tris平衡酚︰氯仿︰异戊醇＝25︰24︰1，在转速为11000～135000rpm室温下离心10～15min；/n(3)取...

【技术特征摘要】
1.莲叶桐核酸提取的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取适量新鲜莲叶桐叶片，置于预冷的研钵中，加入液氮充分研磨，将粉末转至离心管中，加入预热温度为65℃的裂解液，混匀，加入RNA酶，涡旋振荡1min；裂解液组成为：100mmol/LTris-HClpH8.0，50mmol/LEDTA，500mmol/LNaCl，2％(v/v)β疏基乙醇，5％(m/v)SDS，2％(m/v)PVP；
(2)混匀后65℃水浴10min，加入等体积的抽提液振荡混匀，抽提液组成为Tris平衡酚︰氯仿︰异戊醇＝25︰24︰1，在转速为11000～135000rpm室温下离心10～15min；
(3)取上清液转入一新离心管加入等体积的Tris平衡酚振荡混匀，在转速为11000～135000rpm4℃离心15～20min...

【专利技术属性】
技术研发人员：王勇，倪靓，谭佐莉，张修含，于靖，张世杰，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：海南;46