青钱柳的提取物及其抗类风湿性关节炎应用制造技术

本发明专利技术涉及一种从青钱柳提取的活性部位，所述活性部位为青钱柳的正丁醇萃取浓缩液，所述活性部位的主要成分为异戊烯基黄酮类化合物，所述异戊烯基黄酮类化合物的结构通式如下：

【技术实现步骤摘要】
青钱柳的提取物及其抗类风湿性关节炎应用
本专利技术涉及青钱柳的提取物，尤其涉及异戊烯基黄酮类化合物，及其提取方法以及应用。
技术介绍
青钱柳[Cyclocaryapaliurus(Bata1)Iljinsk]系胡桃科(Juglaruiaceae)青钱柳属植物，是中国特有的单种属植物，广泛分布于安徽、江苏、浙江等地。20世纪80年代以来，国内外专家学者主要针对青钱柳的资源培育、化学成分、生物活性和产品开发研究等方面进行了大量研究。结果表明，青钱柳具有多种对人体有益的生理活性和药理功能。异戊烯基黄酮是在黄酮母核上连有异戊烯基的一类化合物，相比于黄酮类化合物，显示了更加突出的生物活性，主要包括抗炎和免疫调节、心血管保护、改善代谢性疾病、改善骨质疏松、促进干细胞分化、神经保护、抗肿瘤、抗衰老及生殖作用等方面，具有广阔的应用前景。异戊烯基黄酮类代表性成分淫羊藿苷主要可通过钠通道阻滞阻断β受体和中枢降压作用的机制发挥降压作用。淫羊藿抑制血管平滑肌Ca2+内流，直接扩张血管平滑肌而降低血管阻力。也发现淫羊藿苷可显著改善痛风性关节炎损关节的肿胀度、降低步态评分、改善滑膜组织损伤，在80mg/kg-1剂量时与秋水仙碱作用相当，并发现在淫羊藿苷治疗组关节积液中的白血病数，IL-1β，IL-6，TNF-α和PGE2均显著降低，提示淫羊藿苷改善痛风与其抗炎作用有关。淫羊藿总黄酮还可以通过选择性地阻断β1受体和降低血浆内皮素含量，直接扩张血管来降低血压。青钱柳叶含有多种药用化学成分，包括胡萝卜素、蛋白质、黄酮类、多糖类、三萜类等化合物，其中异戊烯基黄酮因其结构和药理活性的多样性而受到广泛关注。目前关于该类成分多集中于降糖和炎症的研究，关于其他方面的活性以及机制研究较少，因此具体阐明异戊烯基黄酮其他应用活性及作用机制对广泛的临床应用和创新药物研发具有重大意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术目的是提供青钱柳异戊烯基黄酮活性部位和异戊烯基黄酮类化合物的提取方法及抗类风湿性关节炎活性成分和药效物质基础进行系统研究。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：一种异戊烯基黄酮类化合物化合物，结构通式如下：其中，R7选自L-鼠李糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-木糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(4→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-脱氧呋喃糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-鸡纳糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(3→1)-L-鼠李糖、L-鼠李糖；R8选自氢、D-葡萄糖、L-鼠李糖-(2→1)-D-葡萄糖、D-木糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(4→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-脱氧呋喃糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-鸡纳糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(3→1)-L-鼠李糖、L-鼠李糖；R9选自羟基，甲氧基、乙氧基、丙氧基；R10选自优选的，所述异戊烯基黄酮类化合物化合物，其结构式如下：本专利技术还提供一种从青钱柳提取上述异戊烯基黄酮类化合物的方法，包括以下步骤：S1、将青钱柳叶用乙醇/水加热回流提取，浓缩得浸膏；S2、将浸膏用水分散，用正丁醇萃取，并将萃取液浓缩，得正丁醇萃取浓缩液；S3、采用HPLC-DAD、TLC和UPLC-MS/MS方法对正丁醇萃取浓缩液进行分析及分离纯化。优选的，S1中，青钱柳叶经过干燥粉碎处理。优选的，S1中，乙醇的浓度为70％，青钱柳叶质量与乙醇的比值为1:10，加热的温度为120℃，加热的时间为2h，浓缩的温度为60℃，浓缩的时间为2-3天。优选的，S2中，利用正丁醇萃取三次，青钱柳叶质量与每次使用的正丁醇体积的比值为1:10，浓缩的温度为65℃，浓缩的时间为72-96小时。优选的，S3中，正丁醇萃取部位经大孔树脂EtOH:H2O(0:100-0:95)梯度洗脱，HPLC-DAD对样品进行分析，浓缩合并得到5个部位(a-e)；a-e部位TLC薄层分析，10％浓硫酸/乙醇加热显色，其中Fr.C薄层板显示黄色条带。首先对Fr.C采用聚酰胺柱色谱，去除色素，鞣质等干扰性成分，HPLC-DAD分析合并，得到6个部位Fr.C1-C6，Fr.C1主要为黄酮类吸收，初步确定Fr.C1部位为黄酮类富集部位；接着采用HW-40C和反向ODS柱层析，整个分离过程用UPLC-MS/MS方法对异戊烯基黄酮进行追踪，通过紫外特征吸收峰对异戊烯基黄酮类化合物有效分离；最后采用半制备高效液相对目标化合物进行纯化。本专利技术还要求保护一种活性部位，所述活性部位为如上述的正丁醇萃取浓缩液。本专利技术还要求保护如上述的活性部位在制备抗类风湿性关节炎的药物中的应用。进一步的，所述异戊烯基黄酮分离纯化具体过程为：本专利技术采用HPLC-DAD、TLC和UPLC-MS/MS方法对正丁醇萃取浓缩液进行追踪、分析及分离纯化。正丁醇部位445g经大孔树脂层析柱，采用乙醇-水系统(0:100,30:70,50:50,70:30,95:5)等度洗脱，综合HPLC-DAD分析结果，将青钱柳正丁醇部位初步划分位五个部位(Fr.a-e)。Fr.b(106g)经聚酰胺层析柱，采用乙醇-水系统(0:100-95:5)洗脱，根据HPLC-DAD分析结果分为六个部分(Fr.b1-b6)。Fr.c(107g)经聚酰胺层析柱，采用乙醇-水系统(0:100-95:5)洗脱，根据HPLC-DAD分析结果分为六个部分(Fr.c1-c6)，Fr.c1(22.9g)经HW-40C柱层析采用甲醇-水系统(0:100-75:5)洗脱，经HPLC-DAD分析，合并相同馏分后得到Fr.c1.1-Fr.c1.12。Fr.c1.2经ODS-AA中压柱，采用甲醇-水系统(5:95-75:5)洗脱，经HPLC-DAD分析，得到Fr.c1.2.1-Fr.c1.2.45。Fr.c1.2.23-Fr.c1.2.25经半制备液相(ACN-H2O21％,0.1％CH3COOH,v/v,220nm,3mL/min)得到化合物28(8.6mg),29(5.9mg)and30(7.4mg)。Fr.c1.2.29-Fr.c1.2.30经半制备液相(ACN-H2O24％,v/v,220nm,3mL/min)得到化合物27(13.6mg),35(11.7mg)and40(15.7mg).Fr.c1.2.35-Fr.c1.2.36经半制备液相(ACN-H2O31％,v/v,220nm,3mL/min)分离得到32(13.6mg)and33(6.4mg)。Fr.c1.3经ODS-AA中压柱，采用甲醇-水系统(5:95-75:5)洗脱，经HPLC-DAD分析，得到Fr.c1.3.1-Fr.c1.3.28。Fr.c1.3.13经半制备液相(ACN-H2O18％,0.1％CH3COOH,v/v,220nm,3mL/min)得到化合物36(10.8mg),37(4.9mg)。Fr.c1.3.15本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种活性部位，其特征在于，所述活性部位为青钱柳的正丁醇萃取浓缩液，所述活性部位的主要成分为异戊烯基黄酮类化合物，所述异戊烯基黄酮类化合物的结构通式如下：/n

【技术特征摘要】
20200420 CN 20201031224721.一种活性部位，其特征在于，所述活性部位为青钱柳的正丁醇萃取浓缩液，所述活性部位的主要成分为异戊烯基黄酮类化合物，所述异戊烯基黄酮类化合物的结构通式如下：



其中，R7选自L-鼠李糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-木糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(4→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-脱氧呋喃糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-鸡纳糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(3→1)-L-鼠李糖、L-鼠李糖；
R8选自氢、D-葡萄糖、L-鼠李糖-(2→1)-D-葡萄糖、D-木糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(4→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-脱氧呋喃糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-鸡纳糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(3→1)-L-鼠李糖、L-鼠李糖；
R9选自羟基，甲氧基、乙氧基、丙氧基；
R10选自


2.根据权利要求1所述的活性部位，其特征在于，所述异戊烯基黄酮类化合物的结构式如下：





3.一种从青钱柳提取异戊烯基黄酮类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将青钱柳叶用乙醇/水加热回流提取，浓缩得浸膏；
S2、将浸膏用水分散，用正丁醇萃取，并将萃取液浓缩，得正丁醇萃取浓缩液；
S3、采用HPLC-DAD、TLC和UPLC-MS/MS方法对正丁醇萃取浓缩液进行分析及分离纯化。


4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，S1中，乙醇的浓度为70％，青钱柳叶质量与乙醇的比值为1:10，加热的温度为120℃，加热的时间为2h，浓缩的温度为60℃，浓缩的时间为2-3天。


5.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，S2中，利用正丁醇萃取三次，青钱柳叶质量与每次使用的正丁醇体积的比值为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐康平，姜德建，成飞，吴建平，徐杨蕊，周澄杰，陈祖辉，刘学武，曾宏亮，桂瑞，欧赛玉，王钰艳，李桂花，
申请(专利权)人：中南大学，湖南清雅健康服务有限公司，湖南和然生物科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43