青钱柳的提取物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及青钱柳的提取物，尤其涉及1号活性部位和2号活性部位及其提取方法以及应用。所述1号活性部位为青钱柳的二氯甲烷萃取浓缩液，该1号活性部位主要成分为达玛烷型四环三萜化合物。本发明专利技术还提供了1号活性部位、2号活性部位、达玛烷型四环三萜化合物和异戊烯基黄酮类化合物的提取方法，以及它们对改善记忆力活性成分和药效物质基础、降脂活性成分和药效物质基础、增强免疫力活性成分和药效物质基础进行系统研究。实验表明，1号活性部位、2号活性部位能有效改善记忆力、降脂、增强免疫力。达玛烷型四环三萜化合物和异戊烯基黄酮类化合物作为它们的活性组分，其作用也明显。

【技术实现步骤摘要】
青钱柳的提取物及其应用
本专利技术涉及青钱柳的提取物，尤其涉及1号活性部位和2号活性部位及其提取方法以及应用。
技术介绍
青钱柳[Cyclocaryapaliurus(Bata1)Iljinsk]系胡桃科(Juglaruiaceae)青钱柳属植物，是中国特有的单种属植物，广泛分布于安徽、江苏、浙江等地。20世纪80年代以来，国内外专家学者主要针对青钱柳的资源培育、化学成分、生物活性和产品开发研究等方面进行了大量研究。结果表明，青钱柳具有多种对人体有益的生理活性和药理功能。三萜类化合物(triterpenoids)是自然界中分布广、结构类型多样的一类重要天然产物，具有降糖降压、抗炎、降血脂、抗肿瘤等多种生物活性。研究发现三萜类化合物具有很好的抗炎活性，在不影响细胞活力的情况下，可以抑制NO产生，且其效果优于一氧化氮合酶(NOS)抑制剂，此外对LPS诱导的TNF-α和IL-1β有抑制活性。有研究发现三萜皂苷能显著降低动脉血压，降低自发性高血压大鼠血浆中的肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮(ALD)含量，对肾性高血压及自发性高血压大鼠心肌肥厚具有一定的抑制作用，并且可以逆转自发性高血压大鼠左心室重构的病理状态，其机制分别与调控，AngⅡ/p38MAPK通路诱导的炎症反应和抑制心肌组织炎症因子TGF-β1的表达有关。青钱柳叶含有多种药用化学成分，包括胡萝卜素、蛋白质、黄酮类、多糖类、三萜类等化合物，其中达玛烷型三萜和异戊烯基黄酮因其结构和药理活性的多样性而受到广泛关注。目前关于这两类成分多集中于降糖和炎症的研究，关于其他方面的活性以及机制研究较少，因此具体阐明达玛烷型三萜和异戊烯基黄酮其他应用活性及作用机制对广泛的临床应用和创新药物研发具有重大意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术目的是提供1号活性部位、2号活性部位、达玛烷型四环三萜化合物和异戊烯基黄酮类化合物的提取方法及应用，对改善记忆力活性成分和药效物质基础、降脂活性成分和药效物质基础、增强免疫力活性成分和药效物质基础进行系统研究。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：一种达玛烷型四环三萜化合物，其结构如式Ⅰ或式Ⅱ所示：其中，R1选自氢、C1-C6烷基；R2选自氢、L-阿拉伯糖、D-鸡纳糖、D-葡萄糖；R3选自R4和R5独立的选自L-阿拉伯糖、D-鸡纳糖、D-葡萄糖、D-木糖、L-呋喃阿拉伯糖；R6选自优选的，所述达玛烷型四环三萜化合物，结构式如下：一种异戊烯基黄酮类化合物，结构通式如下：其中，R7选自L-鼠李糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-木糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(4→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-脱氧呋喃糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-鸡纳糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(3→1)-L-鼠李糖、L-鼠李糖；R8选自氢、D-葡萄糖、L-鼠李糖-(2→1)-D-葡萄糖、D-木糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(4→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-脱氧呋喃糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-鸡纳糖-(2→1)-L-鼠李糖、D-葡萄糖-(3→1)-L-鼠李糖、L-鼠李糖；R9选自羟基，甲氧基、乙氧基、丙氧基；R10选自优选的，所述异戊烯基黄酮类化合物化合物，其结构式如下：本专利技术还提供一种从青钱柳提取上述达玛烷型四环三萜化合物及异戊烯基黄酮类化合物的方法，包括以下步骤：S1、将青钱柳叶用乙醇/水加热回流提取，浓缩得浸膏；S2、将浸膏用水分散，用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，并将萃取液浓缩，得二氯甲烷萃取浓缩液、乙酸乙酯萃取浓缩液、正丁醇萃取浓缩液；S3、采用HPLC-DAD、TLC和UPLC-MS/MS方法对二氯甲烷萃取浓缩液和正丁醇萃取浓缩液进行分析及分离纯化。优选的，S1中，青钱柳叶经过干燥粉碎处理。优选的，S1中，乙醇的浓度为70％，青钱柳叶质量与乙醇的比值为1:10，加热的温度为120℃，加热的时间为2h，浓缩的温度为60℃，浓缩的时间为2-3天。优选的，S2中，利用二氯甲烷萃取三次，青钱柳叶质量与每次使用的二氯甲烷体积的比值为1:10，浓缩的温度为60℃，浓缩的时间为24-48小时。优选的，S2中，利用正丁醇萃取三次，青钱柳叶质量与每次使用的正丁醇体积的比值为1:10，浓缩的温度为65℃，浓缩的时间为72-96小时。优选的，S3中，二氯甲烷部位经硅胶柱层析CH2Cl2:CH3OH(100:1-0:100)梯度洗脱，10％EtOH-H2SO4对TLC斑点进行显色，不同波段的紫外灯下观察及HPLC-DAD对样品进行分析，浓缩合并得到9个部位(A-I)；A-I部位TLC薄层分析，10％浓硫酸/乙醇加热显色，其中Fr.I薄层板显示紫红色条带，HPLC-DAD分析主要为末端吸收，初步确定I部位为三萜类富集部位；首先对FrI采用聚酰胺柱色谱，去除色素，鞣质等干扰性成分，接着采用硅胶柱层析、小孔树脂柱层析和反向ODS柱层析，整个分离过程用UPLC-MS/MS方法对三萜进行追踪，10％EtOH-H2SO4对TLC斑点进行显色及HPLC-DAD对样品进行分析，对达玛烷型四环三萜化合物有效分离；最后采用半制备高效液相对目标化合物进行纯化。优选的，S3中，正丁醇萃取部位经大孔树脂EtOH:H2O(0:100-0:95)梯度洗脱，HPLC-DAD对样品进行分析，浓缩合并得到5个部位(a-e)；a-e部位TLC薄层分析，10％浓硫酸/乙醇加热显色，其中Fr.C薄层板显示黄色条带。首先对Fr.C采用聚酰胺柱色谱，去除色素，鞣质等干扰性成分，HPLC-DAD分析合并，得到6个部位Fr.C1-C6，Fr.C1主要为黄酮类吸收，初步确定Fr.C1部位为黄酮类富集部位；接着采用HW-40C和反向ODS柱层析，整个分离过程用UPLC-MS/MS方法对异戊烯基黄酮进行追踪，通过紫外特征吸收峰对异戊烯基黄酮类化合物有效分离；最后采用半制备高效液相对目标化合物进行纯化。本专利技术还提供了一种1号活性部位，所述1号活性部位为青钱柳的二氯甲烷萃取浓缩液，该1号活性部位主要成分为上述达玛烷型四环三萜化合物。本专利技术还提供了1号活性部位在在制备改善记忆力的药物中的应用。本专利技术还提供上述1号活性部位在制备降脂的药物中的应用。本专利技术还提供上述1号活性部位在制备增强免疫力的药物中的应用。本专利技术还提供了一种2号活性部位，所述2号活性部位为青钱柳的正丁醇萃取浓缩液，该2号活性部位主要成分为异戊烯基黄酮类化合物。本专利技术还提供了上述2号活性部位在在制备改善记忆力的药物中的应用。本专利技术还提供上述2号活性部位在制备降脂的药物中的应用。本专利技术还提供上述2号活性部位在制备增强免疫力的药物中的应用。进一步的，达玛烷型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种1号活性部位，其特征在于，所述1号活性部位为青钱柳的二氯甲烷萃取浓缩液，该1号活性部位含有达玛烷型四环三萜化合物。/n

【技术特征摘要】
20200420 CN 20201031224721.一种1号活性部位，其特征在于，所述1号活性部位为青钱柳的二氯甲烷萃取浓缩液，该1号活性部位含有达玛烷型四环三萜化合物。


2.如权利要求1所述的1号活性部位在在制备改善记忆力的药物、制备降脂的药物或制备增强免疫力的药物中的应用。


3.一种2号活性部位，其特征在于，所述2号活性部位为青钱柳的正丁醇萃取浓缩液，该2号活性部位含有异戊烯基黄酮类化合物。


4.如权利要求3所述的2号活性部位在在制备改善记忆力的药物、制备降脂的药物或制备增强免疫力的药物中的应用。


5.如权利要求1所述的1号活性部位和如权利要求3中所述的2号活性部位的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将青钱柳叶用乙醇/水加热回流提取，浓缩得浸膏；
S2、将浸膏用水分散，用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，并将萃取液浓缩，得二氯甲烷萃取浓缩液、乙酸乙酯萃取浓缩液、正丁醇萃取浓缩液；
S1中，乙醇的浓度为70％，青钱柳叶质量与乙醇的比值为1:10，加热的温度为120℃，加热的时间为2h，浓缩的温度为60℃，浓缩的时间为2-3天；优选的，S2中，利用二氯甲烷萃取三次，青钱柳叶质量与每次使用的二氯甲烷体积的比值为1:10，浓缩的温度为60℃，浓缩的时间为24-48小时；优选的，S2中，利用正丁醇萃取三次，青钱柳叶质量与每次使用的正丁醇体积的比值为1:10，浓缩的温度为65℃，浓缩的时间为72-96小时。


6.一种从青钱柳提取达玛烷型四环三萜化合物和异戊烯基黄酮类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将青钱柳叶用乙醇/水加热回流提取，浓缩得浸膏；
S2、将浸膏用水分散，用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，并将萃取液浓缩，得二氯甲烷萃取浓缩液、乙酸乙酯萃取浓缩液、正丁醇萃取浓缩液；
S3、采用HPLC-DAD、TLC和UPLC-MS/MS方法对二氯甲烷萃取浓缩液和正丁醇萃取浓缩液进行分析及分离纯化；
S1中，乙醇的浓度为70％，青钱柳叶质量与乙醇的比值为1:10，加热的温度为120℃，加热的时间为2h，浓缩的温度为60℃，浓缩的时间为2-3天；优选的，S2中，利用二氯甲烷萃取三次，青钱柳叶质量与每次使用的二氯甲烷体积的比值为1:10，浓缩的温度为60℃，浓缩的时间为24-48小时；
优选的，S3中，二氯甲烷部位经硅胶柱层析CH2Cl2:CH3OH(100:1-0:100)梯度洗脱，10％EtOH-H2SO4对TLC斑点进行显色，不同波段的紫外灯下观察及HPLC-DAD对样品进行分析，浓缩合并得到9个部位(A-I)；
A-I部位TLC薄层分析，10％浓硫酸/乙醇加热显色，其中Fr.I薄层板显示紫红色条带，HPLC-DAD分析主要为末端吸收，初步确定I部位为三萜类富集部位；
首先对FrI采用聚酰胺柱色谱，去除色素，鞣质等干扰性成分，接着采用硅胶柱层析、小孔树脂柱层析和反向ODS柱层析，整个分离过程用UPLC-MS/MS方法对三萜进行追踪，10％EtOH-H2SO4对TLC斑点进行显色及HPLC-DAD对样品进行分析，对3,4-裂环达玛烷型四环三萜化合物有效分离；最后采用半制备高效液相对目标化合物进行纯化。
优选的，S3中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐康平，何小爱，曾普华，王钰艳，陈祖辉，陆士娟，吴建平，曾宏亮，成飞，朱晖，李桂花，欧赛玉，刘翊芊，魏希凡，桂瑞，
申请(专利权)人：中南大学，湖南清雅健康服务有限公司，湖南和然生物科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43