脐带组织冻存液及其制备方法、脐带组织的冻存方法及培养方法技术

本发明专利技术是关于一种脐带组织冻存液及其制备方法、脐带组织的冻存方法及培养方法。所述脐带组织冻存液由人自体血清、人血白蛋白和助剂组成；助剂由维生素K2、海藻糖、EGF和BFGF中的至少三种组成；制备方法是将人自体血清、20％人血白蛋白和助剂中的各组分混合均匀，得脐带组织冻存液；使用脐带组织冻存液冻存脐带组织；将冻存的脐带组织从液氮中取出，37℃水浴中融化后细胞培养。所要解决的技术问题是如何提供一种脐带组织冻存液使得由其冻存的脐带组织在融化后直接进行细胞培养，而无需清洗；且由其冻存的脐带组织增殖能力强，由其培养的原代细胞数量多，活率高，增殖能力不会随冻存时间增加而衰减；且成本经济，快捷高效，从而更加适于实用。

【技术实现步骤摘要】
脐带组织冻存液及其制备方法、脐带组织的冻存方法及培养方法
本专利技术属于生物
，特别是涉及一种脐带组织冻存液及其制备方法、脐带组织的冻存方法及培养方法。
技术介绍
脐带中的华通氏胶里含有丰富的脐带间充质干细胞。间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是机体的起源细胞，是形成人体各种组织器官的原始细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，医学界称为“万用细胞”，适用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复的种子细胞。干细胞是一类未分化未成熟的细胞，其细胞表面的抗原表达很微弱，患者自身的免疫系统对这种未分化细胞的识别能力很低，无法判断它们的属性，从而避免了器官移植引起的免疫排斥反应及过敏反应等，使同种异体移植干细胞非常安全。由于脐带间充质干细胞对机体没有任何损伤，并具有间充质干细胞的所有特性，日益受到人们关注，越来越多的人开始储存脐带间充质干细胞以备将来不时之需；可以自体存储，自体应用，也可以用于帮助需要的人。脐带组织作为脐带间充质干细胞的来源，可以将脐带组织冻存，在人体需要时再将其解冻后培养应用。鉴于脐带组织一次性全部使用时所耗费的人力、物力成本较高，因此可以先将脐带组织分成几份冻存，待需要时再进行培养，可以节省人力和物力成本。随着医学技术的发展，未来可能有更多的细胞类型被提取出来，用于其他疾病的治疗。因此，安全性高且能够长期保存脐带组织的冻存液对于脐带组织在疾病治疗中的推广应用具有重要的意义。现有技术中脐带组织冻存液在冻存中存在以下缺陷：其一是现有的冻存液有的含有DMSO，有的含有外源性/动物源血清成分，或者添加了一些有潜在风险的成分，因此所述冻存液对所冻存的脐带组织具有潜在的安全风险；其二是由于冻存液的成分存在安全隐患，因此在进行组织培养之前需要对所述脐带组织进行反复清洗，操作繁琐效率低；其三是现有的冻存液冻存的脐带组织由于冻存液成分对于脐带组织造成的影响使得其在组织培养时的增殖能力差；其四是现有的冻存液主体原料需要采购，且脐带组织在解冻融化之后还需要反复清洗的工艺，成本较高。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种脐带组织冻存液及其制备方法、脐带组织的冻存方法及培养方法，所要解决的技术问题是如何提供一种脐带组织冻存液使得由其冻存的脐带组织可以在融化后直接进行细胞培养，而无需清洗；且由其冻存的脐带组织的增殖能力强，由所述脐带组织培养的原代细胞的数量多，活率高，其增殖能力几乎不会随着冻存时间的增加而衰减；同时其成本经济，快捷高效，从而更加适于实用。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种脐带组织冻存液，其由人自体血清、20％人血白蛋白和助剂组成；所述助剂由维生素K2、海藻糖、EGF和BFGF中的至少三种组成。本专利技术的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。优选的，前述的脐带组织冻存液，其中以体积份计，其包括40～80份的人自体血清和20～60份的20％人血白蛋白；所述人自体血清和所述20％人血白蛋白的总量为100份；所述助剂由5μg/mL～20μg/mL的维生素K2、20mg/mL～100mg/mL的海藻糖和10ng/mL～30ng/mL的EGF组成；或者，所述助剂由5μg/mL～20μg/mL的维生素K2、20mg/mL～100mg/mL的海藻糖和20ng/mL～80ng/mL的BFGF组成；或者，所述助剂由5μg/mL～20μg/mL的维生素K2、10ng/mL～30ng/mL的EGF和20ng/mL～80ng/mL的BFGF组成；或者，所述助剂由20mg/mL～100mg/mL的海藻糖、10ng/mL～30ng/mL的EGF和20ng/mL～80ng/mL的BFGF组成。优选的，前述的脐带组织冻存液，其中以体积份计，其包括40～80份的人自体血清和20～60份的20％人血白蛋白；所述人自体血清和所述20％人血白蛋白的总量为100份；所述助剂包括以下成分：维生素K2：5μg/mL～20μg/mL；海藻糖：20mg/mL～100mg/mL；EGF：10ng/mL～30ng/mL；BFGF：20ng/mL～80ng/mL。优选的，前述的脐带组织冻存液，其中以体积份计，其包括60～80份的人自体血清和20～40份的20％人血白蛋白；所述人自体血清和所述20％人血白蛋白的总量为100份；所述助剂包括以下成分：维生素K2：10μg/mL～20μg/mL；海藻糖：30mg/mL～100mg/mL；EGF：15ng/mL～30ng/mL；BFGF：30ng/mL～80ng/mL。优选的，前述的脐带组织冻存液，其中以体积份计，其包括70份的人自体血清和30份的20％人血白蛋白；所述助剂由15μg/mL的维生素K2、6mg/mL的海藻糖和25ng/mL的EGF组成；或者，所述助剂由15μg/mL的维生素K2、6mg/mL的海藻糖和50ng/mL的BFGF组成；或者，所述助剂由15μg/mL的维生素K2、6mg/mL的海藻糖、25ng/mL的EGF和50ng/mL的BFGF组成。优选的，前述的脐带组织冻存液，其中以体积份计，其包括40份的人自体血清和60份的20％人血白蛋白；所述脐带组织冻存液还包括以下成分：5μg/mL的维生素K2、20mg/mL的海藻糖、10ng/mL的EGF和20ng/mL的BFGF。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种脐带组织冻存液的制备方法，将人自体血清、20％人血白蛋白和助剂中的各组分混合均匀，得脐带组织冻存液；所述助剂由维生素K2、海藻糖、EGF和BFGF中的至少三种组成。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种脐带组织的冻存方法，使用前述的脐带组织冻存液冻存脐带组织。本专利技术的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。优选的，前述的冻存方法，其包括以下步骤：根据前述的制备方法制备脐带组织冻存液；取新鲜健康足月脐带，清洗，剥取所述脐带中的华通氏胶组织并将其分成条状，得脐带组织；所述人自体血清和所述脐带来自同一人体；将所述脐带组织与所述脐带组织冻存液混合，置于无菌的冻存管中；将所述的冻存管程序降温至-90℃，再将其转移至液氮中冷冻保存。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出一种根据前述方法冻存的脐带组织的培养方法，将盛放所述脐带组织的冻存管从液氮中取出，立即将其置于37±1℃的水浴中融化，再将所述脐带组织分成1～2mm3的小块进行培养。借由上述技术方案，本专利技术提出的一种脐带组织冻存液及其制备方法、脐带组织的冻存方法及培养方法至少具有下列优点：1、本专利技术提出的脐带组织冻存液及其制备方法、脐带组织的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脐带组织冻存液，其特征在于，其由人自体血清、20％人血白蛋白和助剂组成；所述助剂由维生素K2、海藻糖、EGF和BFGF中的至少三种组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种脐带组织冻存液，其特征在于，其由人自体血清、20％人血白蛋白和助剂组成；所述助剂由维生素K2、海藻糖、EGF和BFGF中的至少三种组成。


2.根据权利要求1所述的脐带组织冻存液，其特征在于，以体积份计，其包括40～80份的人自体血清和20～60份的20％人血白蛋白；所述人自体血清和所述20％人血白蛋白的总量为100份；
所述助剂由5μg/mL～20μg/mL的维生素K2、20mg/mL～100mg/mL的海藻糖和10ng/mL～30ng/mL的EGF组成；或者，
所述助剂由5μg/mL～20μg/mL的维生素K2、20mg/mL～100mg/mL的海藻糖和20ng/mL～80ng/mL的BFGF组成；或者，
所述助剂由5μg/mL～20μg/mL的维生素K2、10ng/mL～30ng/mL的EGF和20ng/mL～80ng/mL的BFGF组成；或者，
所述助剂由20mg/mL～100mg/mL的海藻糖、10ng/mL～30ng/mL的EGF和20ng/mL～80ng/mL的BFGF组成。


3.根据权利要求1所述的脐带组织冻存液，其特征在于，以体积份计，其包括40～80份的人自体血清和20～60份的20％人血白蛋白；所述人自体血清和所述20％人血白蛋白的总量为100份；
所述助剂包括以下成分：
维生素K2：5μg/mL～20μg/mL；
海藻糖：20mg/mL～100mg/mL；
EGF：10ng/mL～30ng/mL；
BFGF：20ng/mL～80ng/mL。


4.根据权利要求1所述的脐带组织冻存液，其特征在于，以体积份计，其包括60～80份的人自体血清和20～40份的20％人血白蛋白；所述人自体血清和所述20％人血白蛋白的总量为100份；
所述助剂包括以下成分：
维生素K2：10μg/mL～20μg/mL；
海藻糖：30mg/mL～100mg/mL；
EGF：15ng/mL～30...

【专利技术属性】
技术研发人员：周慧，姜宁健，姜粉军，杨铭斌，袁春梅，刘杨，
申请(专利权)人：北京益华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11