一种可直接输入人体的NK细胞运输液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：乳酸钠林格注射液80％‑98.94％；20wt％的人血白蛋白1％‑20％；5wt％的葡萄糖注射液0.05％‑5％；50wt％的海藻糖溶液0.01％‑1％。本发明专利技术还提供了上述NK细胞运输液的制备方法和应用。本发明专利技术所提供的NK细胞运输液，输注前无需再进行处理，因其主要成分为医用注射级别，成分明确，可直接输入人体，方便快捷。

【技术实现步骤摘要】
一种可直接输入人体的NK细胞运输液及其制备方法和应用
本专利技术涉及免疫细胞
，具体是涉及一种可直接输入人体的NK细胞运输液及其制备方法和应用。
技术介绍
自然杀伤细胞(naturalkillercells,NK)是天然免疫系统的一个重要组成部分，在机体抵抗病毒感染和抗肿瘤的过程中发挥关键作用，不需要预先的致敏便能杀伤发生恶性转化和感染的细胞，而不损伤正常细胞。主要分布于脾脏、骨髓、淋巴结和外周血等处，可在各种趋化因子的诱导下，向炎症等部位迁移。NK细胞表面存在多种抑制型和激活型的受体，各种信号通过这些受体的传递，实现NK细胞的抑制或激活。NK细胞作为人体的重要免疫细胞，仅占外周血淋巴细胞的5％～10％,其杀伤活性不受主要组织相容性复合体(MHC)限制，不依赖于抗体，能快速溶解某些肿瘤细胞进而发挥抗肿瘤作用，因此NK细胞抗癌功能的开发与应用是近年来癌症研究的重点内容。NK细胞治疗中一个很重要的问题是如何解决NK细胞的运输问题，因为NK细胞从制备到使用需要一段时间，细胞处理完以后需马上输注(4小时内)，否则时间过长会影响细胞品质。目前NK细胞运输方式通常有两种，一种是在液氮冻存状态下进行运输，另一种是常温培养基下运输。两种方法都存在一些弊端。液氮冻存状态下进行运输危险性高(液氮温度为-196℃)，运输受限，而且细胞经过冻存后其活性会下降，对后续治疗造成影响。常温培养基下运输，耗费培养基过多，体积较大，到达目的地处理NK细胞时对处理人员、处理环境及仪器的要求较高，使其应用受到限制。加速NK细胞在临床的应用是大势所趋，所以研发一种有效的NK细胞运输液是非常有必要的。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种可直接输入人体的NK细胞运输液及其制备方法和应用，以解决现有技术中存在的技术问题。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本专利技术提出的一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：NK细胞在采用上述的细胞运输保存液保存时，低温有助于降低细胞代谢而延长细胞保存时间。然而，NK细胞虽然处于低代谢状态，但仍需要一定的营养物质进行代谢。为了维持细胞的代谢，选用乳酸钠林格注射液、20wt％的人血白蛋白、5wt％的葡萄糖注射液及50wt％的海藻糖溶液，其中乳酸钠林格注射液，是一种平衡盐液，其电解质浓度、pH、渗透压等与细胞外液接近，可作为良好的细胞溶液。20wt％的人血白蛋白主要防止细胞在悬液中接团，细胞结团后输注会引起小血管的栓塞，也影响细胞的活率。5wt％葡萄糖注射液主要为细胞提供基础的能量供给。海藻糖是由两个葡萄糖分子以a,a,1,1-糖苷键构成非还原性糖，自身性质非常稳定，海藻糖可在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等条件下在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性、不失活，对细胞具有保护作用。四种成分配合使用可以更好地保证NK细胞的正常活动代谢，提高对恶劣环境的适应能力，而且成分简单、明确，主要成分为医用级别，可直接输入人体，无任何风险。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：乳酸钠林格注射液84.2％；20wt％的人血白蛋白12％；5wt％的葡萄糖注射液3％；50wt％的海藻糖溶液0.8％。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：乳酸钠林格注射液93.8％；20wt％的人血白蛋白5％；5wt％的葡萄糖注射液1％；50wt％的海藻糖溶液0.2％。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：乳酸钠林格注射液97.15％；20wt％的人血白蛋白2.5％；5wt％的葡萄糖注射液0.25％；50wt％的海藻糖溶液0.1％。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：乳酸钠林格注射液98.94％；20wt％的人血白蛋白1％；5wt％的葡萄糖注射液0.05％；50wt％的海藻糖溶液0.01％。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述乳酸钠林格注射液、20wt％人血白蛋白、5wt％葡萄糖注射液50wt％海藻糖溶液为医用注射级别；所述50wt％的海藻糖溶液是通过0.22μm滤膜过滤除菌的。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本专利技术提出的一种可直接输入人体的NK细胞运输液的制备方法，包括如下步骤：将上述的乳酸钠林格注射液、20wt％的人血白蛋白、5wt％的葡萄糖注射液、50wt％的海藻糖溶液按体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述50wt％海藻糖溶液的具体制备步骤为：将100g海藻糖加入100ml灭菌注射用水中，充分溶解，使用前用0.22μm滤膜进行过滤除菌。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本专利技术提出的一种可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：a将NK细胞离心收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；b调整细胞密度为1×105个/ml-1×108个/ml，制成细胞悬液；c将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，之后进行冷藏运输。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法中，其中步骤a中，所述NK细胞离心的转速为2000-3000转/分钟，时间为5-6分钟。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法中，其中步骤b中，所述细胞密度为1×107个/ml，浓度太低浪费运输液，浓度太高细胞代谢会增加且细胞容易结团，影响细胞活率。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法中，其中步骤c中，所述细胞悬液与空气的体积比例为1:1-1:5，优选为1:3，这样优选的目的是为了保证细胞在运输过程中对氧气的需求，模拟细胞培养环境。进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法中，其中步骤c中，所述冷藏运输的温度范围为4-17℃，优选为12℃，这样优选后的温度不仅容易获得，而且可以降低细胞的基础代谢率，减少对营养物质的需求。在常温环境中，NK细胞内各种酶和其他生物大分子反应、代谢旺盛，耗氧高，分泌物也可能较大。这些生理过程会产生的大量氧自由基和脂质过氧化物。它们必须及时被清除，否则引起环境pH和渗透压变化，造成细胞溶胀和死亡。而在低温下，NK细胞代谢较低，这些问题可以得到很大的缓解。具体地，低温环境可降低细胞的基础代谢，产生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可直接输入人体的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：/n

【技术特征摘要】
1.一种可直接输入人体的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：





2.如权利要求1所述的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：





3.如权利要求1所述的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：





4.如权利要求1所述的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：





5.如权利要求1所述的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：








6.如权利要求1所述的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：





7.如权利要求1所述的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：





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【专利技术属性】
技术研发人员：姜宁健，杨铭斌，周慧，姜粉军，刘杨，袁春梅，
申请(专利权)人：北京益华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11