一种高效构建细胞文库的电击转化方法技术

本发明专利技术涉及一种高效构建细胞文库的电击转化方法，所述方法包括：构建sgRNA表达细胞；将Cas9mRNA加入到所述sgRNA表达细胞中，进行电击转化反应。与现有技术相比，本发明专利技术方法通过改变构建细胞文库的方法及技术路线，最终形成一套能够快速高效构建细胞文库的方法，能够不受限于细胞起始量的限制，且能够显著缩短sgRNA细胞文库的构建时间，从而有效缩减人工成本和时间成本，并有效拓展细胞文库构建方法的适用范围。的适用范围。

An efficient method for constructing cell library by electroporation

【技术实现步骤摘要】
一种高效构建细胞文库的电击转化方法


[0001]本专利技术涉及基因编辑技术，更具体的涉及一种高效构建细胞文库的电击转化方法

技术介绍

[0002]基因编辑技术能够让人类对目标基因进行定点“编辑”，从而实现对生物体基因组特定DNA片段的修饰。CRISPR
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Cas系统是原核生物的一种获得性免疫系统，运用重复间隔序列转录所得的向导RNA(gRNAs)有助于Cas蛋白识别并切割外源致病RNA。CRISPR
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Cas9系统是目前在真核生物中使用较为广泛的基因编辑工具，能够准确高效的实现对靶向基因的编辑。与此同时，CRISPR
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Cas9系统也被广泛应用于高通量药物靶点的筛选中。在高通量筛选应用中，针对多个靶向基因设计导向RNA序列(sgRNAs)，运用酶切连接的方式将其插入表达载体后，形成sgRNAs质粒文库。该文库经慢病毒转染的方式成功整合到表达有Cas9的宿主细胞后，即可在宿主细胞内进行基因编辑，从而形成靶向基因功能缺失的细胞文库，可用于后续的药物靶点筛选。在该过程中，快速高效的构建可同时高效表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效构建细胞文库的方法，包括：1)构建sgRNA表达细胞；和2)将Cas9 mRNA通过电击转化导入所述sgRNA表达细胞中。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤1)中，通过病毒侵染方式构建sgRNA表达细胞。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述病毒侵染方式中病毒感染复数不超过0.3。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述病毒侵染方式中病毒感染复数为0.1
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0.3。5.根据权利要求1
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4任一项所述的方法，其中所述病毒为AVV病毒或慢病毒。6.根据权利要求1
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5任一项所述的方法，其中所述Cas9 mRNA与所述sgRNA表达细胞的比值为约1X106‑
1X107个细胞每1μg
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120μg Cas9 mRNA，优选为约1X106‑
1X107个细胞每2μg
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100μg Cas9 mRNA。7.根据权利要求1
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6任一项所述的方法，其中当所述电击转化的细胞数为约1X106时，所述电击转化的电压为200
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【专利技术属性】
技术研发人员：金鸣，袁鹏飞，刘娜，苏美华，
申请(专利权)人：博雅缉因北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：