一种特异性结合HLA-A24分型的多肽组合物及应用制造技术

本发明专利技术属于医学免疫学领域，具体地涉及一种特异性结合HLA

A peptide composition specifically combined with HLA-A24 typing and its application

【技术实现步骤摘要】
一种特异性结合HLA-A24分型的多肽组合物及应用


[0001]本专利技术属于医学免疫学领域，具体地涉及一种特异性结合HLA-A24分型的多肽组合物及应用。

技术介绍

[0002]近年来，通过外科手术结合放化疗治疗癌症取得了一些进展，提高了患者生存率，尤其是乳腺、肺、前列腺和肾脏扩散性癌症病人的生存率得以提高。然而，大多数这类治疗都具有显著的毒副作用，易伤害到正常的细胞。
[0003]肿瘤在机体内能引发体液免疫应答和细胞免疫应答。肿瘤抗原在细胞内加工成肽段后与细胞表面的主要组织相容性复合体I类分子结合并呈递给CD8+细胞毒性淋巴细胞，或先从肿瘤细胞上脱落，再由抗原提呈细胞摄取、加工成肽段后与表面主要组织相容性复合体II类分子结合并呈递给CD4+辅助性淋巴细胞，进而诱发机体的抗肿瘤细胞免疫应答。对抗肿瘤免疫及恶性肿瘤进展过程中遗传改变的认识的加深，使得人类能够开发更有选择性的安全治疗方法，采用通过激活免疫系统的方法以攻击正在发生的肿瘤，即肿瘤疫苗。根据肿瘤疫苗的具体用途，可以分为预防性疫苗和治疗性疫苗两类。预防性疫苗的主要功能为控制肿瘤的发生；治疗性疫苗以肿瘤相关抗原为基础，主要用于化疗后的辅助治疗。肿瘤疫苗中的一种为基于树突状细胞(DC)的疫苗。由于DC大量表达共刺激分子，并且具有既可有效地致敏CD4+辅助T细胞(T helper,Th)又可致敏CD8+细胞毒性T细胞(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)的能力，故DC细胞与B淋巴细胞与巨噬细胞不同。DC通过负载肿瘤抗原并诱导为成熟的DC,产生特异性抗肿瘤免疫应答。基于此，已经用DC开发出多种抗肿瘤疫苗，包括肿瘤抗原肽负载DC、肿瘤全细胞抗原负载DC、肿瘤细胞RNA负载DC、肿瘤细胞DNA负载DC、外泌体(exosome)负载DC、细胞因子、趋化因子基因修饰DC。目前DC疫苗已经在恶性黑色素瘤、前列腺癌、肾癌等癌种当中进行了尝试，并部分取得了成功。各种形式的DC疫苗已在肿瘤的免疫治疗中开始尝试并在初步临床试用中显示出了良好的疗效。其中由美国Dendreon公司生产的DC疫苗Provenge在2010年被美国国家食品药品监督管理局批准上市，用于晚期尤其是对激素疗法失效的前列腺癌病人，疗效显示与安慰剂相比，其能够延长患者的生存时间超过4个月(Nature Medicine,2010,16(6):615.)。
[0004]当前大多数临床试验中仍然采用自体全肿瘤裂解液来负载DC，具体操作是将病人自身的肿瘤组织通过多次循环冻融进行裂解，以裂解液对DC细胞进行刺激(Cancer Immunol Immunother,2006,55:819；medical oncology,2006,23:273.)。冻融循环会诱导产生肿瘤细胞坏死，但冻融诱导的肿瘤细胞坏死并不具有免疫源性，甚至会抑制Toll样受体(TLR)诱导的DC细胞成熟及正常功能(Hatfeld P,Merrick AE,West E,O
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Donnell D,Selby P,Vile R,et al.Optimization of dendritic cell loading with tumor cell lysates for cancer immunotherapy.J Immunother(2008)31(7):620
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632)，并且病人的肿瘤组织并非总是容易获得。肿瘤细胞裂解液，纯化的肿瘤相关抗原和肿瘤衍生mRNA也被证明可以用作负载DC的抗原来源。肿瘤细胞裂解液能够提供多种抗原供DC加载，并能诱导
CD4+和CD8+T细胞应答和赋予DC不同的损伤相关分子模式(Damage-Associated Molecular Patterns，DAMP)以确保DC的成熟，但也会向DC提供免疫调节型细胞因子，诱导DC细胞发生耐受转化(Guida M,Pisconte S,Colucci G.Metastatic melanoma:the new era of targeted therapy.Expert Opin Ther Targets 2012；16Suppl 2:S61-70)；纯化的肿瘤相关抗原负载DC能够激活抗原特异性T细胞应答，并诱导CD4+和CD8+T细胞应答，但单次使用的不同的抗原种类数量有限。肿瘤衍生mRNA可以转入肿瘤相关抗原和共刺激分子，保证I型MHC的抗原呈递，并且不需要交叉呈递(Robbins PF,Morgan RA,Feldman SA,Yang JC,Sherry RM,Dudley ME,Wunderlich JR,Nahvi AV,Helman LJ,Mackall CL,et al.Tumor regression in patients with metastatic synovial cell sarcoma and melanoma using genetically engineered lymphocytesreactive with NY-ESO-1.J Clin Oncol 2011；29:917-24)，但不能诱导DC细胞成熟，也不能诱导有效的CD4+免疫应答，同时单次使用的不同的抗原种类数量也有限。
[0005]当使用肿瘤相关抗原中的短肽片段作为负载DC的抗原时，可以有效地增加单次使用时能够涉及到的抗原种类的数量，提高CD4+和CD8+T细胞的免疫应答水平，但需要先测定受试者的HLA单倍型，并在选定的肿瘤相关抗原中选取适当的肽段验证其是否能够与该HLA单倍型结合。HLA等位基因在不同种族人群中具有高度的多态性。根据世界卫生组织统计，截至2018年4月，I型HLA等位基因的数量已超过13000个，其中HLA-A等位基因4200个，HLA-B等位基因5091个，HLA-C等位基因3854个(http://www.hla.alleles.org/nomenclature/stats.html)。其中，亚洲人群常见的HLA分型多为HLA-A2、A3和A24(Experimental and Therapeutic Medicine,2011,2:109-117.)。HLA-A2、A11和A24三种分型能够覆盖超过中国人口的90％(Immunol Today,1996；17:261.)。HLA-A2属于HLA-A2超型，在中国人群中频率最高为45.9％，HLA-A11属于HLA-A3超型，在白种人(Caucasian)中频率最低，为37.5％，在中国人中频率最高，达52.7％；HLA-A24属于HLA-A24超型，在白种人中频率最低，为23.9％，在中国人中频率为40.1％，在日本人中频率最高，为58.6％(Curr Opinion In Immunol,1998,10:478-482；Immunogenetics,1999,50(3-4):201-212.)。目前针对各HLA分型都缺少包含能够有效被抗原呈递细胞呈递的免疫源性多肽组合物及包含这类多肽组合物的肿瘤疫苗。

技术实现思路

[0006]在肿瘤免疫中，肿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合HLA-A24分型的多肽组合物，其特征在于，选自一种或多种衍生于抗原蛋白Survivin、ERBB2、TERT、eEF2、p53、WT1-235、CDH3、KIF20A的多肽，优选自任意两种或两种以上衍生于抗原蛋白Survivin、ERBB2、TERT、eEF2、p53、WT1-235、CDH3、KIF20A、p16、p21的多肽，更优选自任意两种衍生于抗原蛋白Survivin、ERBB2、TERT、eEF2、p53、WT1-235、CDH3、KIF20A、p16、p21的多肽；优选衍生于各抗原蛋白的多肽间两两的质量比为1～5:1，优选为1～3:1，更优选为1:1。2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，衍生于各抗原蛋白的多肽含有(1)各抗原蛋白的抗原表位，或者含有经氨基酸替换、添加或删除而获得的同(1)中抗原表位活性相同的抗原表位，优选与(1)中抗原表位的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与(1)中抗原表位的氨基酸序列具有85％以上同源性，更优选与(1)中抗原表位的氨基酸序列具有95％以上同源性。3.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述衍生于抗原蛋白Survivin的多肽含有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其经氨基酸替换、添加或删除而获得的具有相同活性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有85％以上同源性，更优选与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有95％以上同源性；所述衍生于抗原蛋白ERBB2的多肽含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或其经氨基酸替换、添加或删除而获得的具有相同活性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有85％以上同源性，更优选与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有95％以上同源性；所述衍生于抗原蛋白TERT的多肽含有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其经氨基酸替换、添加或删除而获得的具有相同活性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有85％以上同源性，更优选与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有95％以上同源性；所述衍生于抗原蛋白eEF2的多肽含有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或其经氨基酸替换、添加或删除而获得的具有相同活性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有85％以上同源性，更优选与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有95％以上同源性；所述衍生于抗原蛋白p53的多肽含有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其经氨基酸替换、添加或删除而获得的具有相同活性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有85％以上同源性，更优选与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有95％以上同源性；所述衍生于抗原蛋白WT1-235的多肽含有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或其经氨基酸替换、添加或删除而获得的具有相同活性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有85％以上同源性，更优选与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有95％以上同源性；所述衍生于抗原蛋白CDH3的多肽含有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或其经氨基酸替换、添加或删除而获得的具有相同活性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有85％以上同源性，更
优选与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有95％以上同源性；所述衍生于抗原蛋白KIF20A的多肽含有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或其经氨基酸替换、添加或删除而获得的具有相同活性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有75％以上同源性，再优选与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有85％以上同源性，更优选与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有95％以上同源性。4.一种负载权利要求1-3任一项所述多肽组合物的细胞。5.根据权利要求4所述的细胞，其特征在于，所述细胞为抗原呈递细胞，包括专职抗原呈递细胞或非专职抗原呈递细胞，专职抗原呈递细胞包括淋巴细胞、树突状细胞DC、巨噬细胞、内皮细胞或干细胞，优选为树突状细胞、巨噬细胞或淋巴细胞，更优选为树突状细胞；非专职抗原呈递细胞为表达I型HLA的抗原呈递细胞。6.权利要求4或5所述细胞的制备方法，其特征在于，步骤包括：将权利要求1-3中任一项所述多肽组合物与抗原呈递细胞接触，多肽组合物负载于抗原呈递细胞上，获得负载多肽组合物的抗原呈递细胞。7.根据权利要求6所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝方元，张喜艳，刘辉，尹锋，金华君，钱其军，
申请(专利权)人：上海细胞治疗集团有限公司，
类型：发明
国别省市：