关于治疗血液肿瘤的工程化和非工程化γδ-T细胞的组合物和方法技术

本发明专利技术的方面包括用工程化或非工程化γδ

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】关于治疗血液肿瘤的工程化和非工程化
γδ
‑
T细胞的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2018年10月1日提交的美国临时专利申请号62/739,822的优先权权益，所述临时专利申请的内容出于所有目的整体并入。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，所述序列表以ASCII格式通过电子方式提交并且在此以引用的方式整体并入。所述ASCII副本于2019年12月17日创建，名为ADC
‑
0005
‑
PCT_SL.txt，大小为147,616字节。

技术介绍

[0005]从早期专注于基本淋巴因子活化和/或肿瘤浸润发展到改造这些免疫细胞以表达遗传工程化抗原受体(诸如嵌合抗原受体)的最新策略，过继细胞疗法已经经历了超过三十(30)年的不断迭代。尽管在此过程中已经有一些暗示和迹象表明了这些方法的治愈潜力，但仍有许多工作要做。特别是，CAR
‑
T淋巴细胞能否成功根除肿瘤取决于CAR
‑
T细胞的持久性和效应功能，但其中任何一种过量都会触发患者的移植物抗宿主效应。因此，本领域正在测试T细胞和NK细胞，特别是αβT细胞中的多种共刺激策略，以平衡功效与安全性。值得注意的是，鉴于与αβT细胞相比，目前对γδT细胞的共刺激要求缺乏了解，因此将这些各种方法中的任何一种实际转化至同种异体γδT细胞充其量是不确定的。参见例如Ribot等,“Searching for“signal 2”:costimulation requirements ofγδT cells”,Cell.Mol.Life Sci.(2011)68:2345
‑
2355。
[0006]因此，仍然需要改进的策略以提高细胞的特异性或选择性，以便例如通过减少或避免移植物抗宿主(GVH)作用来提高细胞的安全性，以便例如通过避免抑制效应功能来提高细胞的效力，并在施用于受试者后改善细胞的活性和/或存活。提供满足此类需求的方法、细胞、组合物、试剂盒和系统。

技术实现思路

[0007]本专利技术的方面包括一种编码嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸序列，其中所述CAR包含与在血液肿瘤细胞表面上表达的肿瘤相关抗原(TAA)特异性结合的结合结构域；例如CD8α铰链结构域；例如CD8α跨膜结构域；共刺激信号传导区，任选地其中所述共刺激信号传导区选自4
‑
1BB(CD137)共刺激信号传导区和CD27共刺激信号传导区；以及CD3ζ信号传导结构域。
[0008]本专利技术的方面还包括本文所述的非工程化的γδT细胞以及包含编码本文所述的CAR构建体的核酸的γδT细胞，其中所述γδT细胞在γδT细胞的表面上功能性表达核酸编码的CAR。本专利技术的方面还包括本文所述的多个工程化或非工程化γδT细胞。本专利技术的方面还包括制备本文所述的γδT细胞或多个γδT细胞的方法，其中所述方法包括用本文所述的构建体转染γδT细胞。本专利技术的方面还包括药物组合物，其包含药学上可接受的赋形剂以
ID NO：3(IWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC)。
[0014]在前述任一项或本文所述的一些实施方案中，所述CAR包含CD3ζ信号传导结构域，所述CD3ζ信号传导结构域包含：SEQ ID NO：4(RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR)或SEQ ID NO：5(RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEM GGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR)。
[0015]在前述任一项或本文所述的一些实施方案中，所述CAR包含含有SEQ ID NO:6(KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL)的4
‑
1BB共刺激信号传导区；或含有SEQ ID NO:7(QRRKYRSNKGESPVEPAEPCH YSCPREEEGSTIPIQEDYRKPEPACSP)的CD27共刺激信号传导区。在前述任一项或本文所述的一些实施方案中，所述分离的核酸编码包含SEQ ID NO:6的4
‑
1BB共刺激信号传导区以及包含SEQ ID NO:7的CD27共刺激信号传导区。
[0016]在前述任一项或本文所述的一些实施方案中，所述分离的核酸进一步编码分泌的细胞因子；或分泌的共用γ链白介素；或分泌的共用γ链白介素诸如IL
‑
15，优选地其中所述分泌的共用γ链白介素诸如IL
‑
15包含可操作地连接到分泌信号序列(例如SEQ ID NO:33或49的分泌信号)的白介素多肽序列。在一些实施方案中，所述分离的核酸编码分泌的IL
‑
15，优选地其中所述IL
‑
15包含序列SEQ ID NO:34，更优选地其中所述IL
‑
15包含可操作地连接到分泌信号序列SEQ ID NO:33的序列34，或者其中所述IL
‑
15包含可操作地连接到分泌信号序列SEQ ID NO:49的序列SEQ ID NO:34。在一些情况下，分泌的细胞因子、共用γ链白介素和/或IL
‑
15在结合区、铰链和跨膜结构域、信号传导结构域和/或共刺激内结构域的羧基末端被编码。在一些情况下，分泌细胞因子、共用γ链白介素和/或IL
‑
15在编码结合区、铰链和跨膜结构域、信号传导结构域和/或共刺激内结构域的区域的有义链3'上被编码。
[0017]在一些实施方案中，所述核酸编码多顺反子接头区，其被配置为促进CAR和作为单独的多肽的分泌的细胞因子、共用γ链细胞因子或IL
‑
15的翻译。在一些实施方案中，所述多顺反子接头区编码自切割和/或切割多肽序列。在一些情况下，所述自切割序列是P2A、F2A、T2A或E2A自切割序列。在一些情况下，所述切割序列是弗林蛋白酶切割序列。在一些情况下，所述切割序列(例如弗林蛋白酶切割序列)为自切割序列的氨基末端。在一些实施方案中，所述多顺反子接头区编码内部核糖体进入位点。在一些实施方案中，所述核酸编码白介素或细胞因子或白介素或细胞因子分泌信号的氨基末端的多顺反子接头区，优选地其中所述多顺反子接头区包含SEQ ID NO:43
‑
45、47或52
‑
55中任一者的序列或其组合，或编码内部核糖体进入位点，例如SEQ ID NO:56或60。
[0018]在一些实施方案中，所述结合结构域与CD20特异性结合，并且所述核酸编码SEQ ID NO:8、9、10、11、12、46、48或57和58。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种编码嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸序列，其中所述CAR包含a.与在血液肿瘤细胞表面上表达的肿瘤相关抗原(TAA)特异性结合的结合结构域；b.CD8α铰链结构域；c.CD8α跨膜结构域；d.共刺激信号传导区，任选地其中所述共刺激信号传导区选自4
‑
1BB(CD137)共刺激信号传导区和CD27共刺激信号传导区；以及e.CD3ζ信号传导结构域。2.如权利要求1所述的分离的核酸序列，其中所述(a)
‑
(e)呈5'至3'的顺序。3.如权利要求1或2所述的分离的核酸序列，其中所述结合结构域与CD20特异性结合。4.如权利要求3所述的分离的核酸序列，其中：a.所述结合结构域与由抗CD20抗体所结合的CD20内的表位选择性结合或与抗CD20抗体竞争结合，所述抗CD20抗体选自由3B9、3H7、2B7和9C11，优选地3H7组成的组；和/或b.所述结合结构域包含选自由3B9、3H7、2B7和9C11，优选3H7组成的组的抗CD20抗体的互补决定区。5.如权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸序列，其中所述结合结构域编码：a.重链可变区(HCVR)序列和轻链可变区(LCVR)序列，其中所述HCVR和所述LCVR序列分别为SEQ ID NO:99和107；b.分别为SEQ ID NO:101、103和105的重链互补决定区1、2和3序列，以及分别为SEQ ID NO:109、111和113的轻链互补决定区1、2和3序列；c.重链互补决定区3(HCDR3)和轻链CDR3(LCDR3)，其中所述HCDR3和所述LCDR3选自由SEQ ID NO:345和353；201和209；以及249和257组成的组；d.重链可变区(HCVR)序列和轻链可变区(LCVR)序列，其中所述HCVR和所述LCVR序列选自由SEQ ID NO:339和347；195和203；以及243和251组成的组；和/或e.重链互补决定区3(HCDR3)结构域和轻链CDR3(LCDR3)结构域，其中所述HCDR3结构域包含式X1—X2—X3—X4—X5—X6—X7—X8—X9—X10—X11—X12—X13—X14—X15—X16—X17—X18—X19的氨基酸序列，其中X1＝A、V或T；X2＝K；X3＝D；X4＝P、F或G；X5＝S或H；X6＝Y；X7＝G；X8＝S或H；X9＝G或F；X10＝S或Y；X11＝Y、N或S；X12＝Y、G或H；X13＝G、L或S；X14＝Y、M或D；X15＝Y、D或V；X16＝G、V或不存在；X17＝M或不存在；X18＝D或不存在；X19＝V或不存在(SEQ ID NO:369)；并且所述LCDR3结构域包含式X1—X2—X3—X4—X5—X6—X7—X8—X9的氨基酸序列，其中X1＝Q；X2＝Q；X3＝R或S；X4＝N、Y或F；X5＝N、D或Y；X6＝W；X7＝P；X8＝L；X9＝T(SEQ ID NO:370)。6.如权利要求1或2所述的分离的核酸序列，其中所述结合结构域与CD19或BCMA特异性结合。7.如权利要求6所述的分离的核酸序列，其中所述结合结构域与BCMA特异性结合。8.如权利要求7所述的分离的核酸序列，其中：a.所述结合结构域与由抗BCMA结合区所结合的BCMA内的表位选择性结合，或与抗BCMA结合区竞争结合，所述抗BCMA结合区具有选自由SEQ ID NO:27和28；SEQ ID NO:29和30；以及SEQ ID NO:31和32组成的组的序列；和/或b.所述结合结构域包含抗BCMA结合区的互补决定区，所述抗BCMA结合区具有选自由
SEQ ID NO:27和28；SEQ ID NO:29和30；以及SEQ ID NO:31和32组成的组的序列。9.如权利要求1至8中任一项所述的分离的核酸序列，其中所述CAR包含：a.CD8α铰链结构域，所述CD8α铰链结构域包含SEQ ID NO:1(PTPAPTIASQPLSLRPE ACRPAAGGAVHTRGLDFACDIY)；或SEQ ID NO:2(TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLR PEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIY)；b.CD8α跨膜结构域，所述CD8α跨膜结构域包含SEQ ID NO:3(IWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC)；和/或c.CD3ζ信号传导结构域，所述CD3ζ信号传导结构域包含：(i)SEQ ID NO:4(RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR)；或(ii)SEQ ID NO:5(RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR)。10.如权利要求9所述的分离的核酸序列，其中所述CAR包含：a.含有SEQ ID NO:6(KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL)的4
‑
1BB共刺激信号传导区；或b.含有SEQ ID NO:7(QRRKYRSNKGESPVEPAEPCH YSCPREEEGSTIPIQEDYRKPEPACSP)的CD27共刺激信号传导区，或者其中所述分离的核酸编码包含SEQ ID NO:6的4
‑
1BB共刺激信号传导区以及包含SEQ ID NO:7的CD27共刺激信号传导区。11.如权利要求1至10中任一项所述的分离的核酸序列，其中所述核酸进一步编码：a.分泌的细胞因子；或b.分泌的共用γ链白介素；或c.分泌的IL
‑
15，优选地其中所述IL
‑
15包含序列SEQ ID NO:34，更优选地其中所述IL
‑
15包含可操作地连接到分泌信号序列SEQ ID NO:33的序列SEQ ID NO:34，或者其中所述IL
‑
15包含可操作地连接到分泌信号序列SEQ ID NO:49的序列SEQ ID NO:34；或d.分泌的共用γ链白介素，优选地IL
‑
15，以及白介素或白介素分泌信号的氨基末端的多顺反子接头区，优选地其中所述多顺反子接头区包含SEQ ID NO:43
‑
45、47或52
‑
55中任一者的序列或其组合，或编码内部核糖体进入位点，例如SEQ ID NO:56或60。12.如权利要求1至5、9至10或11中任一项所述的分离的核酸序列，其中所述结合结构域与CD20特异性结合，并且所述核酸编码SEQ ID NO:8、9、10、11、12、46、48或57和58。13.如权利要求12所述的分离的核酸序列，其中所述核酸包含序列SEQ ID NO:13、14、15、16、17、50、51或59。14.如权利要求1至2、6至10或11中任一项所述的分离的核酸序列，其中所述结合结构域与BCMA特异性结合，并且所述核酸编码SEQ ID NO:35、36、37...

【专利技术属性】
技术研发人员：DK萨特帕耶夫，MA赫尔曼，JM罗梅罗，YF井，Z安，A雅克博维茨，
申请(专利权)人：阿迪塞特生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：