一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂制造技术

本发明专利技术属于药物制剂领域，具体涉及一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂，包括无糖基化抗PD-1单克隆抗体、缓冲经体系、赋形剂和增溶剂。本发明专利技术在冻干过程中增加了退火步骤，本发明专利技术所述冻干制剂配方简单、辅料更少，进一步降低了冻干粉的含水量，提高药物的稳定性，方便贮存和运输。方便贮存和运输。

【技术实现步骤摘要】
一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂


[0001]本专利技术属于药物制剂领域，具体涉及一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂。

技术介绍

[0002]程序性死亡受体-1(Programmed Death-1，PD-1)是一种有288个氨基酸的I型膜蛋白，是一致的主要免疫检查点(Immune Checkpoint)之一。PD-1作为免疫抑制性受体，主要在激活T细胞及B细胞中，作为T细胞抑制受体，与配体PD-L1结合，可以抑制T淋巴细胞的活性及相关的体内细胞免疫反应，在肿瘤细胞中可限制T细胞效应子的功能，在肿瘤免疫逃逸中具有重要作用。肿瘤免疫疗法，即利用人体自身的免疫系统抵御癌症，是一种突破性的肿瘤治疗方法，但是肿瘤微环境可保护肿瘤细胞免受有效的免疫破坏，因此如何打破肿瘤微环境称为抗肿瘤研究的重点。
[0003]现有研究成果已确定了PD-1在肿瘤微环境中的作用：PD-L1在许多小鼠和人肿瘤中表达(并在大多数PD-L1阴性肿瘤细胞系中可由IFNγ诱导)，并被推定为介导肿瘤免疫逃避的重要靶点。通过免疫组织化学评估活组织检查，乙腈在人的很多原发性肿瘤中发现PD-1(在肿瘤浸润淋巴细胞上)和/或PD-L1在肿瘤细胞上的表达。这样的组织包括肺癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、结肠癌、神经胶质瘤、膀胱癌、乳腺癌、肾癌、食道癌、胃癌、口腔鳞状细胞癌、尿道上皮细胞癌和胰腺癌及头颈肿瘤等。由此可见，阻断PD-1/PD-L1的相互作用可以提高肿瘤特异性T细胞的免疫活性，有助于免疫系统清除肿瘤细胞，因此PD-1称为开发肿瘤免疫治疗药物的热门靶点。
[0004]目前，国外开发研制抗PD-1单克隆抗体如opdivo，keytruda等抗PD-1单克隆抗体已经获批上市。然而这些抗体作为单药应答率低，本专利技术使用的单克隆抗体其上糖基化修饰被敲除，虽然工艺开发比较稳定，均一性提高，且有望获得更好的临床效果，但同时相比较其他抗PD-1单克隆抗体，其由于去除糖基化而对胰蛋白酶等的敏感性显著增加，结构灵活性增强，在低PH下更容易有聚体形成的趋势，易聚集沉淀。为了防止蛋白在使用前的储存期间发生变性，聚集作用所导致活性或者结构完整性的丧失，针对无糖基化抗PD-1单克隆抗体的制剂工艺开发很有必要。
[0005]通常，蛋白质具有非常短的半寿期，并且在暴露于各种因素(如不适宜温度、水-气界面、高压、物理/机械应力、有机溶剂和微生物污染)之后经历变性(如聚集、解离和吸附在容器表面)。因此，变性蛋白失去内在的理化性质和生理活性。蛋白质的变性通常是不可逆的，因此，蛋白质一旦变性，他们的天然性质可能不会恢复到初始状态。
[0006]现有技术中PD-1的制剂多是液体制剂，然而在生物制药行业中，使用重组DNA技术制备的蛋白质在水性制剂中的长期储存通常是一项困难的任务。为了克服水性制剂中的蛋白质的稳定性问题，本专利技术提供一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种稳定的无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂，本专利技术所述制剂配方简单、辅料更少、稳定性好，方便储存和运输。
[0008]本专利技术的具体技术方案为：
[0009]一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂，含有无糖基化抗PD-1单克隆抗体、缓冲体系、赋性剂和增溶剂。
[0010]其中所述缓冲体系选自醋酸/醋酸钠，柠檬酸/柠檬酸钠，组氨酸/盐酸组氨酸中的一种。
[0011]其中所述的赋形剂选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇中的一种或几种。
[0012]其中所述增溶剂选自聚山梨酯20或聚山梨酯80。
[0013]本专利技术通过缓冲体系调节pH，优选pH5.5～6.0。
[0014]优选地，所述的稳定的无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂包括如下组分：
[0015][0016]进一步优选地，所述的稳定的无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂包括如下组分：
[0017][0018]本专利技术不需加入氨基酸类稳定剂，赋形剂即可做保护剂，包围在蛋白周围，使大分子物质运动受阻，维持蛋白质分子的空间结构，阻止蛋白分子的聚集，从而增加抗PD-1单克隆抗体的稳定性。本专利技术以聚山梨酯20或聚山梨酯80作为增溶剂，其为非离子表面活性剂，在一定剂量范围内能减少制剂中的抗体的聚集、颗粒在制剂中的形成及吸附等。
[0019]在一个优选的实施方案中，一种稳定的无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂，包括如下组分：
[0020][0021]本专利技术的另一方面还提供了一种抗体药物冻干制剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
[0022]称取处方量的缓冲盐用适量注射用水溶解，并调整pH，取样检测pH及内毒素合格后，再准确称取处方量的赋形剂、增溶剂和抗体加入到缓冲液中，混合均匀即得半成品液；将半成品液用0.22μm滤膜进行无菌过滤，检测内毒素合格后灌装、冻干即得。
[0023]优选地，所述冻干过程包括如下冷冻控制、一次干燥和解析干燥三个步骤，具体来说包括如下步骤：
[0024](1)冷冻控制：先将装有抗体药物溶液的西林瓶置于冻干机隔板上，5℃预冻，维持15～60min，再降温至-45～-40℃，维持2～6h进行冷冻；
[0025](2)一次干燥：将隔板体系温度升温至-20～-15℃，维持40～50h，再升温至0～5℃，维持8～10h，完成一次干燥；
[0026](3)解析干燥：将隔板体系温度升温至20～30℃，维持8～10h进行解析干燥，完成冻干工艺。
[0027]进一步优选地，所述冻干过程包括如下冷冻控制、一次干燥和解析干燥三个步骤，具体来说包括如下步骤：
[0028](1)冷冻控制：将装入抗体药物溶液的西林瓶置于隔板上设定温度5℃保持15～60min，然后再将隔板温度设定为-45～-40℃，设定时间40～60min达到预设温度，并维持2～6h，再将隔板温度设定为-30～-15℃，设定时间30～40min达到预设温度，维持1～3h，最后将隔板温度恢复设定为-45～-40℃，设定时间30～40min达到预设温度，维持2～3h，冷冻控制步骤结束；
[0029](2)一次干燥：在极限真空条件下对体系进行一次干燥，设定隔板温度为-20～-15℃，设定时间40～60min达到预设温度，并维持40～50h，然后再将隔板温度设定为0～5℃，设定时间30～40min达到预设温度并维持8～10h，完成一次干燥；
[0030](3)解析干燥：将隔板温度设定为20～30℃，设定时间40～60min达到设定温度，箱体压力在0.1～0.2mbar条件下解析干燥8～10h完成冻干工艺。
[0031]本专利技术所述的抗体药物为抗PD-1单克隆抗体，包括但不限于糖基化或无糖基化抗PD-1单克隆抗体。
[0032]在一个实施方案中，一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体冻干制剂的冻干工艺如下：
[0033][0034]在另一实施方案中，一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体冻干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂，其特征在于，包括无糖基化抗PD-1单克隆抗体、缓冲体系、赋形剂和增溶剂。2.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述缓冲体系选自醋酸/醋酸钠，柠檬酸/柠檬酸钠，组氨酸/盐酸组氨酸中的一种。3.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述赋形剂选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述增溶剂选自聚山梨酯20或聚山梨酯80。5.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，包括如下含量的组分：6.一种权利要求1-5任一项所述冻干制剂的制备方法，其特征在于，称取处方量的缓冲盐用适量注射用水溶解，并调整pH，取样检测pH及内毒素合格后，再准确称取处方量的赋形剂、增溶剂和无糖基化抗PD-1单克隆抗体加入到缓冲体液中，混合均匀即得半成品液；将半成品液用0.22μm滤膜进行无菌过滤，检测内毒素合格后灌装、冻干即得。7.一种抗体药物冻干制剂的制备方法，其特征在于，称取处方量的缓冲盐用适量注射用水溶解，并调整pH，取样检测pH及内毒素合格后，再准确称取处方量的赋形剂、增溶剂和抗体加入到缓冲体液中，混合均匀即得半成品液；将半成品液用0.22μm滤膜进行无菌过滤，检测内毒素合格后灌装、冻干即得。8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述冻干过程包括冷冻干燥、一次干燥和解析干燥三个阶段，具体包括以下步骤：(1)冷冻控制：先将装有抗体药物溶液的西林...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽丽，石曼，刘忠，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：