粪肠球菌及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种粪肠球菌(Enterococcus faecalis)，其保藏号为CGMCC No.19078。该粪肠球菌是一种新型的益生菌，能够抵抗胃液的酸性环境以及能够抵抗肠道中的胆汁盐环境。其耐酸耐胆盐特性强。耐胆盐特性强。

Enterococcus faecalis and its application

【技术实现步骤摘要】
粪肠球菌及其应用


[0001]本专利技术涉及生物制品领域，具体的，涉及粪肠球菌及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着抗生素的持续使用，粪肠球菌耐药性不断提高，已逐渐成为一种条件致病菌，主要发生在机体抵抗力降低时期以及医院内的尿路感染、创伤感染和菌血症的病例中。有大量研究表明，粪肠球菌能引起人和动物感染甚至死亡，其很大一部分原因是因为毒力因子的存在增加了其发病的几率，当机体内菌群失调或机体抵抗力降低时，粪肠球菌得以大量繁殖，侵入机体器官，黏附于细胞表皮，分泌毒性物质破坏细胞组织引起感染性疾病。粪肠球菌所有的毒力因子均存在于毒力岛中，而细菌的染色体及质粒是毒力岛主要存在的部位。
[0003]有研究表明，有些粪肠球菌能够产生一种由质粒编码的、能增加感染的溶血素，这可能是粪肠球菌引发败血症的重要原因，粪肠球菌可粘附至小肠绒毛上皮细胞、尿道上皮细胞及心脏心肌细胞的表面，当机体免疫系统发生变化时，可引起病理反应而导致感染(狄婷婷,高原.粪肠球菌研究进展[J].中国公共卫生,2012,28(11):1530-1532.)；中国人民解放军联勤保障部队第九八O医院通过分析487株粪肠球菌的耐药性，证明粪肠球菌对红霉素和四环素的平均耐药率大于70％，对青霉素、氨苄西林、呋喃妥因的平均耐药率小于3％，对左氧氟沙星和环丙沙星耐药率不同年份呈上升趋势(周倩宜,张坚磊,卫京平.粪肠球菌和屎肠球菌耐药性分析[J].微生物与感染,2008(02):8-10.)。随着越来越多的新菌株的使用，出现了少数与乳酸菌相关的副作用报道，主要为安全性和耐药性方面。人类医疗、农业种植、动物养殖中，基于疾病预防或者治疗为目的的大量抗生素的使用，使得细菌的抗生素耐药性广泛、快速、持续的产生和进化，抗生素耐药性在全球范围内的流行对人类和动物的健康造成巨大威胁，越来越多的微生物对可用的抗生素具有耐药性。
[0004]鉴于益生菌存在菌株的特异性，我国2008年(农业部1126号公告)已经将粪肠球菌列为可饲用的微生物菌种，一般认为粪肠球菌可以产L-乳酸、分解部分蛋白质、产抑菌活性的细菌素等，具有改善肠道微环境、促进宿主对营养物质的吸收等益生功能。但并非所有的粪肠球菌均能作为益生菌使用，由于粪肠球菌在安全性上的特殊性，需对粪肠球菌进行多重因素的考察方可将其作为益生菌的候选者。此外，益生菌候选菌株耐受胃肠道的酸、胆盐环境是其发挥有益生理作用的必要条件，在人体的众多防御机制中，胃酸提供的强酸环境对微生物的影响最大，微生物从口腔进入消化道后，绝大部分会被胃酸杀死，只有具有耐酸特性的细菌方能存活；胆盐是由肝细胞分泌的胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸结合而形成的钠盐或钾盐，人体小肠中胆盐浓度一般在0.03％-0.3％，可以在细胞外产生高渗透压，对菌体细胞造成影响。因此益生菌必须具有耐酸、耐胆盐特征才能保证在胃肠道中保持一定的数量。综上所述，安全、无毒副作用、耐酸、耐胆盐、遗传稳定等是筛选优良益生性粪肠球菌的重要前提，只有达到上述标准的粪肠球菌才能在服用后，耐受宿主严苛的消化道环境到达肠道，安全地对人体产生有益作用。
[0005]另外，目前市场上已出现一些以粪肠球菌为有效成分的微生态制剂用于治疗疾病，如上海信谊药厂有限公司生产的双歧杆菌三联活菌制剂包含粪肠球菌及另两种益生菌；通化金马药业集团股份有限公司生产的复方嗜酸乳杆菌包含粪肠球菌及两株嗜酸乳杆菌。上述药物可用于治疗腹泻、便秘等胃肠道疾病。
[0006]但目前确定可作为益生菌的粪肠球菌种类并不多，亟待开发新的、安全的益生性粪肠球菌，为微生物资源的开发和应用奠定基础。

技术实现思路

[0007]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一株具有优良耐酸耐胆盐特性的益生性粪肠球菌。
[0008]本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：
[0009]本专利技术的专利技术人在健康儿童的粪便中分离得到了一株细菌，经过鉴定该菌株为粪肠球菌(Streptococcus faecalis)，进一步通过一系列生化实验鉴定，意外发现该菌株满足益生菌的众多指标，并且具有优良的耐酸耐胆盐特性。
[0010]有鉴于此，本专利技术的第一方面提出了一种粪肠球菌(Enterococcus faecalis)，所述粪肠球菌具有高耐酸、耐胆盐特性，其保藏号为CGMCC No.19078，所述粪肠球菌于2019年12月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。如前所述，本专利技术的专利技术人首次从健康儿童的粪便中分离得到了该菌株，经过鉴定其为粪肠球菌，进一步通过对该菌的生化特性进行鉴定后发现，该菌满足益生菌的众多指标，因此，该粪肠球菌可以作为一种新型的益生菌。具体的，专利技术人发现该菌对诺氟沙星、万古霉素和大环内酯类抗生素呈中等敏感，对常用抗生素(青霉素类、头孢菌素类、四环素类、美罗培南等)敏感；经过试验证明，该粪肠球菌对于动物例如小鼠没有毒性，小鼠服用该菌株后健康存活，体重正常增加，符合益生菌的质量标准要求；该粪肠球菌能够抵抗胃液的酸性环境(例如pH2.5～4.5的人工胃液环境下，该菌株存活状况良好)；该粪肠球菌还能够抵抗肠道中的胆汁盐环境(例如在0.03～0.3％的胆汁盐浓度下，该菌存活状态良好)。
[0011]根据本专利技术的实施例，所述粪肠球菌的H
+-ATPase基因簇的atpD具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；所述粪肠球菌的胆酰甘氨酸水解酶基因具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
[0012]CTAGTAGTTTAATTGTTTCGCTTTTTCGATGGCATCTTCAATTTTACCGACACTACGGAAGGCTTCTTCTGGCAGATTATCATGTTTACCTTCAAGAATTTCTTTAAAGCCACGAACTGTTTCCGCAACTGGTACATAAGAACCAGGTTGACCTGTAAATTGTTCAGCAACGTTAAAGTTTTGAGATAAGAAGAATTGAACACGGCGTGCGCGACCAACAAGTACTTTTTCGTCATCTGATAATTCGTCCATCCCTAAAATAGCGATGATATCTTGTAATTCACGGTAACGTTGTAAAATATGTTGCACTTCGGTAGCCACTTCGTAGTGTTCTTCTCCAACAATTTCAGGAGCCAAGGCACTAGAAGATGAAGCTAACGGATCTACCGCTGGATAAATCCCTTGTTCGGTTAATTTACGTTCCAAGTTAGTTGTTGCATCCAAATGGGCAAACGCTGTTGCTGGCGCTGGATCGGTATAGTCATCGGCTGGAACATAGATTGCTTGAATAGAGGTAATTGATCCTTTTTTCGTTGAAGTAATCCGTTCTTGTAATTGTCCCATTTCAGTCGCTAAGGTTGGTTGGTAACCAACGGCTGACGGCATCCGACCT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粪肠球菌(Enterococcus faecalis)，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.19078。2.根据权利要求1所述的粪肠球菌，其特征在于，所述粪肠球菌的H
+-ATPase基因簇的atpD具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；所述粪肠球菌的胆酰甘氨酸水解酶基因具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的粪肠球菌，其特征在于，所述粪肠球菌对青霉素类、头孢菌素类、大环内脂类、四环素类、碳青霉烯类以及氯霉素抗生素敏感；任选地，所述青霉素类包括选自氨苄西林、青霉素的至少之一；所述头孢菌素类包括选自头孢哌酮、头孢唑啉、头孢呋辛钠的至少之一；所述大环内脂类包括选自红霉素、克拉霉素的至少之一；所述四环素类包括选自米诺环...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫天文，沈玉保，张辉，程学松，马文，
申请(专利权)人：杭州远大生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：