一种用核酸和抗体联合检测肺癌的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种用核酸和抗体联合检测肺癌的试剂盒。该试剂盒中包含抗非小细胞肺癌的单克隆抗体，具有较好的亲和特性以及特异性，同时鉴定出了该抗体的轻链可变区和重链可变区的具体氨基酸序列。通过于设计的PCR检测一起配合使用，能够有效的保证样本检测的精确度和准确性，可以用于非小细胞肺癌的诊断，具有较好的临床应用前景。较好的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用核酸和抗体联合检测肺癌的试剂盒


[0001]本申请涉及检测领域，更具体的，涉及一种用核酸和抗体联合检测肺癌的试剂盒。

技术实现思路

[0002]肺癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的健康，其发病率和死亡率均排在第一位。肺癌患者中非小细胞肺癌(NSCLC)大约占80％左右，NSCLC的5年存活率不到20％，而及时发现并治疗的1A期NSCLC患者，其5年生存率可达80％左右。由其可见，及时发现和治疗早期肺癌能够大大提高NSCLC患者的生存率。
[0003]目前，肺癌最常用的诊断方法主要有痰脱落细胞检查、支气管镜以及胸部X线等影像学检查。但是，支气管镜的检查方式为侵入性，对患者有较大的创伤性，并且每次未必能够刷检到癌细胞。痰脱落细胞和胸部X线检查对于肺癌辅助诊断的敏感性较低，不是理想的诊断方法。尽管目前有学者建议肺癌的常规筛查可以用低剂量螺旋CT的方法，但是低剂量螺旋CT用于肺癌的筛查无标准化的方案，其临床应用价值仍处于探讨阶段。血液肿瘤标志物在肿瘤筛查中有着重要的临床价值，并且具有取材方便、创伤性小、价格相对低廉、容易复检等优点。但是，目前临床上常用肿瘤标志物(CEA、NSE、Cyfra21
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1等)的敏感性较低，尤其是在检测早期肺癌(Ⅰ期+Ⅱ期)中的敏感性只有15％左右，这些肿瘤标志物在NSCLC的辅助诊断中有较大的局限性。因此，目前临床非常需要特异性和敏感性都比较理想的肺癌肿瘤标志物，尤其是检测早期肺癌的肿瘤标志物。
[0004]研究发现，NSCLC中PGP的表达与其神经内分泌分化关系密切。有研究表明，利用免疫组化法检测转录因子SOX2在肺鳞癌组织中的表达率可达到69％，在腺癌组织中的表达率为4.5％，在SCLC中的表达可达70％。GBU4
‑
5作为肺癌早期筛查的标志物之一，和CAGE与其他不同的肺癌标准物联合可明显提高肺癌的诊断效率。肿瘤－睾丸抗原(NY
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ESO
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1)、肿瘤蛋白P53(P53)、细胞周期素依赖性蛋白激酶2(CDK2)、膜联蛋白A2(annexinA2)、胰岛素样生长因子mRNA结合蛋白1(IMPl)、泛素l(ubiquilinl)以及磷酸甘油酸变位酶(PGAMl)共7种自身抗体在NSCLC中检测的敏感性为68.7％，特异性为91.1％。
[0005]RT
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PCR技术是近几年来用于诊断NSCLC微转移的最常用的技术，检测微转移灵敏度比传统的免疫细胞化学方法高出10—100倍，可在106—107个正常细胞中检出1
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10个肿瘤细胞。目前由于缺乏可供检测的特异性肿瘤标志物，而组织特异性标志物常有假阳性的发生，故研究的结果不尽一致。筛选较好的肿瘤组织特异性标志物是提高微转移检测特异性和可靠性的关键。
[0006]对肺癌具有特异性反应性的单克隆抗体不仅可用于肿瘤诊断和研究，也成为目前肿瘤生物治疗方面药学研究的焦点。虽然有许多研究对于抗肺癌的单克隆抗体，很少进行筛选抗人非小细胞肺癌的单克隆抗体的研究。。
[0007]此外，就病原学诊断而言，抗体检测和病毒核酸检测是最重要诊断依据。目前，针对肺癌的诊断，联合核酸和抗体一起检测的专利技术还不多，研究也不足。
[0008]
技术实现思路

[0009]本专利技术克服现有技术的缺陷，提供一种有效检测肺癌的试剂盒。所述试剂盒含有核酸检测试剂以及抗体检测试剂。
[0010]本专利技术一方面，提供一种特异性检测引物对，所述引物对的序列为CYP2A6 F1
[0011]tcatgaagatcagtgagcgc和CYP2A6 R1 ggtggcgatggagaagcgcc。
[0012]本专利技术还提供一种检测试剂盒，其中含有上述的引物对以及其他检测试剂。
[0013]本专利技术提供了一种针对非小细胞肺癌的单克隆抗体，其重链可变区序列和轻链可变区序列分别如SEQ ID NO：1或2所示。
[0014]在本专利技术的一个优选的方案中，单克隆抗体采用培养杂交瘤细胞方法制备，也可以采用小鼠腹水的方法制备。杂交瘤的方法为，取杂交瘤细胞培养的上清液，经饱和硫酸铵沉淀法粗提出IgG，再将粗提的抗体经亲和层析柱(Protein G
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Sephrose)纯化。
[0015]本专利技术的一个优选的方案中，单克隆抗体采用Balb/C小鼠腹水生产单克隆抗体的方法制备。将约杂交瘤细胞接种到致敏的小鼠腹腔内，2
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4周内可见腹部明显胀大。抽取腹水，经饱和硫酸铵沉淀法粗提后，再将粗提的抗体经亲和层析柱(Protein G
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Sephrose)纯化。
[0016]在本专利技术的一个优选例中，所述单克隆抗体带有可检测标记物。更佳地，所述的标记物选自下组：胶体金标记物、有色标记物或荧光标记物。
[0017]胶体金标记可采用本领域技术人员已知的方法进行。在本专利技术的一个优选的方案中，单克隆抗体用荧光标记，得到荧光标记的单克隆抗体。
[0018]本专利技术的最后一个目的是提供一种检测或辅助待测样品中非小细胞肺癌细胞的酶联免疫试剂盒。
[0019]本专利技术提供的检测或辅助待测样品中非小细胞肺癌细胞的酶联免疫试剂盒包括独立包装的上述单克隆抗体和酶标记的二抗。
[0020]上述试剂盒中，所述酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或葡萄糖氧化酶等任何适于标记酶联免疫吸附试验的酶；所述酶具体为辣根过氧化物酶。
[0021]上述试剂盒还包括底物，所述底物为邻苯二胺、联大茴香胺、5
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氨基水杨酸、邻联甲苯胺或3，3
’
，5，5
’‑
甲基联苯胺；所述底物具体为3，3
’
，5，5
’‑
甲基联苯胺。
[0022]上述试剂盒在如下1)
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5)中至少一种中的应用也属于本专利技术的保护范围：
[0023]1)检测或辅助检测待测样品中非小细胞肺癌；
[0024]2)筛查早期肺癌实体瘤和/或肺癌；
[0025]3)制备筛查早期肺癌实体瘤和/或肺癌的产品；
[0026]上述应用或上述试剂盒中，所述待测样品为尿液和/或血清和/或血浆和/或癌组织。
[0027]本专利技术的抗体可以单独使用，也可与PCR检测试剂一起联用。
[0028]所述抗体可以含有标记物。用于诊断目的的可检测标记物包括但不限于：荧光或发光标记物、放射性标记物、MRI(磁共振成像)或CT(电子计算机X射线断层扫描技术)造影剂、或能够产生可检测产物的酶。
[0029]有益效果
[0030]本专利技术所提供的抗非小细胞肺癌的单克隆抗体，具有较好的亲和特性以及特异
性，同时鉴定出了该抗体的轻链可变区和重链可变区的具体氨基酸序列。通过于设计的PCR检测一起配合使用，能够有效的保证样本检测的精确度和准确性，可以用于非小细胞肺癌的诊断，具有较好的临床应用前景。
附图说本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种5D2单克隆抗体，其特征在于：其重链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。2.权利要求1所述的抗体在制备检测非小细胞肺癌细胞的试剂盒中的用途。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述非小细胞肺癌细胞为HOP
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92细胞。4.权利要求1所述的抗体以及PCR检测试剂一起在制备检测非小细胞肺癌细胞的试剂盒中的用途，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海涛，王振，
申请(专利权)人：北京欣颂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：