Tet-off表达调控系统在级联放大启动子活性中的用途技术方案

本发明专利技术公开了Tet‑off表达调控系统在级联放大启动子活性中的用途。本发明专利技术是基于发明专利技术人发现Tet‑off表达调控系统具有级联放大启动子活性的作用，对于弱启动子的放大作用特别明显所提出的发明专利技术创造。应用该发明专利技术创造得到了一种利用慢病毒感染法构建高效表达稳定细胞株的方法。该方法实现了细胞株构建周期短、高效率、高表达以及高稳定性，为实现重组蛋白大规模、高水平表达提供了可靠的依据。

【技术实现步骤摘要】
Tet-off表达调控系统在级联放大启动子活性中的用途
本专利技术属于生物
，特别涉及Tet-off表达调控系统在级联放大启动子活性中的用途。
技术介绍
通过稳定的哺乳动物细胞株来表达重组蛋白是生物制药领域生产蛋白药物的一种重要技术。然而用传统转染法构建稳定细胞株是一项既耗时又耗力的过程。传统的转染技术中，外源基因在宿主细胞基因组中随机整合，造成基因拷贝数、整合位点均出现明显异质性，从而使所获得的工程细胞株蛋白产量不高，长期培养过程中表达不稳定。慢病毒属于逆转录病毒科，名称源自该种病毒长达数年的潜伏期，其中最为人知的是人类免疫缺陷病毒(HIV-1)。HIV-1病毒直径约120nm，含两条正链RNA，可有效进入细胞核内，对分裂期细胞及非分裂期细胞均具有很高的感染效率。慢病毒感染细胞后可将所携带的基因整合到细胞基因组中，并且长时间持续稳定表达，同时能够随细胞分裂稳定遗传下去，因此成为外源基因导入细胞的有效工具，也是一种有效的稳定细胞株构建手段。慢病毒载体是以HIV-1为基础改造获得的基因治疗载体，通过去除致病基因，同时减少辅助本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Tet-off表达调控系统在级联放大启动子活性中的用途，其特征在于包括如下步骤：将启动子设置在Tet-off表达调控系统中的转录活化因子tTA2表达元件上游。/n

【技术特征摘要】
1.Tet-off表达调控系统在级联放大启动子活性中的用途，其特征在于包括如下步骤：将启动子设置在Tet-off表达调控系统中的转录活化因子tTA2表达元件上游。


2.根据权利要求1所述的Tet-off表达调控系统在级联放大启动子活性中的用途，其特征在于：所述的启动子为弱启动子；进一步为来源于宿主细胞的内源性启动子；更进一步为包括但不限于CHO内源性启动子S100a6启动子、CIRP启动子或PDI启动子。


3.一种慢病毒重组表达载体，其特征在于：包括含Tet-off表达调控系统的慢病毒载体骨架和启动子A；启动子A设置在tTA2表达元件上游，用于直接驱动tTA2进行表达。


4.根据权利要求3所述的慢病毒重组表达载体，其特征在于：
所述的启动子A为弱启动子；进一步为来源于宿主细胞的内源性启动子；更进一步为包括但不限于CHO内源性启动子；
所述的慢病毒载体骨架包括但不限于：pTet-IRES-EGFP、pTet-Off、pTet-On、pLUT-off和pLUT-off-EGFP载体。


5.根据权利要求4所述的慢病毒重组表达载体，其特征在于：所述的CHO内源性启动子为S100a6启动子、CIRP启动子、PDI启动子。


6.根据权利要求5所述的慢病毒重组表达载体，其特征在于：
所述的CIRP启动子为核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的CIRP-P867和核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的CIRP-P2588中的至少一种；
所述的PDI启动子为核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的PDI-P598启动子；
所述的S100a...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦苏珍，李靖，
申请(专利权)人：珠海联邦制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44