研究MDK基因促进脑胶质瘤增殖功能的方法和应用技术

本发明专利技术涉及了研究MDK基因促进脑胶质瘤增殖功能的方法和应用。1)RT‑qPCR分析胶质瘤细胞系MDK表达，2)慢病毒介导过表达和敲除MDK，3)干扰MDK基因表达对胶质瘤细胞增殖的影响，4)通过Western blot分析检测干扰MDK基因表达后的胶质瘤细胞系中，P‑PI3K，PI3K，P‑Akt，Akt，p‑ERK及N‑cadherin、vimentin，beta‑catenin的情况。PI3K/AKT通路是MDK介导的胶质瘤细胞增殖的机制。本发明专利技术提供了一种胶质瘤治疗的新思路，为研究胶质瘤药物治疗靶点提供了新途径。

【技术实现步骤摘要】
研究MDK基因促进脑胶质瘤增殖功能的方法和应用
本专利技术属于基因工程
，它涉及一种干扰MDK基因表达引起胶质瘤增殖的分子机制及预警方法。
技术介绍
胶质瘤是一组异质性脑肿瘤，具有独特的生物学和临床特征。尽管在手术技术和临床治疗方面取得了进步，但胶质瘤的治疗仍然具有挑战性，治疗成功率和整体生存率仍居高不下，5年生存率仅有5％[OstromQT,GittlemanH,FulopJ,etal.CBTRUSStatisticalReport:PrimaryBrainandCentralNervousSystemTumorsDiagnosedintheUnitedStatesin2008-2012.NeuroOncol2015；17Suppl4:iv1-iv62]。MDK(Midkine)是一种蛋白质编码基因，该基因编码一个与癌症发展相关的肝素结合生长因子。MDK在包括胶质母细胞瘤在内的大多数恶性肿瘤中过度表达[Muramatsu,Takashi.Midkine:APromisingMoleculeforDrugDevelopmentto本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.研究MDK基因促进脑胶质瘤增殖功能的方法和应用，包括以下步骤：/n(1)RT-qPCR检测胶质瘤细胞系MDK表达。/n根据制造商的指示进行RT-qPCR实验，检测胶质瘤细胞系中MDK的表达。/n(2)慢病毒介导MDK过表达，方法如下：/n利用pMSCV-IRES-GFP载体构建标记MDK的表达质粒，并将该质粒或相应的空载体(NC)转染293T细胞。通过这些细胞的重组逆转录病毒多重感染感染U251-MG细胞，获得稳定过表达MDK基因(MDK-OE)的细胞系或对照细胞系。/n(3)慢病毒载体介导MDK基因敲除，方法如下：/n根据引物设计原则，设计3个能够特异敲除MDK的引物，制备重组MDK-s...

【技术特征摘要】
1.研究MDK基因促进脑胶质瘤增殖功能的方法和应用，包括以下步骤：
(1)RT-qPCR检测胶质瘤细胞系MDK表达。
根据制造商的指示进行RT-qPCR实验，检测胶质瘤细胞系中MDK的表达。
(2)慢病毒介导MDK过表达，方法如下：
利用pMSCV-IRES-GFP载体构建标记MDK的表达质粒，并将该质粒或相应的空载体(NC)转染293T细胞。通过这些细胞的重组逆转录病毒多重感染感染U251-MG细胞，获得稳定过表达MDK基因(MDK-OE)的细胞系或对照细胞系。
(3)慢病毒载体介导MDK基因敲除，方法如下：
根据引物设计原则，设计3个能够特异敲除MDK的引物，制备重组MDK-shRNA慢病毒和阴性对照(NC)慢...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏风，胡北泉，兰杰，邹东华，黄贤伦，樊华声，利丽，
申请(专利权)人：南宁市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：广西;45