Bap1作为肿瘤治疗靶点在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了Bap1作为肿瘤治疗靶点在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用，本发明专利技术属于肿瘤药物技术领域。在多种肿瘤细胞中缺失Bap1蛋白，能够增强机体的抗肿瘤免疫功能，显著增强多种细胞因子及免疫细胞对该肿瘤细胞的杀伤能力。因此，本发明专利技术提供抑制Bap1的试剂在制备肿瘤免疫治疗的药物中的应用。实验证明缺失Bap1蛋白肿瘤细胞在具有正常免疫系统的小鼠体内生长或清除肿瘤，同时缺失Bap1的肿瘤细胞依赖CD8T细胞介导的抗肿瘤免疫反应，并依赖肿瘤抗原递呈实现杀伤肿瘤，此外Bap1的缺失还能下调PD‑L1的表达水平，因此以Bap1作为肿瘤治疗靶点在抗肿瘤免疫治疗中具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
Bap1作为肿瘤治疗靶点在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用
本专利技术属于肿瘤药物
，具体涉及Bap1作为肿瘤治疗靶点在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
Brca1相关蛋白1(Brca1associatedprotein1)，即Bap1，在人基因组中命名为BAP1，为泛素羟基末端水解酶家族中的一员，其基本功能是去除底物蛋白质的泛素化修饰。Bap1蛋白参与多种细胞功能的调控，如细胞增殖、细胞分化、程序性细胞死亡、DNA损失修复和染色质修饰等。BAP1基因突变在葡萄膜黑色素瘤、恶性间皮瘤和肾细胞癌中频繁发生，大部分早期研究认为BAP1是一个抑癌基因。但是，近年来也有研究报道BAP1可以通过其去泛素化的功能来促进乳腺癌的发生发展。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种Bap1的新应用，即Bap1作为肿瘤治疗靶点在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用。本专利技术提供了抑制Bap1表达或活性的试剂在制备具有以下(1)～(4)中至少一种功能的产品中的应用；(1)预防或治疗肿瘤；(2)抑制肿瘤细胞生长；(3)提高对肿瘤细胞的杀伤力；(4)延长肿瘤机体存活时间；(5)增加肿瘤细胞表面抗原的递呈。优选的，所述提高对肿瘤细胞的杀伤力包括细胞因子或细胞因子组合对肿瘤细胞的杀伤力和免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤力。优选的，所述细胞因子包括FasL、TNFα、IFNγ或IFNβ；所述细胞因子组合包括FasL、TNFα、IFNγ和IFNβ中的两种或多种；所述免疫细胞包括T细胞；所述T细胞包括CD8T细胞。优选的，所述抑制肿瘤细胞生长包括促进肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞成瘤和肿瘤细胞被免疫系统清除。本专利技术还提供了缺失Bap1的肿瘤细胞在制备肿瘤免疫治疗的药物中的应用。优选的，所述缺失Bap1的肿瘤细胞依赖于CD8T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。优选的，所述抑制Bap1表达或活性的试剂包括抑制Bap1基因的表达、抑制Bap1蛋白的表达或丧失Bap1蛋白活性的试剂。优选的，所述抑制Bap1基因的表达是采用基因编辑的方式造成Bap1基因发生碱基插入突变、碱基缺失突变、非同义的碱基突变或整段基因丢失。优选的，所述抑制Bap1基因的表达的试剂包括干扰Bap1基因的RNA分子。优选的，所述抑制Bap1蛋白的表达或丧失Bap1蛋白活性的试剂包括Bap1蛋白抗体或Bap1蛋白小分子抑制剂。优选的，所述肿瘤包所述肿瘤包括葡萄膜黑色素瘤、睾丸生殖细胞癌、肺鳞癌、甲状腺癌、肾透明细胞癌、皮肤黑色素瘤、浸润性乳腺癌、脑低级别胶质瘤、前列腺癌、结肠癌、肾癌和肺癌中的一种或几种。本专利技术提供了抑制Bap1表达或活性的试剂在制备具有以下(1)～(4)中至少一种功能的产品中的应用；(1)预防或治疗肿瘤；(2)抑制肿瘤细胞生长；(3)提高对肿瘤细胞的杀伤力；(4)延长肿瘤机体存活时间。本专利技术以Bap1为肿瘤治疗靶点，通过敲除或抑制Bap1基因或蛋白的功能，能够增强机体的抗肿瘤免疫功能，显著增强多种细胞因子以及T细胞对该肿瘤细胞的杀伤能力，抑制肿瘤细胞的生长或被清除，促进肿瘤细胞凋亡，延长肿瘤机体的存活时间，因此通过缺失Bap1功能能显著增强肿瘤免疫治疗的效果，因此以Bap1蛋白作为肿瘤治疗的靶点，拥有广阔的应用前景，具有极高的医学价值。本专利技术提供缺失Bap1的肿瘤细胞在制备肿瘤免疫治疗的药物中的应用。实验证明，肿瘤细胞中的Bap1缺失，能够使得小鼠对该肿瘤细胞产生长久的免疫记忆能力，使同种Bap1缺失的肿瘤细胞快速被小鼠机体清除，实现了肿瘤免疫治疗目的。同时，本专利技术提供的应用，对多种肿瘤有治疗效果。实验证明，对黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌、肾癌和肺癌等多种肿瘤细胞敲除Bap1基因，均能够达到对应肿瘤的免疫治疗效果。附图说明图1为经基因编辑的MC38肿瘤细胞中Bap1蛋白不能正常表达的检测结果；图2是敲除CT26肿瘤细胞中Bap1蛋白后，注射该肿瘤细胞于正常BALB/c小鼠的皮下，该肿瘤细胞的生长受到抑制直致消失的生长曲线图及小鼠的生存曲线图；图3为Bap1缺失和野生型4T1肿瘤细胞在正常BALB/c小鼠皮下注射后，肿瘤的生长曲线图和小鼠的生存曲线图；图4为Bap1缺失和野生型EMT6肿瘤细胞在正常BALB/c小鼠皮下注射后，肿瘤的生长曲线图和小鼠的生存曲线图；图5为Bap1缺失和野生型MC38肿瘤细胞在正常C57BL/6小鼠皮下注射后，肿瘤细胞的生长曲线图及小鼠的生存曲线图；图6为Bap1缺失和野生型B16.F10肿瘤细胞在正常C57BL/6小鼠皮下注射后，肿瘤生长曲线图和小鼠的生存曲线图；图7为缺失Bap1MC38肿瘤细胞可引起系统性的免疫记忆，其中A为野生型C57BL/6小鼠清除Bap1缺失MC38细胞54天后，仍能清除野生型MC38细胞；B为C57BL/6小鼠对肿瘤细胞的记忆性杀伤依赖其CD8+T细胞；图8细胞因子TNFα、IFNγ或IFNβ处理Bap1缺失的MC38肿瘤细胞后凋亡率统计结果；图9为敲除肿瘤细胞中Bap1蛋白后，注射该肿瘤细胞于多种免疫缺陷小鼠皮下，肿瘤的生长曲线图；图10为通过敲除肿瘤细胞中的B2m、Tap基因和Fas基因验证CD8T淋巴细胞杀伤肿瘤依赖MHCI介导的抗原提呈作用；图11为Bap1蛋白缺失的肿瘤和Bap1野生型肿瘤中免疫细胞浸润对比图，每克肿瘤样品中免疫细胞数目在Bap1蛋白缺失的肿瘤显著增多；图12为肿瘤细胞中的Bap1蛋白缺失致使C57BL/6小鼠肿瘤微环境中产生更多肿瘤特异性杀伤的CD8T细胞；图13为缺失Bap1肿瘤细胞更易被T细胞杀伤；其中图13a为CAR-T细胞体内杀伤实验结果；图13b为OT-IT细胞体内杀伤实验结果；图14为以TCGA数据库人肿瘤数据为样本，分析患者中CD8+T细胞和活化cDC等免疫细胞的免疫浸润评分结果。具体实施方式本专利技术提供了抑制Bap1表达或活性的试剂在制备具有以下(1)～(4)中至少一种功能的产品中的应用；(1)预防或治疗肿瘤；(2)抑制肿瘤细胞生长；(3)提高对肿瘤细胞的杀伤力；(4)延长肿瘤机体存活时间；(5)增加肿瘤细胞表面抗原的递呈。在本专利技术中，所述肿瘤包括葡萄膜黑色素瘤、睾丸生殖细胞癌、肺鳞癌、甲状腺癌、肾透明细胞癌、皮肤黑色素瘤、浸润性乳腺癌、脑低级别胶质瘤、前列腺癌、结肠癌、肾癌和肺癌中的一种或几种。在本专利技术中，所述抑制Bap1表达或活性的试剂优选包括抑制Bap1基因的表达、抑制Bap1蛋白的表达或丧失Bap1蛋白活性的试剂。所述抑制Bap1蛋白的表达或丧失Bap1蛋白活性的试剂优选包括Bap1蛋白抗体或Bap1蛋白小分子抑制剂。所述抑制Bap1基因的表达优选是采用基因编辑的方式造成Bap1基因(SEQIDNO:1)发生碱基插入突变、碱基缺失本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抑制Bap1表达或活性的试剂在制备具有以下(1)～(4)中至少一种功能的产品中的应用；/n(1)预防或治疗肿瘤；/n(2)抑制肿瘤细胞生长；/n(3)提高对肿瘤细胞的杀伤力；/n(4)延长肿瘤机体存活时间；/n(5)增加肿瘤细胞表面抗原的递呈。/n

【技术特征摘要】
1.抑制Bap1表达或活性的试剂在制备具有以下(1)～(4)中至少一种功能的产品中的应用；
(1)预防或治疗肿瘤；
(2)抑制肿瘤细胞生长；
(3)提高对肿瘤细胞的杀伤力；
(4)延长肿瘤机体存活时间；
(5)增加肿瘤细胞表面抗原的递呈。


2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述提高对肿瘤细胞的杀伤力包括细胞因子或细胞因子组合对肿瘤细胞的杀伤力和免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤力。


3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述细胞因子包括FasL、TNFα、IFNγ或IFNβ；所述细胞因子组合包括FasL、TNFα、IFNγ和IFNβ中的两种或多种；
所述免疫细胞包括T细胞；所述T细胞包括CD8T细胞。


4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述抑制肿瘤细胞生长包括促进肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞成瘤和肿瘤细胞被免疫系统清除。


5.缺失Bap1的肿瘤细胞在制备肿瘤免疫治疗的药物中的应用。


6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：余勇，常虹，李明霞，
申请(专利权)人：同济大学附属第一妇婴保健院，
类型：发明
国别省市：上海;31