抑制PHB基因的物质在胶质瘤治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了抑制PHB基因的物质在胶质瘤治疗中的应用。本发明专利技术发现，PHB基因的敲除或敲低可显著降低GSC的肿瘤细胞球形成能力、细胞活力，并可显著降低GSC细胞的克隆形成能力，即可以显著抑制细胞的自我更新能力，但对普通的非干性肿瘤细胞的细胞活力无影响。本发明专利技术的实验还进一步证明，PHB基因的敲除或敲低可抑制GBM肿瘤生长，延长荷瘤小鼠生存期。本发明专利技术具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
抑制PHB基因的物质在胶质瘤治疗中的应用
本专利技术涉及生物医学领域中，抑制PHB基因的物质在胶质瘤治疗中的应用。
技术介绍
源自神经上皮的肿瘤统称为脑胶质瘤，它是最常见的颅内恶性肿瘤，约占颅脑肿瘤的40％-50％，世界卫生组织(WHO)根据脑胶质瘤恶性程度将其分为Ⅰ到Ⅳ级，由低到高。脑胶质瘤根据病理可分为星形细胞瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GlioblastomaMultiforme，GBM)、室管膜瘤、少突胶质细胞瘤等，其中多形性胶质母细胞瘤(GBM)均是Ⅳ级胶质瘤，是恶性程度最高的一类肿瘤，GBM患者即使经过最积极的治疗，平均生存周期也仅为12-15个月。脑胶质瘤呈浸润性生长，与正常脑组织无明显界限，GBM作为恶性程度最高的胶质瘤，浸润转移更迅速，更易复发，患者预后极差，临床上标准治疗手段为手术结合放化疗。手术不能完全切除病灶，放化疗短时间内可以抑制肿瘤的生长，但GBM对放化疗抵抗且易复发，因此患者5年存活率仍不足5％。GBM组织中的肿瘤干细胞称为胶质瘤干细胞(Gliomastem-likecell,GSC),它与正常的神经干细胞(Neuralstemcell，NSC)表达同样的干细胞标志物，如CD133、Nestin、SOX2、Olig2等，同时也具备自我更新、无限增殖、肿瘤发生的能力。越来越多证据表明GSC与GBM肿瘤发生、持续生长和复发密切相关。以GSC为研究对象，剖析其在脑胶质瘤中的特点及功能，可以更深入的揭示脑胶质瘤的发生、发展以及复发的原因，为脑胶质瘤的治疗提供新的思路。r>
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何治疗和/或预防脑肿瘤。为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下任一应用：1、抑制PHB含量和/或活性的物质在制备治疗和/或预防脑肿瘤产品中的应用；2、抑制PHB基因表达或敲除PHB基因的物质在制备治疗和/或预防脑肿瘤产品中的应用。上述应用中，所述治疗和/或预防脑肿瘤可体现在抑制脑肿瘤生长和/或延长脑肿瘤动物生存期上。所述动物可为哺乳动物。所述哺乳动物可为人或小鼠。在本专利技术的一个实施例中，所述小鼠为免疫缺陷小鼠Balb/cnude。上述应用中，所述脑肿瘤可为胶质瘤。所述胶质瘤可为由胶质瘤干细胞(GSC)异种移植引发的肿瘤。在本专利技术的一个实施例中，所述胶质瘤干细胞(GSC)为4121GSC、3691GSC或387GSC。上述应用中，所述抑制PHB基因表达或敲除PHB基因的物质可为利用PHB基因的特异shRNA降低PHB基因表达量的物质或利用CRISPR/Cas9基因敲除系统敲除PHB基因的物质。利用PHB基因的特异shRNA降低PHB基因表达量的物质可为能特异降低PHB基因表达量的shRNA，或能表达所述shRNA的表达盒，或含有所述表达盒的重组载体，或含有所述重组载体的细胞系(不包括繁殖材料)。所述shRNA的序列为序列表中序列3。利用CRISPR/Cas9基因敲除系统敲除PHB基因的物质可为能表达Cas9的表达盒(记为表达盒1)和能表达靶向PHB基因的sgRNA的表达盒(记为表达盒2)，或含有所述表达盒1和/或所述表达盒2的重组载体，或含有所述表达盒1和/或所述表达盒2的细胞系(不包括繁殖材料)。所述sgRNA的靶序列可为序列1或序列2。所述载体可为病毒载体、质粒、黏粒或噬菌体。所述病毒载体具体可为慢病毒。所述质粒可为Tet-pLKO-puro载体。本专利技术还提供了抑制PHB含量和/或活性的物质，或抑制PHB基因表达或敲除PHB基因的物质在制备具有如下任一用途产品中的应用：X1、抑制脑肿瘤细胞生长；X2、抑制脑肿瘤细胞成瘤能力；X3、降低脑肿瘤细胞活力；X4、降低脑肿瘤细胞的自我更新能力。所述成瘤能力可体现在所述脑肿瘤细胞球形成(自我更新)能力上。上述应用中，所述脑肿瘤细胞可为胶质瘤细胞。所述胶质瘤细胞可为胶质瘤干细胞，如4121GSC、3691GSC或387GSC。上述应用中，所述抑制PHB基因表达或敲除PHB基因的物质可为利用PHB基因的特异shRNA降低PHB基因表达量的物质或利用CRISPR/Cas9基因敲除系统敲除PHB基因的物质。本专利技术还提供了具有如下任一用途的产品，所述产品含有(或其活性成分为)抑制PHB含量和/或活性的物质：Y1、治疗和/或预防脑肿瘤；Y2、抑制脑肿瘤生长；Y3、延长脑肿瘤动物生存期；Y4、抑制脑肿瘤细胞生长；Y5、抑制脑肿瘤细胞成瘤能力；Y6、降低脑肿瘤细胞活力；Y7、降低脑肿瘤细胞的自我更新能力。本专利技术还提供了具有如下任一用途的产品，所述产品含有(或其活性成分为)抑制PHB基因表达或敲除PHB基因的物质：Y1、治疗和/或预防脑肿瘤；Y2、抑制脑肿瘤生长；Y3、延长脑肿瘤动物生存期；Y4、抑制脑肿瘤细胞生长；Y5、抑制脑肿瘤细胞成瘤能力；Y6、降低脑肿瘤细胞活力；Y7、降低脑肿瘤细胞的自我更新能力。本专利技术中，PHB为PHB基因所编码的蛋白质(NCBIID：5245，更新日期2021年1月3日)，PHB基因可为Prohibitin或PHB1基因(Genebankaccession：NM_001281496，更新日期2021年1月3日)。所述脑肿瘤可为哺乳动物脑肿瘤。所述脑肿瘤细胞、所述胶质瘤细胞和所述胶质瘤干细胞均可为哺乳动物细胞。所述哺乳动物可为人或小鼠。在本专利技术的一个实施例中，所述小鼠为免疫缺陷小鼠Balb/cnude。实验证明，PHB基因的敲除或敲低可显著降低GSC的肿瘤细胞球形成能力、细胞活力，并可显著降低GSC细胞的克隆形成能力，即可以显著抑制细胞的自我更新能力，但对普通的非干性肿瘤细胞的细胞活力无影响。本专利技术的实验进一步证明，PHB基因的敲除或敲低可抑制GBM肿瘤生长，延长荷瘤小鼠生存期。本专利技术具有广泛的应用前景。附图说明图1为WB检测蛋白质的表达。a为4121GSC和3691GSC中敲除PHB后WB检测PHB、SOX2、Olig2蛋白表达情况；b为4121GSC和387GSC中DOX诱导敲低PHB后WB检测PHB、SOX2、Olig2蛋白表达情况，-表示未利用DOX诱导处理，+表示DOX诱导处理。图2为肿瘤细胞球形成能力的检测。a为4121GSC和3691GSC中利用CRISPR/Cas9敲除PHB后肿瘤细胞球形成能力的检测，每图横坐标从左至右依次为Ctrl、sgPHB#1、sgPHB#2；b为4121GSC和387GSC中利用DOX-inducible-shPHB诱导敲低PHB后肿瘤细胞球形成能力的检测，每图横坐标从左至右依次为DOX-、DOX+。纵坐标均代表肿瘤细胞球数，***表示与各自的对照相比，差异均达到了极显著水平，p＜0.001。图3为细胞活力的检测。a为4121GSC和3691GSC中敲除PHB后细胞活力本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抑制PHB含量和/或活性的物质在制备治疗和/或预防脑肿瘤产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.抑制PHB含量和/或活性的物质在制备治疗和/或预防脑肿瘤产品中的应用。


2.抑制PHB基因表达或敲除PHB基因的物质在制备治疗和/或预防脑肿瘤产品中的应用。


3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述治疗和/或预防脑肿瘤体现在抑制脑肿瘤生长和/或延长脑肿瘤动物生存期上。


4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述脑肿瘤为胶质瘤。


5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于：所述抑制PHB基因表达或敲除PHB基因的物质为利用PHB基因的特异shRNA降低PHB基因表达量的物质或利用CRISPR/Cas9基因敲除系统敲除PHB基因的物质。


6.抑制PHB含量和/或活性的物质，或抑制PHB基因表达或敲除PHB基因的物质在制备具有如下任一用途产品中的应用：
X1、抑制脑肿瘤细胞生长；
X2、抑制脑肿瘤细胞成瘤能力；
X3、降低脑肿瘤细胞活力；
X4、降低脑肿瘤细胞的自我更新能力。


7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：满江红，周涛，李爱玲，黄浩浩，韩秋影，夏晴，陈亮，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心，
类型：发明
国别省市：北京;11