手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法技术

本发明专利技术公开了手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，本发明专利技术采用了植物凝集素(PHA)这种新型试剂，在微穴中加入低浓度的PHA，使其浸泡在PHA中，其内壁与PHA充分接触，在PHA的作用下，手工克隆无透明带重构胚胎，从卵裂一步开始，卵裂球就贴住微穴内壁发育，在穴卵裂率，在穴囊胚率均显著提高。

【技术实现步骤摘要】
手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法
本专利技术涉及无透明核移植
，具体涉及手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法。
技术介绍
近年来猪的体细胞核移植技术在生物医药方面得到广泛的应用，例如：研制人类基因疾病的动物模型、生产基因敲除猪用于人异种器官移植。这些都是基于猪猪在生理、形态上非常接近人的器官，而且具有高产仔数、高繁殖力，可以为异种器官移植提供供体细胞。由于猪的生物学特性和遗传特性与人类具有相当高的同源性，被认为是人体异种器官来源的首选动物，因此猪在生物医学研究中是重要的模式动物。体外培养技术和当今飞速发展的基因编辑技术的有效结合，不仅促进了胚胎工程的发展及应用，而且带动了医学领域的发展。透明带是围绕在卵母细胞外周的糖蛋白基质，对卵母细胞的成熟，胚胎的发育起着重要的作用。自从手工克隆技术问世以来，颠覆了一个传统的概念：透明带是胚胎发育过程所非必需的。Vajta等(2003)研究表明在有血清存在的条件下，即使卵母细胞的数量很多，用链酶蛋白酶消化透明带是一种高效而无损害的方法。很多研究者都用3.3mg/mL链本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，其特征在于：包括如下步骤：/n1)扎穴前先在四孔板内加入胚胎培养液，按要求扎成如下参数的3组微穴：/n组1参数：底部直径为120±10μm，上口直径约150±10μm，深度为1500±10μm；/n组2参数：底部直径为120±10μm，上口直径约200±10μm，深度为200±10μm；/n组3参数：底部直径为150±10μm，上口直径约200±10μm，深度为200±10μm；/n2)扎穴后四孔板内的液体全部倒掉，倒扣4-6分钟，确保微穴内液体全部倒出；/n3)往微穴内加入0.15-0.25mg/mL的植物凝集素，确保填满微穴，浸泡8-12分...

【技术特征摘要】
1.手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)扎穴前先在四孔板内加入胚胎培养液，按要求扎成如下参数的3组微穴：
组1参数：底部直径为120±10μm，上口直径约150±10μm，深度为1500±10μm；
组2参数：底部直径为120±10μm，上口直径约200±10μm，深度为200±10μm；
组3参数：底部直径为150±10μm，上口直径约200±10μm，深度为200±10μm；
2)扎穴后四孔板内的液体全部倒掉，倒扣4-6分钟，确保微穴内液体全部倒出；
3)往微穴内加入0.15-0.25mg/mL的植物凝集素，确保填满微穴，浸泡8-12分钟，随后往四孔板内无微穴的位置缓慢加入胚胎培养液，最后覆盖一层石蜡油。


2.根据权利要求1所述的手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，其特征在于：步骤1)所述的按要求扎成如下参数的3组微穴，是：
组1参数：底部直径为120μm，上口直径约150μm，深度为15...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕玲燕，吴柱月，肖正中，孙俊丽，张冰，谢炳坤，张家庆，王献伟，孙如玉，汪燕玲，关志惠，潘星辰，
申请(专利权)人：广西壮族自治区畜牧研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45