一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用技术

本发明专利技术涉及细胞培育技术领域，尤其是一种脐带间充质干细胞的培养方法,S1、准备培养瓶、镊子、剪刀，并对器材进行消毒处理；S2、取出脐带备用，对脐带进行清洗，去除血迹；S3、将清洗之后的组织块进行静置45

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞培育
，尤其涉及一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。
[0003]如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。现有的间充质干细胞在进行培育时，没有在进行培育时，容易使细胞的生长环境受到影响，导致干细胞的存活分裂受到影响，影响了干细胞的培育效果。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的使细胞的生长环境受到影响，导致干细胞的存活分裂受到影响，影响了干细胞的培育效果缺点，而提出的一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]设计一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用，包括以下步骤：
[0007]S1、准备培养瓶、镊子、剪刀，并对器材进行消毒处理；
[0008]S2、取出脐带备用，对脐带进行清洗，去除血迹，将脐带放入到酒精中对脐带进行浸泡，时间为30
‑
40min，结束后将脐带进行取出，用剪刀进行剪碎，形成组织块，将剪碎的脐带放入到0.9％的氯化钠溶液中进行继续清洗，直至清洗液为清亮为止；
[0009]S3、将清洗之后的组织块进行静置45
‑
50min，去除上清液；
[0010]S4、将组织块加入到5
‑
7倍的0.25％胰酶液中，在温度为37摄氏度下消化35
‑
45min，每隔6
‑
8min进行震荡一次，对细胞进行分离，静置6
‑
8min，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中，进行离心处理，结束后加入3
‑
4ml的细胞生长液；
[0011]S5、进行营养液的配置，采用去离子水、FBS、细胞因子混合而成，将混合好的营养液移至培养瓶中；
[0012]S6、取S5中的溶液50ml移至培养瓶中，放置到37摄氏度的环境下进行培育，同时控制空气的浓度为95％二氧化碳浓度为5％。
[0013]优选的，在进行消毒处理时包括以下步骤：
[0014]A1、将器材放入到蒸汽高压锅中，使高压锅的温度控制为65
‑
70摄氏度，时间为5
‑
8min；
[0015]A2、将温度上升到90
‑
100摄氏度，时间为3
‑
4min；
[0016]A3、将温度上升到122
‑
128摄氏度，时间为15
‑
20min。
[0017]优选的,在进行离心处理时包括以下步骤：
[0018]B1、将离心管置于离心机上，控制离心机的转速为1000r/min，离心的时间为8
‑
10min，去除上清液；
[0019]B2、加入平衡盐酸溶液8ml，冲散细胞，再离心一次，去除上清液。
[0020]优选的，在对脐带进行剪碎时，保证组织块的体积为0.8
‑
1立方毫米。
[0021]优选的，在对脐带进行清洗时，采用37摄氏度的浓度为0.9％的氯化钠溶液进行冲洗。
[0022]优选的，采用的酒精浓度为75％。
[0023]优选的，在去悬液到离心管中时，包括以下步骤：
[0024]C1、在离心管的上方绑上0.22um滤膜过滤；
[0025]C2、将悬液进行取出，使悬液穿过滤膜，对悬液进行过滤；
[0026]C3、过滤结束后，将滤膜进行取下。
[0027]本专利技术还提供了一种脐带间充质干细胞的应用，将培育出来的干细胞用于生产组织和细胞。
[0028]本专利技术提出的一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用，有益效果在于：通过对脐带进行消毒、加入培养液、进行离心处理，同时保证了干细胞的培养的生长环境，有利于提高干细胞的存活分裂，保证了干细胞的培养效果。
具体实施方式
[0029]下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0030]实施例1
[0031]一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用，包括以下步骤：包括以下步骤：
[0032]S1、准备培养瓶、镊子、剪刀，并对器材进行消毒处理，对器材进行消毒处理，避免了造成感染；
[0033]S2、取出脐带备用，对脐带进行清洗，去除血迹，将脐带放入到酒精中对脐带进行浸泡，时间为30min，结束后将脐带进行取出，用剪刀进行剪碎，形成组织块，将剪碎的脐带放入到0.9％的氯化钠溶液中进行继续清洗，直至清洗液为清亮为止，通过采用0.9％的氯化钠溶液进行清洗，有利于保证细胞内的水平衡，避免细胞出现失水或吸水的情况，有利于保证细胞的存活；
[0034]S3、将清洗之后的组织块进行静置45min，去除上清液；
[0035]S4、将组织块加入到5倍的0.25％胰酶液中，在温度为37摄氏度下消化35min，每隔6min进行震荡一次，对细胞进行分离，静置6min，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中，进行离心处理，结束后加入3ml的细胞生长液，通过加入生长液保证了细胞的分裂生长；
[0036]S5、进行营养液的配置，采用去离子水、FBS、细胞因子混合而成，将混合好的营养液移至培养瓶中；
[0037]S6、取S5中的溶液50ml移至培养瓶中，放置到37摄氏度的环境下进行培育，同时控
制空气的浓度为95％二氧化碳浓度为5％，通过二氧化碳的加入，有利于维持培养时的细胞pH值，保保了干细胞正常生长环境。
[0038]在进行消毒处理时包括以下步骤：
[0039]A1、将器材放入到蒸汽高压锅中，使高压锅的温度控制为65摄氏度，时间为5min；
[0040]A2、将温度上升到90摄氏度，时间为3min；
[0041]A3、将温度上升到122摄氏度，时间为15min。
[0042]在进行离心处理时包括以下步骤：
[0043]B1、将离心管置于离心机上，控制离心机的转速为1000r/min，离心的时间为8min，去除上清液；
[0044]B2、加入平衡盐酸溶液8ml，冲散细胞，再离心一次，去除上清液。
[0045]在对脐带进行剪碎时，保证组织块的体积为0.8立方毫米。
[0046]在对脐带进行清洗时，采用37摄氏度的浓度为0.9％的氯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、准备培养瓶、镊子、剪刀，并对器材进行消毒处理；S2、取出脐带备用，对脐带进行清洗，去除血迹，将脐带放入到酒精中对脐带进行浸泡，时间为30
‑
40min，结束后将脐带进行取出，用剪刀进行剪碎，形成组织块，将剪碎的脐带放入到0.9％的氯化钠溶液中进行继续清洗，直至清洗液为清亮为止；S3、将清洗之后的组织块进行静置45
‑
50min，去除上清液；S4、将组织块加入到5
‑
7倍的0.25％胰酶液中，在温度为37摄氏度下消化35
‑
45min，每隔6
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8min进行震荡一次，对细胞进行分离，静置6
‑
8min，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中，进行离心处理，结束后加入3
‑
4ml的细胞生长液；S5、进行营养液的配置，采用去离子水、FBS、细胞因子混合而成，将混合好的营养液移至培养瓶中；S6、取S5中的溶液50ml移至培养瓶中，放置到37摄氏度的环境下进行培育，同时控制空气的浓度为95％二氧化碳浓度为5％。2.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，在进行消毒处理时包括以下步骤：A1、将器材放入到蒸汽高压锅中，使高压锅的温度控制为65
‑
70摄氏度，时间为5
‑
8min...

【专利技术属性】
技术研发人员：何洁，潘兴华，王金祥，赵晶，朱向情，蔡学敏，庞荣清，
申请(专利权)人：云南圣衍干细胞技术开发应用股份有限公司，
类型：发明
国别省市：