宫血干细胞制备方法技术

本发明专利技术涉及再生医学技术领域，具体涉及一种宫血干细胞制备方法，主要通过增殖步骤、筛选步骤及预增殖步骤完成宫血干细胞的制备工作。其中，由于培养基中加入特定的添加剂，因此使得制备出的宫血干细胞在保持了免疫抑制能力的同时，还提高了免疫抑制作用。还提高了免疫抑制作用。还提高了免疫抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
宫血干细胞制备方法


[0001]本专利技术涉及再生医学
，具体涉及一种宫血干细胞制备方法。

技术介绍

[0002]众所周知，为了提供更安全且质量稳定的宫血干细胞，在培养过程中不产生或几乎没有异源性蛋白质污染的无血清培养基是合适的，已知宫血干细胞不仅免疫原性低，而且还影响各种免疫效应细胞。然而，免疫抑制剂的使用与诸如免疫抑制剂的副作用之类的问题有关。宫血干细胞具有免疫抑制能力，因此如果可以使用宫血干细胞，则不需要免疫抑制剂。因此，进行具有低异蛋白风险和合成培养基污染风险的无血清或低血清培养来生产具有免疫抑制能力的宫血干细胞，是非常有必要的。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供一种宫血干细胞制备方法，其通过在培养基中加入特定的添加剂，完成了宫血干细胞的制备及培养过程，在保持了免疫抑制能力的同时，还提高了免疫抑制作用。
[0004]为了达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种宫血干细胞制备方法，其特征在于包括以下步骤：
[0005]增殖步骤，包括在含有成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子-β的第一无血清培养基中增殖宫血干细胞；所述第一无血清培养基内还包含转化生长因子-β、干细胞生长因子、表皮细胞生长因子、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸；
[0006]筛选步骤，从增殖步骤中增殖的宫血干细胞中筛选保持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞；
[0007]预增殖步骤，包括在含有成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子、表皮细胞生长因子、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸的另一无血清培养基中培养宫血干细胞，所述无血清培养基不含有干细胞生长因子和转化生长因子-β；
[0008]所述预增殖步骤和增殖步骤的培养时间为48天到68天，所述细胞制剂包括保持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞；其中，在预增殖步骤中，宫血干细胞至少传代培养一次。
[0009]优选的，在筛选步骤之前，还包括以下步骤：血清培养步骤，包括在含有血清的培养基中培养经过增殖步骤的宫血干细胞。
[0010]优选的，包括从在增殖步骤中增殖的宫血干细胞中筛选不具有致瘤性的宫血干细胞。
[0011]优选的，增殖步骤中，通过使用适合于宫血干细胞增殖的培养血管来增殖宫血干细胞。
[0012]优选的，所述无血清培养基在增殖步骤中进一步包含细胞粘附分子。
[0013]优选的，宫血干细胞在增殖步骤中至少传代培养一次。
[0014]优选的，在增殖步骤中，传代培养的方式是使用不包含来自哺乳动物或微生物的
成分的细胞去除剂来剥离宫血干细胞。
[0015]优选的，还包括：选择适合宫血干细胞增殖的培养血管的步骤。
[0016]优选的，磷脂选自磷脂酸、溶血磷脂酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油。
[0017]优选的，所述脂肪酸选自亚油酸、油酸、亚麻酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、棕榈油酸、棕榈酸和硬脂酸。
[0018]本专利技术的有益效果：本专利技术生产的细胞制剂中所包含的宫血干细胞保持了影响免疫效应细胞的功能，该功能最初具有宫血干细胞的功能。宫血干细胞具有免疫调节作用和免疫耐受作用，因此可以预期本专利技术生产的细胞制剂用于治疗以显示那些作用。此外，还可以预期，根据本专利技术生产的细胞制剂的宫血干细胞还起着宫血干细胞在移植治疗中抗炎作用的作用。本专利技术产生的细胞制剂可以用于治疗局部疾病，其中将宫血干细胞给予需要宫血干细胞移植的部位。另外，通过将宫血干细胞施用于全身，即，将宫血干细胞施用于静脉等，并且将宫血干细胞运送至全身，可以通过免疫来更有效地治疗强免疫排斥反应。由骨髓移植等引起的急性GVHD等。因此，有望显着提高人类的存活率。此外，由本专利技术产生的细胞制剂是通过无血清培养产生的细胞制剂。因此，有用的生长因子或分化因子不会与血清蛋白一起非特异性地吸附到诸如陶瓷等的移植材料上。因此，由本专利技术生产的细胞制剂的移植引起的组织再生能力非常高。这导致很高的治疗效果。不用说，可以进行局部给药和全身给药两者组合进行的治疗。维持或改善了本专利技术生产的细胞制剂中所包含的宫血干细胞的免疫抑制能力，并且宫血干细胞抑制了进行移植时引起的免疫排斥。因此，可以将宫血干细胞用于将非自身组织或细胞移植到另一个人的治疗中。宫血干细胞不仅可以优选通过人体组织或人类细胞用于同种异体移植，还可以优选通过动物以外的组织或动物用于异种移植细胞。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为本专利技术主要步骤示意图。
具体实施方式
[0021]下面将结合本专利技术的附图，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]根据图1，一种宫血干细胞制备方法，其特征在于包括以下步骤：
[0023]增殖步骤，包括在含有成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子-β的第一无血清培养基中增殖宫血干细胞；所述第一无血清培养基内还包含转化生长因子-β、干细胞生长因子、表皮细胞生长因子、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸；筛选步骤，从增殖
步骤中增殖的宫血干细胞中筛选保持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞；预增殖步骤，包括在含有成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子、表皮细胞生长因子、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸的另一无血清培养基中培养宫血干细胞，所述无血清培养基不含有干细胞生长因子和转化生长因子-β；所述预增殖步骤和增殖步骤的培养时间为48天到68天，所述细胞制剂包括保持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞；其中，在预增殖步骤中，宫血干细胞至少传代培养一次。在筛选步骤之前，还包括以下步骤：血清培养步骤，包括在含有血清的培养基中培养经过增殖步骤的宫血干细胞。还包括从在增殖步骤中增殖的宫血干细胞中筛选不具有致瘤性的宫血干细胞。增殖步骤中，通过使用适合于宫血干细胞增殖的培养血管来增殖宫血干细胞。所述无血清培养基在增殖步骤中进一步包含细胞粘附分子。
[0024]宫血干细胞在增殖步骤中至少传代培养一次。在增殖步骤中，传代培养的方式是使用不包含来自哺乳动物或微生物的成分的细胞去除剂来剥离宫血干细胞。还包括：选择适合宫血干细胞增殖的培养血管的步骤。磷脂选自磷脂酸、溶血磷脂酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油。所述脂肪酸选自亚油酸、油酸、亚麻酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、棕榈油酸、棕榈酸和硬脂酸。
[0025]上述设置中，在无血清条件下极大地增殖宫血干细胞的能力的培养基进一步具有实现维持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞的培养的作用。这使得可以生产包含宫血干细胞的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种宫血干细胞制备方法，其特征在于包括以下步骤：预增殖步骤，包括在含有成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子、表皮细胞生长因子、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸的另一无血清培养基中培养宫血干细胞，所述无血清培养基不含有干细胞生长因子和转化生长因子-β；增殖步骤，包括在含有成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子-β的第一无血清培养基中增殖宫血干细胞；所述第一无血清培养基内还包含转化生长因子-β、干细胞生长因子、表皮细胞生长因子、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸；筛选步骤，从增殖步骤中增殖的宫血干细胞中筛选保持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞；所述预增殖步骤和增殖步骤的培养时间为48天到68天，所述细胞制剂包括保持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞；其中，在预增殖步骤中，宫血干细胞至少传代培养一次。2.根据权利要求1所述的宫血干细胞制备方法，其特征在于：在筛选步骤之前，还包括以下步骤：血清培养步骤，包括在含有血清的培养基中培养经过增殖步骤的宫血干细胞。3.根据权利要求1所述的宫血干细胞制备方法，其特征在于：包括从在增殖步骤中增...

【专利技术属性】
技术研发人员：王之洞，
申请(专利权)人：陕西光子动力航天科技有限公司，
类型：发明
国别省市：