一种内皮细胞成骨诱导分化培养基及制备方法技术

本发明专利技术公开一种内皮细胞成骨诱导分化培养基及制备方法，属于培养基技术领域。其化培养基由以下组分制成：α

【技术实现步骤摘要】
1%体积百分比、丙酮酸钠 0.5mM、巯基乙醇0.05mM、Dexamethasone 80nM浓度、Vc 70ug／ml浓度、β
‑
甘油磷酸钠10mM浓度、L
‑
谷氨酰胺20mM浓度、青链霉素 1%体积百分比。
[0007]其中，所述TGF
‑
β为TGF
‑
β2。
[0008]本专利技术还提供了一种内皮细胞成骨诱导分化培养基的制备方法，包括以下步骤：步骤一、成分配置。按照试剂要求配置VEGF 母液、 TGF
‑
β母液 、丙酮酸钠母液，巯基乙醇母液，Dexamethasone母液 、Vc母液、β
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甘油磷酸钠母液、L
‑
谷氨酰胺母液、青链霉素母液，母液使用0.22μm滤膜过滤除菌；步骤二、在超净台中按照专利技术配方配置皮肤微血管内皮细胞工作浓度培养液，α
‑
MEM培养基、胎牛血清20％体积百分比、bFGF 5ng／ml，EGF 1ng／ml，VEGF 50ng／ml ，Insulin
‑
Transferrin
‑
Selenium (ITS
ꢀ‑
G) 1%体积比、TGF
‑
β25ng／ml浓度，MSCGS 1%体积比、丙酮酸钠 0.5mM，巯基乙醇0.05mM，Dexamethasone 80nM浓度，Vc 70ug／ml浓度，β
‑
甘油磷酸钠10mM浓度、L
‑
谷氨酰胺20mM浓度、青链霉素 1%体积百分比；步骤三、预处理。从液氮罐中复苏皮肤微血管内皮细胞，调整细胞状态，使其达到生长对数期，使用0.25%胰酶消化细胞，用内皮细胞成骨诱导分化培养液重悬细胞，使其浓度为1X10^6个/mL；步骤四、分组培养，取步骤三细胞悬液100ul，即细胞量为1x10^5个细胞加至12孔板中，补加内皮细胞成骨诱导分化培养基900ul至12孔板中，放置条件为5%CO2，37摄氏度培养箱中培养；步骤五、换液，每隔3天，去除12孔板中的培养液，加入新的内皮细胞成骨诱导培养液，后续每隔3天更换一次，21天结束，即可形成成骨细胞；步骤六、检测。
[0009]进一步地，所述皮肤微血管内皮细胞选自表皮微血管内皮或真皮微血管内皮。
[0010]进一步地，步骤二中，所述TGF
‑
β为TGF
‑
β2。
[0011]进一步地，还包括1％体积百分比的非必需氨基酸，或1％体积百分比的抗生素。
[0012]本专利技术公开了一种血管内皮细胞成骨诱导分化培养基配方及诱导方法，利用本专利技术的培养液配方及诱导方法，可实现血管内皮细胞直接向成骨细胞分化的一个过程。
[0013]有益效果本专利技术的培养基实现了血管内皮细胞向成骨细胞诱导分化的突破，通过大量实验对血管内皮细胞向成骨诱导分化成分筛选，可进一步研究不同疾病的细胞来源，对医学的基础研究和疾病机制的认知提供了一个有效的工具。本专利技术提供的血管内皮细胞成骨诱导分化培养基制备方法简便，操作简洁高效实现血管内皮细胞向成骨诱导分化，诱导速度快，过程稳定；本专利技术利用含10%FBS的a
‑
MEM培养基培养血管内皮细胞，提供的血管内皮细胞成骨诱导分化培养基制备方法能适应多种培养原料，诱导分化程度高，速度快，提供了一种新型干细胞诱导方式，为生物科学研究提供了新的途径。
附图说明
[0014]图1为本专利技术配方血管内皮细胞成骨诱导分化培养基在诱导48小时对细胞形态的影响；图2为本专利技术配方皮肤微血管内皮细胞成骨诱导分化培养基在诱导48小时后，细
胞干性相关蛋白vWF、VE
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cadherin、FSP
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1、α
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SMA的表达情况；图3为本专利技术诱导血管内皮细胞经本专利技术培养基诱导7天后，成骨细胞ALP表达情况；图4为本专利技术诱导血管内皮细胞经本专利技术培养基诱导21天后，成骨细胞矿化结节形成情况。
具体实施方式
[0015]为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。
[0016]本专利技术中所涉及对各个组分均为市场在售常规产品。具体实施案例中信息如下:本专利技术内皮细胞成骨诱导分化培养基，其有以下组分制成，α
‑
MEM培养基、胎牛血清5
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50％体积百分比、Insulin
‑
Transferrin
‑
Selenium (ITS
ꢀ‑
G) 0.1%
‑
5%体积百分比，bFGF 1
‑
10ng／ml，EGF 1
‑
10ng／ml，VEGF 5
‑
50ng／ml，TGF
‑
β 5
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50ng／ml浓度，MSCGS 0.1%
‑
5%体积百分比，丙酮酸钠 0.1
‑
10mM，巯基乙醇0.01
‑
1mM，Dexamethasone 10
‑
200nM浓度，Vc 10
‑
150ug／ml浓度，β
‑
甘油磷酸钠1
‑
100mM浓度、L
‑
谷氨酰胺10
‑
50mM浓度、青链霉素 0.1%
‑
5%体积百分比。
[0017]优选血管内皮细胞成骨诱导分化培养基由以下组分制成:α
‑
MEM培养基、胎牛血清20％体积百分比、Insulin
‑
Transferrin
‑
Selenium (ITS
ꢀ‑
G) 1%体积比、bFGF 5ng／ml，EGF 1ng／ml，VEGF 50ng／ml ，TGF
‑
β25ng／ml浓度，MSCGS 1%体积百分比、丙酮酸钠 0.5mM，巯基乙醇0.05mM，Dexamethasone 80nM浓度，Vc 70ug／ml浓度，β
‑
甘油磷酸钠10mM浓度、L
‑
谷氨酰胺20mM浓度、青链霉素 1%体积百分比。一般地，TGF
‑
β为TGF
‑
β2。
[0018]其中，a
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MEM为hyclone公司货号为12571063，胎牛血清为GIBCO公司货号为10099
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141，bFGF 为peprotech公司货号为100
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18B ，EGF为peprotech公司货号为315
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09 ，VEGF为peprotech公司货号为500
‑
M88，Insulin
‑
Transferrin
‑
Selenium (ITS
ꢀ‑
G)为GIBCO公司货号为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种内皮细胞成骨诱导分化培养基，其特征在于：由以下组分制成，α
‑
MEM培养基、胎牛血清5
‑
50％体积百分比、Insulin
‑
Transferrin
‑
Selenium (ITS
ꢀ‑
G) 0.1%
‑
5%体积百分比、bFGF 1
‑
10ng／ml、EGF 1
‑
10ng／ml、VEGF 5
‑
50ng／ml、TGF
‑
β 5
‑
50ng／ml浓度、MSCGS 0.1%
‑
5%体积百分比、丙酮酸钠 0.1
‑
10mM、巯基乙醇0.01
‑
1mM、Dexamethasone 10
‑
200nM浓度、Vc 10
‑
150ug／ml浓度、β
‑
甘油磷酸钠1
‑
100mM浓度、L
‑
谷氨酰胺10
‑
50mM浓度、青链霉素 0.1%
‑
5%体积百分比。2.根据权利要求1所述的一种内皮细胞成骨诱导分化培养基，其特征在于：由以下组分制成，α
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MEM培养基、胎牛血清20％体积百分比、Insulin
‑
Transferrin
‑
Selenium (ITS
ꢀ‑
G) 1%体积百分比、bFGF 5ng／ml、EGF 1ng／ml、VEGF 50ng／ml、TGF
‑
β25ng／ml浓度、MSCGS 1%体积百分比、丙酮酸钠 0.5mM、巯基乙醇0.05mM、Dexamethasone 80nM浓度、Vc 70ug／ml浓度、β
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甘油磷酸钠10mM浓度、L
‑
谷氨酰胺20mM浓度、青链霉素 1%体积百分比。3.根据权利要求1或2所述的一种内皮细胞成骨诱导分化培养基，其特征在于，所述TGF
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【专利技术属性】
技术研发人员：毛栋，芮永军，糜菁熠，潘筱云，
申请(专利权)人：无锡市第九人民医院，
类型：发明
国别省市：