【技术实现步骤摘要】
一种高效去除rhNGF前体的纯化方法
[0001]本专利技术涉及生物制药领域,具体地,本专利技术涉及一种高效去除rhNGF前体的纯化方法。
技术介绍
[0002]羟基磷灰石(Ca5(PO4)3OH)2是磷酸钙的一种形式,五个钙双联体(C位点)和一对含羟基的磷三联体(P位点)组按一个重复的几何图形排列,在电子显微照片中可看到重复六边形结构,以它制备的羟基磷灰石分离介质具有独特的分离机理,是唯一直接用于蛋白质和核酸纯化的无机层析填料。该填料具有高度耐碱,生物安全性高的特点。其中磷酸离子与带正电的蛋白质以离子键结合,具有离子交换特性,可有NaCl浓度梯度或者磷酸钠梯度洗脱,另外其中的钙离子与带负电蛋白质的自由羧基以金属鳌合的方式结合,该结合方式对NaCl不敏感,可由磷酸钠浓度梯度洗脱。因此该填料可以用磷酸钠单梯度洗脱,也可以采用NaCl梯度洗脱后以低浓度磷酸钠缓冲液液平衡,再以磷酸钠浓度梯度洗脱的双梯度洗脱模型,可达到更高的分辨率。
[0003]成熟rhNGF蛋白单体仅含有117个氨基酸,在细胞内表达时需要包含其信号肽和前体蛋白序列,所设计的pre
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ngf基因为717bp(含终止密码子),可表达238个氨基酸的prepro NGF前体蛋白,prepro NGF经过信号肽切割、二聚体化前导肽切割,形成全长为234个氨基酸的rhNGF成熟蛋白。对于目标产物和与其近似的前提物质目前通常采用疏水层析利用两种物质疏水性的细微差异进行分离,效果不能令人满意,因此通过大量的填料筛选,发现本专利技术所采用的的羟 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种使用羟基磷灰石层析去除rhNGF前体的纯化方法,其特征在于包括以下步骤:
①
样品处理:将CHO细胞培养物先经过一次或多次柱层析,初步纯化,得到待羟基磷灰石层析进一处理的的样品;
②
样品洗涤:将步骤
①
所得样品进一步结合于羟基磷灰石层析柱中,用洗涤缓冲液清洗去除结合于柱上的前体物质;
③
样品洗脱:用洗脱缓冲液对进行了步骤
②
的层析柱进行洗脱,得到重组人神经生长因子纯品。2.如...
【专利技术属性】
技术研发人员:魏琪,
申请(专利权)人:四川自豪时代药业有限公司,
类型:发明
国别省市:
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