基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法技术

本发明专利技术公开了基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，包括如下步骤：A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt

【技术实现步骤摘要】
基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法


[0001]本专利技术涉及免疫分析和生物技术应用领域，具体涉及基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法。

技术介绍

[0002]目前国内的活细胞染色方法包括：1、中国专利“活细胞内蛋白质的免疫荧光标记方法”，专利号“201410061287.9”，该方法利用脂质体作为载体进行细胞内染色，方法需要22
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26个小时且只针对直接带有荧光标记的抗体；2、中国专利“一种活细胞内蛋白质的免疫荧光标记方法”，专利号“201910633999.6”，该方法对细胞活性有一定的影响，且染色效率不高。
[0003]目前常规的活细胞的染色一般通过化学荧光染料实现，化学荧光染料进行染色的范围非常有限，且不是蛋白质特异性而是化学结构特异性的。目前常规的荧光染色一般通过细胞膜打孔实现，细胞膜打孔会影响细胞活性，容易造成细胞死亡，增加细胞碎片的产生，影响流式细胞学检测结果。目前常规的荧光染色时间也比较长，影响实验的效率。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对现有技术存在的问题，提供一种基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，不需要进行细胞膜打孔，利用抗体，使得活细胞的荧光染色范围和固定细胞免疫荧光染色范围一样；同时，该方法只需要4
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6个小时即可，时间明显缩短。
[0005]本专利技术通过下述技术方案实现：基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，包括如下步骤：A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt
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MEM培养液按体积份数比0.5
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1.5:12
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13充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液1；A2：将活细胞抗体和opt
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MEM培养液按体积份数比0.5
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1.5:45
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55充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液2；A3：将混合液1和混合液2按体积份数比50
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55:50
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55充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液3；A4：将混合液3加入到目的细胞培养基中，得到混合液4，所述混合液3和目的细胞培养基体积份数比为50
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55:100；A5：将混合液4培养4
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6小时，用PBS溶液清洗2
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3次，完成染色。
[0006]进一步，包括如下步骤：A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt
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MEM培养液按体积份数比1:12.5充分混合，室温孵育15min，得到混合液1；A2：将活细胞抗体和opt
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MEM培养液按体积份数比1:50充分混合，室温孵育15min，得到混合液2；A3：将混合液1和混合液2按体积份数比54:52充分混合，室温孵育15min，得到混合
液3；A4：将混合液3加入到目的细胞培养基中，得到混合液4，所述混合液3和目的细胞培养基体积份数比为53:100；A5：将混合液4培养4
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6小时，用PBS溶液清洗2
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3次，完成染色。
[0007]进一步，所述步骤A2中，活细胞抗体为细胞核内蛋白一抗和二抗混合物，一抗和二抗的重量份数比为1:1。
[0008]进一步，所述步骤A2中，活细胞抗体为荧光标记的细胞内蛋白抗体。
[0009]进一步，所述步骤A1中，所述活细胞免疫荧光辅助剂的制备方法，包括如下步骤：B1：将去离子水加热至70
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90℃，加入线性聚乙烯亚胺，充分溶解后，冷却到室温，得到冷却溶液，所述去离子水和线性聚乙烯亚胺的重量份数比为：500:0.5
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1.5；B2：将冷却溶液PH调至6
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8，然后用0.22μm的针头过滤器过滤，过滤后保持在3
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6℃，得到活细胞免疫荧光辅助剂。
[0010]进一步，所述步骤A1中，所述活细胞免疫荧光辅助剂的制备方法，包括如下步骤：B1：将去离子水加热至80℃，加入线性聚乙烯亚胺，充分溶解后，冷却到室温，得到冷却溶液，所述去离子水和线性聚乙烯亚胺的重量份数比为：500:1；B2：将冷却溶液PH调至7，然后用0.22μm的针头过滤器过滤，过滤后保持在4℃，得到活细胞免疫荧光辅助剂。
[0011]上述至少包括以下优点：1、本专利技术基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，不需要进行细胞膜打孔，利用抗体，使得活细胞的荧光染色范围和固定细胞免疫荧光染色范围一样；2、本专利技术基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，只需要4
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6个小时即可弯沉染色，时间明显缩短；3、本专利技术基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，可扩大荧光染色的范围，比现有化学荧光染料更具特异性。
附图说明
[0012]此处所说明的附图用来提供对本专利技术实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本专利技术实施例的限定。在附图中：图1为本专利技术间接标记抗体用于活细胞染色在荧光显微镜下的效果图；图2为本专利技术间接标记抗体用于活细胞的染色效果与现有技术活细胞胞内染色效果的对比图；图3为本专利技术直接标记抗体用于活细胞染色在荧光显微镜下的效果图；图4为本专利技术直接标记抗体用于活细胞的染色效果与现有技术活细胞胞内染色效果的对比图。
具体实施方式
[0013]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的示意性实施方式及其说明仅用于解释本专利技术，并不作为对本专利技术的限定。
[0014]本专利技术基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，包括如下步骤：A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt
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MEM培养液按体积份数比0.5
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1.5:12
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13充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液1；A2：将活细胞抗体和opt
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MEM培养液按体积份数比0.5
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1.5:45
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55充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液2；A3：将混合液1和混合液2按体积份数比50
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55:50
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55充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液3；A4：将混合液3加入到目的细胞培养基中，得到混合液4，所述混合液3和目的细胞培养基体积份数比为50
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55:100；A5：将混合液4培养4
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6小时，用PBS溶液清洗2
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3次，完成染色。
[0015]更优选地，包括如下步骤：A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt
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MEM培养液按体积份数比0.5:12充分混合，室温孵育15min，得到混合液1；A2：将活细胞抗体和opt
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MEM培养液按体积份数比0.5:45充分混合，室温孵育15本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，包括如下步骤：A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt
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MEM培养液按体积份数比0.5
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1.5:12
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13充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液1；A2：将活细胞抗体和opt
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MEM培养液按体积份数比0.5
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1.5:45
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55充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液2；A3：将混合液1和混合液2按体积份数比50
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55:50
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55充分混合，室温孵育10
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15min，得到混合液3；A4：将混合液3加入到目的细胞培养基中，得到混合液4，所述混合液3和目的细胞培养基体积份数比为50
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55:100；A5：将混合液4培养4
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6小时，用PBS溶液清洗2
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3次，完成染色。2.根据权利要求1所述的基于标记抗体的活细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，包括如下步骤：A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt
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MEM培养液按体积份数比1:12.5充分混合，室温孵育15min，得到混合液1；A2：将活细胞抗体和opt
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MEM培养液按体积份数比1:50充分混合，室温孵育15min，得到混合液2；A3：将混合液1和混合液2按体积份数比54:52充分混合，室温孵育15min，得到混...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜云瀚，
申请(专利权)人：姜云瀚，
类型：发明
国别省市：