一种环保苏木素染色液、巴氏染色液及其制备方法与应用技术

本申请涉及细胞染色领域，具体公开了一种环保苏木素染色液、巴氏染色液及其制备方法与应用。其中，环保苏木素染色液包括以下重量份的原料：苏木素2

【技术实现步骤摘要】
一种环保苏木素染色液、巴氏染色液及其制备方法与应用


[0001]本申请涉及细胞染色领域，更具体地说，它涉及一种环保苏木素染色液、巴氏染色液及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]巴氏(Papanicolaou)染色法是一种经典的细胞化学染色方法，广泛应用于细胞脱落学、病理学等领域。巴氏染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法，适用于妇科液基细胞学涂片染色，如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。
[0003]传统的巴氏染色液成分复杂，包括多种浓度梯度酒精，如75％酒精、85％酒精、95％酒精，还包括无水乙醇、苏木素染色液、盐酸乙醇、碳酸锂饱和液(或3％氨水)、氧化汞、橙黄G6、EA50、二甲苯、磷钨酸和乙酸等。
[0004]其中，苏木素是对细胞核进行染色的主要物质，但是苏木素本身并不具备染色的能力。通过在苏木素中添加氧化汞，苏木素能够转变为具备发色团和助色团的苏木红，苏木红与金属媒染剂结合成带正电荷的色精，色精再与带负电荷的细胞核相结合，从而实现苏木素的染色功能。
[0005]然而，氧化汞是一种剧毒、有刺激性的重金属，如果操作人员长期进行巴氏染色操作，会不可避免的接触到这些有毒有害物质，长期以往会对人体造成危害。

技术实现思路

[0006]为了减小巴氏染色试剂对人体造成的危害，本申请提供一种环保苏木素染色液、巴氏染色液及其制备方法与应用。
[0007]第一方面，本申请提供一种环保苏木素染色液，采用如下的技术方案：一种环保苏木素染色液，包括以下重量份的原料：苏木素
ꢀꢀ2‑
3g/L95％乙醇 100
‑
125mL/L丙三醇
ꢀꢀ
50
‑
100mL/L乙二醇
ꢀꢀ
100
‑
125mL/L硫酸铝钾
ꢀꢀ
10
‑
17g/L碘酸钠
ꢀꢀ
0.2
‑
0.3g/L柠檬酸
ꢀꢀ1‑
2g/L；还包括水。
[0008]通过采用上述技术方案，本申请通过苏木素、95％乙醇、丙三醇、乙二醇、硫酸铝钾、碘酸钠、柠檬酸和水的相互配合，得到一种全新的环保苏木素染色液。本申请通过添加碘酸钠等原料对苏木素进行人工氧化，使苏木素发生氧化作用脱去两个氢原子而转变为苏
木红，从而为苏木素的染色作用提供物质基础。可见，本申请无需使用氧化汞也能够实现苏木素的染色功能，而且各种原料均为无毒无害物质，大大减少了危化品及有毒重金属对人体造成的危害，达到减小巴氏染色试剂对人体造成危害的目的，具有环保、安全的效果。
[0009]丙三醇使人工氧化后的苏木素在使用过程中能够自然氧化，持续的补充发色团和助色团，以达到相对稳定的染色环境。
[0010]丙三醇和乙二醇还能够将95％乙醇包裹，抑制95％乙醇挥发，使苏木素被氧化后能够更好的溶解于无水乙醇，从而更好的对细胞进行染色，具有提升细胞染色效果的效果。
[0011]硫酸铝钾作为媒染剂，与苏木素被氧化后产生的苏木红结合，再与细胞核结合，从而将细胞核与苏木红结合，进而将细胞核染色。
[0012]优选的，所述环保苏木素染色液包括以下重量份的原料：苏木素
ꢀꢀ
2.2
‑
2.8g/L95％乙醇
ꢀꢀ
105
‑
115mL/L丙三醇
ꢀꢀ
70
‑
90mL/L乙二醇
ꢀꢀ
105
‑
115mL/L硫酸铝钾
ꢀꢀ
12
‑
16g/L碘酸钠
ꢀꢀ
0.2
‑
0.3g/L柠檬酸
ꢀꢀ
1.3
‑
1.8g/L；还包括水。
[0013]第二方面，本申请提供一种巴氏染色液，采用如下的技术方案：一种巴氏染色液，包括上述方案中所述的一种环保苏木素染色液，还包括复合脱水固定酒精、复合缓冲液和复合EA染色液。
[0014]通过采用上述技术方案，经过测试，采用本申请的巴氏染色液对细胞进行染色，染色效果好，能够清晰的显示细胞的结构，而且不易脱色，有利于长久保存。
[0015]优选的，所述复合脱水固定酒精包括无水乙醇700
‑
800mL/L和200
‑
300mL/L异丙醇。
[0016]通过采用上述技术方案，复合脱水固定酒精中的无水乙醇作为脱水剂，高浓度的乙醇能够对细胞起到脱水、固定的作用，使细胞的环境与组织相仿，有利于细胞的着色。无水乙醇代替了传统巴氏染色固定步骤中75％、85％、95％、无水乙醇梯度的酒精，并且代替了透明步骤中的二甲苯，减少了试剂的种类，试剂配制更加简单，染色操作更加方便，同时不会对染色效果造成影响。
[0017]异丙醇与无水乙醇之间存在协同作用，能够增加无水乙醇的脱水及透明作用，从而使染色效果更好。
[0018]优选的，所述复合缓冲液包括TRIS 1
‑
4g/L、盐酸0.1
‑
2mL/L、苯甲酸钾0.5
‑
1g/L和水。
[0019]通过采用上述技术方案，TRIS、盐酸、苯甲酸钾和水配制而成的复合缓冲液能够代替传统巴氏染色试剂中的盐酸乙醇、碳酸锂饱和液(或3％氨水)进行分化和蓝化，能够减少使用碳酸锂饱和液或氨水等危险性物质，试剂配制和染色操作均更加安全，同时能够保证染色效果。
[0020]优选的，所述复合EA染色液包括亮绿0.15
‑
0.4g/L、水溶性伊红3
‑
5g/L、甲醇200
‑
300mL/L、草酸铵3
‑
5g/L、橙黄G 0.05
‑
0.1g/L、无水乙醇450
‑
600mL/L和水。
[0021]通过采用上述技术方案，亮绿、水溶性伊红、甲醇、草酸铵、橙黄G、无水乙醇和水配制而成的复合EA染色液用于胞浆染色，其无需使用重金属磷钨酸和刺激性挥发物质乙酸也能达到良好的染色效果，进一步提高巴氏染色液的环保性能和安全性能。
[0022]优选的，所述复合脱水固定酒精和复合EA染色液还包括N
‑
甲基吡咯酮烷。
[0023]通过采用上述技术方案，N
‑
甲基吡咯酮烷具有减少固定收缩同时包裹抑制挥发的作用，具有增强固定、透明以及胞浆染色的作用，使细胞的染色效果更加突出。
[0024]第三方面，本申请提供一种巴氏染色液的制备方法，采用如下的技术方案：一种巴氏染色液的制备方法，按照处理工序依次按照处理工序依次包括以下步骤：S1：将苏木素加入95％乙醇、丙三醇和乙二醇的混合溶液中，搅拌混匀得到苏木素酒精本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种环保苏木素染色液，其特征在于，包括以下重量份的原料：苏木素
ꢀꢀꢀꢀ2‑
3g/L95％乙醇
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100
‑
125mL/L丙三醇
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50
‑
100 mL/L乙二醇
ꢀꢀꢀꢀ
100
‑
125 mL/L硫酸铝钾
ꢀꢀ
10
‑
17g/L碘酸钠
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0.2
‑
0.3g/L柠檬酸
ꢀꢀꢀꢀ1‑
2g/L；还包括水。2.根据权利要求1所述的一种环保苏木素染色液，其特征在于：包括以下重量份的原料：苏木素
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2.2
‑
2.8g/L95％乙醇
ꢀꢀ
105
‑
115mL/L丙三醇
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70
‑
90 mL/L乙二醇
ꢀꢀꢀꢀ
105
‑
115 mL/L硫酸铝钾
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12
‑
16g/L碘酸钠
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0.25
‑
0.35g/L柠檬酸
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1.3
‑
1.8g/L；还包括水。3.一种巴氏染色液，其特征在于：包括权利要求1所述的一种环保苏木素染色液，还包括复合脱水固定酒精、复合缓冲液和复合EA染色液。4.根据权利要求3所述的一种巴氏染色液，其特征在于：所述复合脱水固定酒精包括无水乙醇700
‑
800mL/L和200
‑
300mL/L异丙醇。5.根据权利要求3所述的一种巴氏染色液，其特征在于：所述复合缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：余华斌，屈英平，
申请(专利权)人：深圳市鹏一医疗仪器有限公司，
类型：发明
国别省市：