一种抑制HTT基因表达的siRNA及其前体和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抑制HTT基因表达的siRNA及其前体和应用，具体地，本发明专利技术提供了一种siRNA前体序列以及由其产生的siRNA，本发明专利技术的siRNA及其前体可有效治疗亨廷顿舞蹈症。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制HTT基因表达的siRNA及其前体和应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种抑制HTT基因表达的siRNA及其前体和应用。
技术介绍
亨廷顿舞蹈症(Huntington’sdisease，HD)是一种以运动障碍为主的神经退行性疾病,属常染色体显性遗传性疾病。它的主要症状是不受控制的大肢体运动,伴有认知障碍和精神异常。HD是一种致死性的神经退行性疾病，病患多于成年起病，并与起病后15-20年内死亡，然而目前缺乏有效的治疗方法。因此，寻找安全有效的治疗方法十分重要。目前利用ASO降低HTTmRNA水平并抑制其翻译的治疗方法已在临床上取得初步成功，但是ASO鞘内注射的方式并不利于其在深部脑组织的分布，而且鞘内注射属于有创操作，限制了其临床推广。因此，本领域迫切需要开发一种能够调控HTT活性或表达量的siRNA。
技术实现思路
本专利技术提供了一种能够调控HTT活性或表达量的siRNA。本专利技术第一方面提供了一种前体序列，其5’至3’端具有式I所示的结构：B1为所需要的第一核糖核酸序列，其中所述的第一核糖核酸序列包括HTTsiRNA正义链序列；B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；C为茎环结构序列；其中，所述HTTsiRNA正义链的核苷酸序列选自下组：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO.:5、或其组合。在另一优选例中，所述前体序列如SEQIDNO.:6－10中任一所示。本专利技术第二方面提供了一种多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成本专利技术第一方面所述的前体序列。本专利技术第三方面提供了一种表达载体，所述的表达载体含有本专利技术第一方面所述的前体序列或本专利技术第二方面所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述的表达载体包括病毒载体、非病毒载体。在另一优选例中，所述的表达载体为质粒。在另一优选例中，所述的表达载体还含有编码狂犬病毒表面糖蛋白短肽(RVG肽)的多核苷酸。本专利技术第四方面提供了一种药物制剂，所述的制剂含有：(a)用于表达抑制HTT基因表达的siRNA的表达载体；以及(b)药学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的表达载体含有表达本专利技术第一方面所述的前体序列或本专利技术第二方面所述的多核苷酸，或表达本专利技术第一方面所述的前体序列。在另一优选例中，所述的表达载体表达式I所示的前体，B1为所需要的第一核糖核酸序列，其中所述的第一核糖核酸序列包括HTTsiRNA正义链序列；B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；C为茎环结构序列；其中，所述HTTsiRNA正义链的核苷酸序列选自下组：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、或其组合。在另一优选例中，所述的表达载体还含有编码狂犬病毒表面糖蛋白短肽(RVG肽)的多核苷酸。在另一优选例中，所述的制剂为液体剂型。在另一优选例中，所述的制剂为注射剂。在另一优选例中，所述的表达载体包括质粒。在另一优选例中，所述的表达载体或质粒含有启动子、复制起点和标记基因。在另一优选例中，所述的表达载体中含有表达HTTsiRNA的表达盒。在另一优选例中，所述的表达盒(即多核苷酸)为双链，并且具有以下结构：启动子-attB1-任选的RVG-任选的标签蛋白(如Lamp2b)-5’siRNA侧翼区序列-式I所示的序列-3’siRNA侧翼区序列-attB2。在另一优选例中，所述的制剂为脂质体或外泌体制剂。本专利技术第五方面提供了一种抑制HTT基因表达的siRNA，所述siRNA的正义链核苷酸序列选自下组：SEQIDNO:1、2、3、4、5、或其组合。本专利技术第六方面提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有本专利技术第一方面所述的前体序列、或本专利技术第三方面所述的表达载体，和药学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的药物组合物包括HTTsiRNA质粒。在另一优选例中，所述的药物组合物还包括其他治疗亨廷顿舞蹈症的药物。在另一优选例中，所述其他治疗亨廷顿舞蹈症的药物选自下组：丁苯那嗪、ASO、或其组合。在另一优选例中，所述的药物组合物为权利要求3所述的表达载体，较佳地，为含有权利要求1所述前体序列的质粒。在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型包括：片剂、胶囊剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液、混悬液、乳剂、混悬剂、注射液、或粉针剂。在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型还包括喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、挥发性液体、外用溶液剂、洗剂、浇淋剂、搽剂、巴布膏剂、膏药、橡胶膏剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂或栓剂。在另一优选例中，所述的剂型为注射剂，较佳地，为静脉注射剂、腹腔注射剂。本专利技术第七方面提供了本专利技术第六方面所述siRNA、本专利技术第一方面所述前体序列、或本专利技术第三方面所述表达载体的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于(i)治疗亨廷顿舞蹈症。在另一优选例中，所述组合物或制剂还用于选自下组的一种或多种用途：(ii)抑制哺乳动物脑组织中HTT的表达；和/或(iii)改善哺乳动物的运动协调能力。在另一优选例中，所述哺乳动物包括人或非人哺乳动物。在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括：啮齿动物(如鼠、兔)、灵长类动物(如猴)。在另一优选例中，所述脑组织包括纹状体、皮层。本专利技术第八方面提供了一种治疗亨廷顿舞蹈症的方法，将安全有效量的本专利技术第三方面所述的表达载体、本专利技术第四方面所述的药物制剂、或本专利技术第六方面所述的药物组合物施用于所需对象，从而治疗亨廷顿舞蹈症。在另一优选例中，所述施用的剂量为1-20mg/kg，较佳地，为5-10mg/kg。在另一优选例中，所述施用频率为两天一次。在另一优选例中，所述施用包括：口服、呼吸道、注射、透皮、粘膜或腔道给药；在另一优选例中，所述施用包括注射质粒。本专利技术第九方面提供了一种(ii)抑制哺乳动物脑组织中HTT的表达；和/或(iii)改善哺乳动物的运动协调能力的方法，包括：将安全有效量的本专利技术第三方面所述的表达载体、本专利技术第四方面所述的药物制剂、或本专利技术第六方面所述的药物组合物施用于所需对象，从而(ii)抑制哺乳动物脑组织中HTT的表达；和/或(iii)改善哺乳动物的运动协调能力。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1是本专利技术的质粒骨架图。图2是质粒分子表达的siRNA在细胞水平及对HTT的抑制效果。...

【技术保护点】
1.一种前体序列，其5’至3’端具有式I所示的结构：/n

【技术特征摘要】
1.一种前体序列，其5’至3’端具有式I所示的结构：



B1为所需要的第一核糖核酸序列，其中所述的第一核糖核酸序列包括HTTsiRNA正义链序列；
B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；
C为茎环结构序列；
其中，所述HTTsiRNA正义链的核苷酸序列选自下组：
SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO.:5、或其组合。


2.如权利要求1所述的前体序列，其特征在于，所述前体序列如SEQIDNO.:6－10中任一所示。


3.一种多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸能被宿主转录形成权利要求1所述的前体序列。


4.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体含有权利要求1所述的前体序列或权利要求3所述的多核苷酸。


5.一种药物制剂，其特征在于，所述的制剂含有：
(a)用于表达抑制HTT基因表达的siRNA的表达载体；以及
(b)药学上可接受的载体。


6.如权利要求5所述的药物制剂，其特征在于，所述的表达载体表达式I所示的前体，

【专利技术属性】
技术研发人员：陈熹，张丽，裴中，吴腾腾，刘瑾，余梦超，夏玉贵，屠盛，林巧芳，
申请(专利权)人：南京优智源医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32