一种抗衰老剂的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种抗衰老剂的制备方法及其应用，所述抗衰老剂以健康新生儿脐带为原料，按照下述步骤准备：a)提取间充质干细胞；b）将所述间充质干细胞在无血清培养基中培养至融合达40〜50%的单层细胞；c)在所述的单层细胞中加入终浓度25〜55mmol/L的葡萄糖溶液制成混合液；d)将所述混合液继续培养46〜50小时后制成预备培养基，e)将所述培养基浓缩纯化，本发明专利技术制备的抗衰老剂可以有效缓解皮肤性衰老和皮肤抗氧化。

【技术实现步骤摘要】
一种抗衰老剂的制备方法及其应用
本专利技术涉及一种干细胞抗衰老领域，尤其是涉及一种抗衰老剂的制备方法及其应用。
技术介绍
随着人口老龄化问题的日益突出，抗衰老领域成为全球关注的焦点。皮肤是人体最大的器官，担负着保护、感觉、调节体温、分泌、排泄和免疫等诸多方面的作用，但随着年龄的增长，皮肤会发生退行性变，例如，皮肤变薄、含水量减少、弹性消退、萎缩、起皱，随之皱纹、老年斑等临床症状的出现，使人意识到自己开始衰老，这对人们的生活、工作有着复杂的心理与生理影响，它可以引发焦虑、抑郁、自卑等一系列的心理问题。因此，抗衰老治疗，尤其是对皮肤的抗衰老治疗成为研究的焦点之一，人们希望通过抗衰老治疗来改善和提高生活质量。皮肤衰老是一个漫长而复杂的演变过程。内在因素表现为，例如随着年龄增加细胞端粒逐渐缩短，而有氧细胞代谢所引起的氧化损伤却逐渐增多。具体表现为皮肤表皮层和真皮层变薄、血管壁变薄、真皮层成纤维细胞数量减少和功能紊乱、胶原纤维合成速度逐渐减慢。外在因素包括生活方式、营养状况、环境因素等。其中，日光中紫外线所引起的光损伤(photodamage)是导致皮肤衰老的主要环境因素。随着生活水平的提高，和现代生物及医学的飞速发展，尤其是干细胞技术的出现，通过活化皮肤细胞、促进皮肤干细胞增殖、分化，可修复或替代衰老的皮肤细胞，最终从根本上改变皮肤的生理机能变为可能，本专利技术利用新生婴儿脐带培养脐带间充质干细胞已达到延缓衰老的目的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种抗衰老剂的制备方法及其应用，从而解决上述问题。为实现上述目的，针对上述问题，本专利技术提供如下技术方案一种抗衰老剂的制备方法及其应用，所述抗衰老剂以健康新生儿脐带为原料，按照下述步骤准备：a)提取间充质干细胞；b)将所述间充质干细胞在血清培养基中培养至融合达40〜50%的单层细胞；c)在所述单层细胞中加入浓度25〜55mmol/L的葡萄糖溶液制成目标培养基；d)将所述目标培养基继续培养46〜50小时后制成预备培养基；e)将所述预备培养基浓缩纯化；所述a）步骤中，取新鲜足月健康胎儿脐带，用生理盐水冲洗血渍、剥离、剪成小块，均匀涂布，缓慢加入10〜15mL无血清培养基，在培养箱中培养，将原代细胞培养7〜10天后，更换无血清培养液，培养至细胞达到70%以上的融合形成脐带间充质干细胞，移去无血清培养液，添加适量的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)消化l分钟，使脐带间充质干细胞收缩脱离瓶壁，此时加入先前移去的培养上清液，并使用移液管轻轻吹打，将脐带间充质干细胞悬液移入50mL离心管，离心，去除上清液，重新加入无血清培养基将脐带间充质干细胞重悬，并计数，按此方法传代培养；所述b)步骤中，在所述脐带间充质干细胞的第3代细胞加入含有5〜10%氨基酸的血清中培养至40〜50%单层细胞；所述c)步骤中，在所述单层细胞中加入葡萄糖溶液，所述葡萄糖浓度为25〜55mmol/L，制成目标培养基；所述d）步骤中，将所述目标培养基继续培养46〜52小时后，使用过滤器过滤，制成预备培养基；所述e）步骤中，将所述预备培养基烘干，浓缩提纯。优选的，所述生理盐水为浓度在50〜100ug/mL之间的青霉素和链霉素。优选的，所述培养箱内培养条件为温度37°C、二氧化碳体积分数为5%，饱和湿度为95%。优选的，所述胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)质量比例为0.1〜0.2。优选的，所述过滤器目数为0.2wn。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：脐带间充质干细胞条件培养基中含有大量细胞所需的生长因子，能够有效的降低细胞中R0S的产生，延缓细胞的衰老。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本说明的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为一种抗衰老剂的制备方法及其应用的间充质干细胞细胞融合度数据；图2为一种抗衰老剂的制备方法及其应用的间充质干细胞制备流程图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供一种技术方案：一种抗衰老剂的制备方法及其应用，所述抗衰老剂以健康新生儿脐带为原料，按照下述步骤准备：a)提取间充质干细胞；b)将所述间充质干细胞在血清培养基中培养至融合达40〜50%的单层细胞；c)在所述单层细胞中加入浓度25〜55mmol/L的葡萄糖溶液制成目标培养基；d)将所述目标培养基继续培养46〜50小时后制成预备培养基；e)将所述预备培养基浓缩纯化；所述a）步骤中，取新鲜足月健康胎儿脐带，用生理盐水冲洗血渍、剥离、剪成小块，均匀涂布，缓慢加入10〜15mL无血清培养基，在培养箱中培养，将原代细胞培养7〜10天后，更换无血清培养液，培养至细胞达到70%以上的融合形成脐带间充质干细胞，移去无血清培养液，添加适量的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)消化l分钟，使脐带间充质干细胞收缩脱离瓶壁，此时加入先前移去的培养上清液，并使用移液管轻轻吹打，将脐带间充质干细胞悬液移入50mL离心管，离心，去除上清液，重新加入无血清培养基将脐带间充质干细胞重悬，并计数，按此方法传代培养；所述b)步骤中，在所述脐带间充质干细胞的第3代细胞加入含有5〜10%氨基酸的血清中培养至40〜50%单层细胞；所述c)步骤中，在所述单层细胞中加入葡萄糖溶液，所述葡萄糖浓度为25〜55mmol/L，制成目标培养基；所述d）步骤中，将所述目标培养基继续培养46〜52小时后，使用过滤器过滤，制成预备培养基；所述e）步骤中，将所述预备培养基烘干，浓缩提纯。所述生理盐水为浓度在50〜100ug/mL之间的青霉素和链霉素。所述培养箱内培养条件为温度37°C、二氧化碳体积分数为5%，饱和湿度为95%。所述胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)质量比例为0.1〜0.2。所述过滤器目数为0.2wn。实施例1：在超净工作台中进行操作，取新鲜足月健康胎儿脐带，用60ug/mL生理盐水冲洗去除血渍，剪成小块，均匀涂布，缓慢加入10mL无血清培养基，置置于温度37°C、二氧化碳体积分数为5%，饱和湿度为95%的培养箱中培养，将原代细胞培养7天后，更换无血清培养液，培养至细胞达到70%的融合，移去无血清培养液，添加质量比例为0.13%的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)消化lmin，脐带间充质干细胞收缩脱离瓶壁，此时加入先前移去的培养上清液，并使用移液管轻轻吹打，将脐带间充质干细胞悬液移入50mL离心管，离心8min，离心速率为1000rpm，去除上清液，重新加入无血清本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗衰老剂的制备方法及其应用，其特征在于，所述抗衰老剂以健康新生儿脐带为原料，按照下述步骤准备：/na)提取间充质干细胞；/nb)将所述间充质干细胞在血清培养基中培养至融合达40〜50%的单层细胞；/nc)在所述单层细胞中加入浓度25〜55mmol/L的葡萄糖溶液制成目标培养基；/nd)将所述目标培养基继续培养46〜50小时后制成预备培养基；/ne)将所述预备培养基浓缩纯化；/n所述a）步骤中，取新鲜足月健康胎儿脐带，用生理盐水冲洗血渍、剥离、剪成小块，均匀涂布， 缓慢加入10〜15mL无血清培养基，在培养箱中培养，将原代细胞培养7〜10天后，更换无血清培养液，培养至细胞达到70%以上的融合形成脐带间充质干细胞，移去无血清培养液，添加适量的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)消化l分钟，使脐带间充质干细胞收缩脱离瓶壁，此时加入先前移去的培养上清液，并使用移液管轻轻吹打，将脐带间充质干细胞悬液移入50mL离心管，离心，去除上清液，重新加入无血清培养基将脐带间充质干细胞重悬，并计数，按此方法传代培养；/n所述b)步骤中，在所述脐带间充质干细胞的第3代细胞加入含有5〜10%氨基酸的血清中培养至40〜50%单层细胞；/n所述c)步骤中，在所述单层细胞中加入葡萄糖溶液，所述葡萄糖浓度为25〜55mmol/L，制成目标培养基；/n所述d）步骤中，将所述目标培养基继续培养46〜52小时后，使用过滤器过滤，制成预备培养基；/n所述e）步骤中，将所述预备培养基烘干，浓缩提纯。/n...

【技术特征摘要】
1.一种抗衰老剂的制备方法及其应用，其特征在于，所述抗衰老剂以健康新生儿脐带为原料，按照下述步骤准备：
a)提取间充质干细胞；
b)将所述间充质干细胞在血清培养基中培养至融合达40〜50%的单层细胞；
c)在所述单层细胞中加入浓度25〜55mmol/L的葡萄糖溶液制成目标培养基；
d)将所述目标培养基继续培养46〜50小时后制成预备培养基；
e)将所述预备培养基浓缩纯化；
所述a）步骤中，取新鲜足月健康胎儿脐带，用生理盐水冲洗血渍、剥离、剪成小块，均匀涂布，缓慢加入10〜15mL无血清培养基，在培养箱中培养，将原代细胞培养7〜10天后，更换无血清培养液，培养至细胞达到70%以上的融合形成脐带间充质干细胞，移去无血清培养液，添加适量的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)消化l分钟，使脐带间充质干细胞收缩脱离瓶壁，此时加入先前移去的培养上清液，并使用移液管轻轻吹打，将脐带间充质干细胞悬液移入50mL离心管，离心，去除上清液，重新加入无血清培养基将脐带间充质干细胞重悬，并计数，按此方法传代培养；
所述b)步骤中，在所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝志号，郝好杰，陈惠华，刘杰，
申请(专利权)人：郝志号，
类型：发明
国别省市：河南;41