一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法及其应用，所述药物组合物制备包含自体脂肪采集、自体脂肪微片段的获取、脂肪间充质干细胞的培养、配制制剂。应用本发明专利技术的方法制备的制剂用于膝骨关节炎患者治疗，患者采取平卧位，接受治疗时侧膝关节伸直，保持足中立位，穿刺部位充分消毒，关节积液较多的患者先抽尽积液，使用关节镜清碎片，穿刺成功后保留针头注入制备好的制剂约5ml‑15ml，注射后来回屈伸活动关节数次。注射制剂后，膝关节疼痛减轻，痉挛缓解，改善膝关节功能。

【技术实现步骤摘要】
一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法及其应用
本专利技术涉及医药领域，尤其涉及一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法及其应用。
技术介绍
膝骨关节炎(kneedegenerativeostearthrosis，KOA)以骨刺形成及软骨退变为主，多见于中老年人，随年龄增长症状逐渐加重。膝骨关节炎常见的症状是疼痛及患肢功能障碍、肌力退变等。常规治疗方法主要是改善关节功能及缓解疼痛为主。但是常规治疗时患者往往症状反复发作。虽然应用非类固醇类消炎药能够缓解疼痛，但不能祛除病因，无法延缓或逆转关节软骨的退变，且停药后易复发和造成消化系统及肝肾功能损害。膝骨关节炎最为常见的治疗方法主要是以药物为主的治疗方法，目前常用的治疗人膝骨关节炎的药物主要有对乙酰氨基酚、非甾体类消炎药、双瑞醋因等。对已酰氨基酚对人膝骨关节炎的治疗机制目前还不是十分清楚。但是它对老年人膝骨关节炎的病症有缓解疼痛的作用，而且服用对已酰氨基酚所产生的不良反应与布洛芬相比较为轻微，但是却没有明显的消除炎症的作用。非甾体类消炎药具有防止软骨被破坏的疗效，这主要是通过抑制前列腺素的合成而形成的治疗人膝骨关节炎的方法。但是，不是所有的非甾体类消炎药都可以进行人膝骨关节炎的治疗。许多老年人服用非甾体类消炎药会产生诸如溃疡、胃肠道不适和肾毒性等不良反应。双瑞醋因作为治疗人膝骨关节炎的慢性药物，主要产生于大黄提取物，通过抑制氧自由基的产生和释放来稳定溶酶体膜的同时导致金属蛋白酶的活性被抑制。这些机制共同运作导致关节软骨的抗炎性增强，使得关节软骨得到保护。除了上述的药物治疗外，还可以通过手术的方式进行治疗，主要就是关节清理术和软骨下骨钻孔术。目前手术进行关节清理术仍然存在众多的争议，临床对比实验表明，关节清理术只适用于人膝骨关节炎早期。其次，软骨下骨钻孔手术可以伴随着关节清洁术同时进行。软骨下骨钻孔手术的机制是由于机械的原因使得关节软骨破裂，造成关节内部出现出血现象和纤维蛋白导致凝块。与此同时，关节腔内滞留的未分化的细胞经过分化形成了软骨细胞，形成一种与周围软骨组织不同的软骨组织。这种软骨组织无法起正常的软骨组织修复关节表面的作用。
技术实现思路
本专利技术旨在一定程度上解决上述相关技术中的技术问题之一。因此，本专利技术的目的在于提出一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备及其应用，具有膝关节疼痛减轻，痉挛缓解，改善膝关节功能的优点。为解决上述问题，本专利技术采用的技术方案是：一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法包括：自体脂肪采集、自体脂肪微片段的获取、脂肪间充质干细胞的培养、配制制剂。所述自体脂肪采集：制备柯氏液：生理盐水500ml、2％利多卡因50ml及0.1％肾上腺素1ml。术中患者在手术台上取仰卧位，充分暴露患者腹部，常规消毒后铺无菌洞巾。于两侧髂前上棘上方5cm处给予局部麻醉后使用麻醉穿刺针于每侧取脂肪部位使用120ml配制的柯氏液进行充分浸润麻醉，麻醉成功后等待5-10min后再行取脂操作，穿刺针获取的脂肪组织，静置3-5min后转移至盛有100ml保存液的脂肪采集瓶，所述脂肪保存液包含79％DMEM、20％人血白蛋白、0.5％青霉素、0.5％链霉素，采集瓶4℃保存。所述自体脂肪微片段的获取：利用微片段分离装置分离采集的自体脂肪组织，获得脂肪微片段，取出一部分进行冻存，用于冻存的冻存液成分包括：自体血浆和透明质酸钠，获得的自体脂肪微片段与冻存液按照体积比1：1的比例进行冻存，冻存的自体脂肪微片段组织悬液按照如下特定的冻存程序保存。S1:为将样本以每分钟降低1℃的速度降温至-9.5℃，S2:步是设置箱体温度以每分钟降低2℃的速度降温至-22℃，S3:是箱体温度以每分钟降低10℃的速度降低至-35℃，S4:是样本以每分钟降低0.5℃的速度降低至-47℃，S5:是样本以每分钟降低1℃的速度降温至-65℃，S6:是样本以每分钟降低10℃的速度降低至-90℃。所述脂肪间充质干细胞的培养：将自体脂肪微片段，联合二、四型胶原酶于37℃消化60min，间或摇晃，1000rpm/min，15min，吸弃上层脂肪后，混匀用200目筛网过滤。所获得的细胞悬液1200r/min，离心8min，细胞沉淀用PBS洗涤后，调细胞密度为8.0×106个/m2，用5ml含89.9％DMEM、10％自体血浆、0.1％维生素C的培养基进行悬浮，种于25cm2的培养瓶中，置于37℃低氧环境培养箱中培养。48h后，吸出悬浮细胞液体，更换新培养基。3d换液1次。观察生长情況并照相。培养10d左右细胞达80％以上融合度后，用胰酶消化后收集细胞进行传代培养记为P1。5d左右再传代，依次记为P1～P5代，直至培养至P5代。所述配制制剂：脂肪间充质干细胞培养至P5代时，用胰酶消化后收集细胞，1200rpm/min，15min，弃上清，用含有自体10％PRP(自体血清)的生理盐水进行重悬，调整细胞浓度至1×106/ml；同时取出冻存的自体脂肪微片段组织悬液于42℃水浴复温，将冻存组织悬液与细胞悬液按照1：1～2的比例进行混合，配置成制剂。一种应用本专利技术所述的治疗膝骨关节炎的药物组合物的制备方法制备的制剂的应用，包括给药治疗：患者术中采取平卧位，接受治疗侧膝关节伸直，保持足中立位。穿刺部位充分消毒，关节积液较多的患者先尽量抽尽积液，使用关节镜清碎片。穿刺成功后保留针头注入制备好的制剂约5ml-15ml，注射后来回屈伸活动关节数次。本专利技术的有益效果是：注射应用本专利技术制备的制剂后，膝关节疼痛减轻，痉挛缓解，改善膝关节功能。附图说明为了更清楚地说明本专利技术或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为应用本专利技术制备的制剂治疗6个月后，治疗前后MRI检查图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行具体描述。自体脂肪采集：备500ml生理盐水、2％利多卡因50ml及0.1％肾上腺素1ml，术中制备成柯氏液，准备手术。术中患者在手术台上取仰卧位，充分暴露患者腹部，常规消毒后铺无菌洞巾。于两侧髂前上棘上方5cm处给予局部麻醉后使用麻醉穿刺针于每侧取脂肪部位使用120ml柯氏液进行充分浸润麻醉，麻醉成功后等待5-10min后再行取脂操作，穿刺针获取的脂肪组织，静置3-5min后转移至盛有100ml保存液，所述保存液包含79％的DMEM79ml、20％的人血白蛋白20ml、0.5％的青霉素0.5ml、0.5％的链霉素0.5ml，采集瓶4℃保存。自体脂肪微片段的获取：利用微片段分离装置分离采集的自体脂肪组织，获得脂肪微片段，取出一部分进行冻存，用于冻存的冻存液成分包括：自体血浆和透明质酸钠，获得的自体脂肪微片段与冻存液按照1：1的比例进行冻存，冻存的自体脂肪微片段组织悬液按照如下特定的冻存程序保存本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法，其特征在于，包括自体脂肪采集、自体脂肪微片段的获取、脂肪间充质干细胞的培养、配制制剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法，其特征在于，包括自体脂肪采集、自体脂肪微片段的获取、脂肪间充质干细胞的培养、配制制剂。


2.根据权利要求1所述的治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法，其特征在于，所述自体脂肪采集包括两侧髂前上棘上方给予局部麻醉后使用麻醉穿刺针于每侧取脂肪部位使用柯氏液进行充分浸润麻醉，麻醉成功后再行取脂操作，穿刺针获取的脂肪组织，静置后转移至盛有保存液的脂肪采集瓶，采集瓶4℃保存。


3.根据权利要求1所述的治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法，其特征在于，所述自体脂肪微片段的获取包括分离采集的脂肪组织，获得脂肪微片段，取出一部分冻存于冻存液中，所述冻存液成分包括：自体血浆和透明质酸钠，获得的自体脂肪微片段与冻存液按照体积比1：1的比例进行冻存，冻存的自体脂肪微片段组织悬液按照特定的冻存程序保存。


4.根据权利要求1所述的治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞的培养包括；自体脂肪微片段经二、四型胶原酶联合消化，吸弃上层脂肪后混匀过滤，所获得的细胞悬液用包含DMEM、自体血浆、维生素C的培养基悬浮，种于培养瓶中，置于37℃低氧环境培养，培养至P5代。


5.根据权利要求1所述的治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法，其特征在于，所述配制制剂，包括脂肪间充质干细胞培养至P5代时，用胰酶消化后收集...

【专利技术属性】
技术研发人员：任贺，张美荣，孙岳，蒋鲁亚，
申请(专利权)人：安迪博斯生命医学研发天津有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12