一种药物指纹图谱的测定方法及其指纹图谱技术

本发明专利技术公开了一种药物组合物指纹图谱的测定方法，通过高效液相色谱法测定该药物组合物的指纹图谱从而有效监控该药物质量。该方法包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取药物适量，溶于流动相C中，摇匀，滤过，取续滤液；(2)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为甲醇，流动相C为磷酸水溶液；检测波长260～300nm；(3)测定吸取上述供试品溶液注入液相色谱仪，使用高效液相色谱法进行测定，得到药物指纹图谱；其中，所述药物选自丹参药材或丹香葡萄糖滴注液中的一种。该检测方法操作方便，效率高效，重复性和稳定性好，易于掌握。

【技术实现步骤摘要】
一种药物指纹图谱的测定方法及其指纹图谱
本专利技术涉及医药
，具体涉及一种药物指纹图谱的测定方法及其指纹图谱。
技术介绍
中药指纹图谱是借助于波谱或色谱技术获得的中药化学成分的光谱图或色谱图，是一种综合的、可量化的鉴别手段，是当前符合中药特色的评价中药真实性、稳定性和一致性的质量控制模式之一。目前，美国FDA、英国和印度草药典、德国药用植物学会、加拿大药用植物学会均接受色谱指纹图谱的质控方法。由于中药复方指纹图谱整张图谱是由不同峰群组成，每一峰群都代表一组生物信息，且各种生物信息之间的相互协同及拮抗作用，正好体现了中药复方的配伍和组方理论。此外，这些峰群或峰群之间通过对机体主病及主证的治疗，体现了控制某张中药复方指纹图谱，就可确保其相应药效。目前中药指纹图谱的建立方法主要有：光谱法，如紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)；色谱法，如薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、毛细管电泳法；以及其他方法，如x射线衍射法、核磁共振法等。其中高效液相色谱法(HPLC)具有分析速度快，定量精密度高，检测器种类多，稳定性好等特点，不受样品挥发度和热稳定性的限制，比气相色谱法等其他方法应用范围更广，是构建指纹图谱的主要方法之一。冠状动脉粥样硬化性心脏病是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病，常常被称为“冠心病”。其主要表现为典型的胸痛或猝死症状，在美国和许多发达国家排在死亡原因的第一位。丹香葡萄糖滴注液主要功效为活血理气，用于瘀血闭阻所致的胸痹及中风后遗证；冠心病，心绞痛，心肌梗塞及脑梗塞后遗证均属上述证候者，是一种疗效和安全性俱佳的纯中药制剂。丹香葡萄糖滴注液由丹参、降香和葡萄糖组成，其中，丹参中含有丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡА、丹参酮Ⅱв、隐丹参酮、紫草酸B、丹参隐螺内酯、丹参酸乙、二氢异丹参酮Ⅰ、丹参醇、丹参内酯、替告皂苷元、β-谷固醇、豆固醇、柳杉酚等有效成分，降香中含有异黄酮衍生物的单聚体、双聚体、肉桂烯类衍生物等有效成分，由于丹香葡萄糖滴注液使用的药材丹参和降香均具有复杂的化学成分，导致该注射液成分较为复杂，因此，建立一种包括丹香葡萄糖滴注液的药物的指纹图谱测定方法，特别是通过高效液相色谱法测定指纹图谱信息，从药物物质群整体的角度给予其质量控制具有非常重要的意义。目前对于丹香葡萄糖滴注液的指纹图谱的测定尚未见报道。由于丹香葡萄糖滴注液所用药材丹参和降香中的药物活性成分都比较多，因此这两种药物同时检测时得到的指纹图谱必须清晰表现出丹参和降香中各自的有效活性成分，避免不同成分的峰出现重叠，这就给其指纹图谱的建立带来了不小的困难。现有技术中，有大量报道丹参药材或含有丹参组分的相关复方制剂的指纹图谱的检测方法，然而，我们通过实验得知现有技术关于丹参或其相关制剂的HPLC指纹图谱检测条件不能用于丹香葡萄糖滴注液指纹图谱的测定，其存在不能有效分离丹参、降香各自的有效活性成分等缺点。例如申请号为CN201810543673.X的中国专利公开了一种丹参川芎嗪注射液的HPLC指纹图谱检测方法，以甲醇为流动相A，0.05％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；申请号为CN01119925.3的中国专利公开了一种丹参药材指纹图谱建立的方法及其标准指纹图谱，以流动相为8∶92∶1的甲醇-水-冰醋酸进行等度洗脱；申请号为CN201310040437.3的中国专利公开了一种丹参药材的指纹图谱鉴别方法，以乙腈-0.01-2％冰醋酸为流动相梯度洗脱，梯度程序为：0min→5min→30min→45min→60min→62min→75min：对应流动相：乙腈：2％→7％→15％→20％→35％→50％→50％；0.01-2％冰醋酸：98％→93％→85％→80％→65％→50％→50％；然而，申请人采用以上检测方法，均未能完全分离丹香葡萄糖滴注液中的有效成分。
技术实现思路
本专利技术提供的一种药物指纹图谱的测定方法，旨在解决上述
技术介绍
中存在的问题。为了实现上述技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种药物指纹图谱的测定方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取药物适量，溶于流动相C中，摇匀，滤过，取续滤液；(2)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为甲醇，流动相C为磷酸水溶液；检测波长260～300nm；(3)测定吸取上述供试品溶液注入液相色谱仪，使用高效液相色谱法进行测定，得到药物指纹图谱；其中，所述药物选自丹参药材或丹香葡萄糖滴注液中的一种。所述步骤(2)中检测波长为280～300nm；流速为0.8-1.2mL/min，柱温为25-35℃，进料量为5-20μL。优选的，所述步骤(2)中检测波长为295nm；流速为1mL/min，柱温为30℃，进料量为10μL。优选的，所述流动相C为0.08％磷酸水溶液。优选的，所述药物为丹参药材时，供试品溶液的制备方法为：取丹参药材粉末1.0-2.0g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加水50mL，称定重量，超声处理25min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加流动相C使混悬，转移至5mL量瓶中，加流动相C稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。本专利技术中，所述丹香葡萄糖滴注液时，供试品溶液的制备方法为：精密量取2-5mL丹香葡萄糖滴注液，置25mL量瓶中，加流动相C稀释至刻度，摇匀，即得。本专利技术中，(a)步骤中所述色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为甲醇，流动相C为磷酸水溶液；其中，梯度洗脱程序为：0-2min时，流动相A为0，流动相B为5％的甲醇；流动相C为95％的0.08％磷酸水溶液；10min时，流动相A为5％的乙腈，流动相B为5％的甲醇；流动相C为90％的0.08％磷酸水溶液；20min时，流动相A为15％的乙腈，流动相B为0％的甲醇；流动相C为85％的0.08％磷酸水溶液；60min时，流动相A为25％的乙腈，流动相B为0％的甲醇；流动相C为75％的0.08％磷酸水溶液；61min时，流动相A为0，流动相B为5％的甲醇；流动相C为95％的0.08％磷酸水溶液；70min时，流动相A为0，流动相B为5％的甲醇；流动相C为95％的0.08％磷酸水溶液。其中，所述色谱柱为Shimadushim-packC18色谱柱，色谱柱规格为：内径4.6mm，长度250mm，填料粒径5μm。本专利技术中，所测得的丹参药材指纹图谱中共有10个指纹峰，保留时间分别为：1号峰为20.98，2号峰为24.02,3号峰为28.02,4号峰为32.43,5号峰为38,36，6号峰为39.61,7号峰为47.04,8号峰为52.73，9号峰为57.86,10号峰为59.30。本专利技术中，所测得的丹香葡萄糖注射液指纹图谱中共有11个指纹峰为：1号峰为8.67,2号峰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药物指纹图谱的测定方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取药物适量，溶于流动相C中，摇匀，滤过，取续滤液；(2)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为甲醇，流动相C为磷酸水溶液；检测波长260～300nm；(3)测定吸取上述供试品溶液注入液相色谱仪，使用高效液相色谱法进行测定，得到药物指纹图谱；其中，所述药物选自丹参药材或丹香葡萄糖滴注液中的一种。/n

【技术特征摘要】
1.一种药物指纹图谱的测定方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取药物适量，溶于流动相C中，摇匀，滤过，取续滤液；(2)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为甲醇，流动相C为磷酸水溶液；检测波长260～300nm；(3)测定吸取上述供试品溶液注入液相色谱仪，使用高效液相色谱法进行测定，得到药物指纹图谱；其中，所述药物选自丹参药材或丹香葡萄糖滴注液中的一种。


2.根据权利要求1所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中检测波长为280～300nm；流速为0.8-1.2mL/min，柱温为25-35℃，进料量为5-20μL。


3.根据权利要求2所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中检测波长为295nm；流速为1mL/min，柱温为30℃，进料量为10μL。


4.根据权利要求1所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述流动相C为0.08％磷酸水溶液。


5.根据权利要求1所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述药物为丹参药材时，供试品溶液的制备方法为：取丹参药材粉末1.0-2.0g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加水50mL，称定重量，超声处理25min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加流动相C使混悬，转移至5mL量瓶中，加流动相C稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。


6.根据权利要求1所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述药物为丹香葡萄糖滴注液时，供试品溶液的制备方法为：精密量取2-5mL丹香葡萄糖滴注液，置25mL量瓶中，加流动相C稀释至刻度，摇匀，即得。


7.根据权利要求1所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于：(a)步骤中所述色谱条件为...

【专利技术属性】
技术研发人员：张涛涛，谢珊，何莉华，
申请(专利权)人：贵州金桥药业有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52