一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物及其应用，所述检测MYL3基因突变的引物探针组合物包括检测MYL3基因突变位点c.374A>C的实时荧光PCR引物和探针。本发明专利技术还提供了一种检测MYL3基因突变的试剂盒及所述的检测MYL3基因突变的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法。所述引物探针组合物具有良好的特异性；所述检测MYL3基因突变的试剂盒灵敏度高，特异性好；所述试剂盒的使用方法准确性好，耗时较短，可同时对大量样本进行检测，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物及其应用
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物及其应用。
技术介绍
肥厚型心肌病(Hypertrophiccardiomyopathy，HCM)是一种以左心室或双心室不对称性肥厚或心肌肥大为特征的遗传性心脏疾病，主要病理特征为心肌细胞弥漫性肥大、畸形、核大、深染和心肌纤维紊乱等。HCM是一种“肌节疾病”，许多研究表明，肌节蛋白基因变异是HCM的主要致病原因。心脏肌节主要包括粗肌丝和细肌丝，肌节相关基因位点的突变，破坏了肌球蛋白和肌动蛋白之间的肌丝滑动，改变了心肌细胞内的钙信号通路，影响了左心室的发育和心肌壁的结构，进而导致心脏的功能不全。MYL3是HCM的主要致病基因之一，该基因高表达于心肌组织，编码肌球蛋白轻链3，是肌小节粗肌丝肌球蛋白六聚体的重要组成部分，在心肌收缩中起到重要的调节作用。MYL3基因突变后，可能通过增强对Ca2+的诱捕导致细胞内Ca2+释放异常，激活了Ca2+依赖性的信号转导途径，使心肌细胞重塑，最终导致HCM的发生。目前，遗传疾病基因突变的检测方法很多，如：限制性片段长度多态性、SNPshot多重PCR技术、高分辨率溶解曲线分析、PCR扩增直接进行毛细管电泳测序和高通量测序等。毛细管电泳技术是基因突变检测的金标准，但因其具有对设备的要求高、价格昂贵等缺点，很难从实验室普及到临床。CN111411149A公开了一种检测肥厚型心肌病基因突变的引物组、试剂盒和方法，通过对88个突变位点的引物组进行联合检测，成本较低，且无需荧光标记，适合大量样本的批量筛查。但该检测方法需要借助于复杂的专用仪器及基因分型系统，限制了产品的推广与使用，且对检测人员的技术水平要求较高。对HCM患者进行基因检测和家族筛查能够为临床提供重要的指导作用。如何建立一种简便、快速、经济和准确的HCM基因突变筛查方法，为HCM的预防、辅助临床诊断和预后评估提供技术支持，已成为亟待解决的问题。
技术实现思路
针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物及其应用，使用不同的荧光报告基团对野生型MYL3的探针和突变型MYL3的探针分别进行标记，再将待测样本与质控品一同进行扩增，根据荧光信号的相对强度即可确认样本的基因型，操作简单，成本较低。为达此目的，本专利技术采用如下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物，所述检测MYL3基因突变的引物探针组合物包括检测MYL3基因突变位点c.374A>C的实时荧光PCR引物和探针。本专利技术中，所述荧光PCR引物可对MYL3基因中一段长度为134bp的片段进行特异性扩增，进而对MYL3基因突变位点c.374A>C进行快速检测，操作简单，耗时较短，准确性好，具有广阔的应用前景。优选地，所述实时荧光PCR引物包括SEQIDNo.1～2所示的核苷酸序列。SEQIDNo.1：5'-TGCAGAGCTCAATACCAAGATG-3'；SEQIDNo.2：5'-CATTGCCCTCCTTGTCGAAGAC-3'。优选地，所述探针包括野生型MYL3的探针和突变型MYL3的探针。优选地，所述野生型MYL3的探针包括SEQIDNo.3所示的核苷酸序列，所述突变型MYL3的探针包括SEQIDNo.4所示的核苷酸序列。SEQIDNo.3：TCCAAGAACAAGGACACAGGC；SEQIDNo.4：CCAAGAACACGGACACAGGCA。本专利技术中，所述野生型MYL3的探针为野生型MYL3的特异性探针，所述突变型MYL3的探针为突变型MYL3的特异性探针。本专利技术中，同时使用野生型MYL3的探针和突变型MYL3的探针进行检测，可以在一次检测反应中确认样本的基因型，确认是否发生了突变及突变的类型，耗时更短，成本更低。优选地，所述探针为Taqman探针。优选地，所述Taqman探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有淬灭基团。优选地，所述荧光报告基团包括FAM和/或HEX。优选地，所述淬灭基团包括MGB。优选地，所述野生型MYL3的探针的荧光报告基团与所述突变型MYL3的探针的荧光报告基团不同。优选地，所述野生型MYL3的探针的荧光报告基团包括FAM。优选地，所述突变型MYL3的探针的荧光报告基团包括HEX。第二方面，本专利技术提供了一种检测MYL3基因突变的试剂盒，所述检测MYL3基因突变的试剂盒包括第一方面所述的检测MYL3基因突变的引物探针组合物。本专利技术中，将所述检测MYL3基因突变的引物探针组合物与检测试剂相结合，制成的检测MYL3基因突变的试剂盒可以实现MYL3基因c.374位点突变的快速检测，特异性好，准确性高。优选地，所述试剂盒还包括PCR反应液和/或染料。优选地，所述PCR反应液包括DNA聚合酶、Mg2+缓冲液、dNTPs和水。优选地，所述染料包括Rox校正染料。优选地，所述检测MYL3基因突变的试剂盒还包括质控品。优选地，所述质控品包括野生型质控品、纯合突变型质控品或杂合突变型质控品中的任意一种或至少两种的组合，例如可以是野生型质控品、纯合突变型质控品、杂合突变型质控品、野生型质控品与纯合突变型质控品的组合、野生型质控品与杂合突变型质控品的组合、纯合突变型质控品和杂合突变型质控品的组合或野生型质控品、纯合突变型质控品和杂合突变型质控品的组合。本专利技术中，所述质控品通过如下方法进行制备：以野生型和/或纯合突变型的基因组作为模板，使用SEQIDNo.5～6所示的核苷酸序列进行PCR扩增。SEQIDNo.5：5'-TGTGAATAGCAAAGGGCTATGG-3'；SEQIDNo.6：5'-AGGATGTCCCTGGAAGGAGTTG-3'。所述PCR扩增的程序包括：预变性：93～98℃，2.5～3.5min，温度例如可以是93℃、93.5℃、94℃、94.5℃、95℃、95.5℃、96℃、96.5℃、97℃、97.5℃或98℃，时间例如可以是2.5min、3min或3.5min；循环扩增：93～98℃，20～40s，温度例如可以是93℃、93.5℃、94℃、94.5℃、95℃、95.5℃、96℃、96.5℃、97℃、97.5℃或98℃，时间例如可以是20s、21s、22s、23s、24s、25s、26s、27s、28s、29s、30s、31s、32s、33s、34s、35s、36s、37s、38s、39s或40s；55～57℃，20～40s，温度例如可以是55℃、55.5℃、56℃、56.5℃或57℃，时间例如可以是20s、21s、22s、23s、24s、25s、26s、27s、28s、29s、30s、31s、32s、33s、34s、35s、36s、37s、38s、39s或4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述检测MYL3基因突变的引物探针组合物包括检测MYL3基因突变位点c.374A>C的实时荧光PCR引物和探针。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述检测MYL3基因突变的引物探针组合物包括检测MYL3基因突变位点c.374A>C的实时荧光PCR引物和探针。


2.根据权利要求1所述的检测MYL3基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述实时荧光PCR引物包括SEQIDNo.1～2所示的核苷酸序列；
优选地，所述探针包括野生型MYL3的探针和突变型MYL3的探针；
优选地，所述野生型MYL3的探针包括SEQIDNo.3所示的核苷酸序列，所述突变型MYL3的探针包括SEQIDNo.4所示的核苷酸序列。


3.根据权利要求1或2所述的检测MYL3基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述探针为Taqman探针；
优选地，所述Taqman探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有淬灭基团；
优选地，所述荧光报告基团包括FAM和/或HEX；
优选地，所述淬灭基团包括MGB；
优选地，所述野生型MYL3的探针的荧光报告基团与所述突变型MYL3的探针的荧光报告基团不同；
优选地，所述野生型MYL3的探针的荧光报告基团包括FAM；
优选地，所述突变型MYL3的探针的荧光报告基团包括HEX。


4.一种检测MYL3基因突变的试剂盒，其特征在于，所述检测MYL3基因突变的试剂盒包括权利要求1～3任一项所述的检测MYL3基因突变的引物探针组合物；
优选地，所述试剂盒还包括PCR反应液和/或染料；
优选地，所述PCR反应液包括DNA聚合酶、Mg2+缓冲液、dNTPs和水；
优选地，所述染料包括Rox校正染料。


5.根据权利要求4所述的检测MYL3基因突变的试剂盒，其特征在于，所述检测MYL3基因突变的试剂盒还包括质控品；
优选地，所述质控品包括野生型质控品、纯合突变型质控品或杂合突变型质...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵跃，黎江溪，
申请(专利权)人：大理大学，
类型：发明
国别省市：云南;53