一种以人内源性TERT蛋白为靶点筛选端粒酶调控剂的细胞模型及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种以人内源性TERT蛋白为靶点筛选端粒酶调控剂的细胞模型及其制备方法和应用，所述细胞模型为采用外源稳定表达人TERT蛋白的细胞作为目的报告细胞，将P2A

【技术实现步骤摘要】
一种以人内源性TERT蛋白为靶点筛选端粒酶调控剂的细胞模型及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，更具体地，涉及一种以人内源性TERT蛋白为靶点筛选端粒酶调控剂的细胞模型及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]端粒是由一段高度重复有序的DNA序列(TTAGGG)与一系列相互作用的蛋白质组成的复杂的特殊结构。它位于真核生物染色体的末端，在保护染色体末端、维持基因组稳定性方面起到了至关重要的作用。随着正常细胞每分裂一次，因末端复制问题导致端粒长度逐渐缩短。当端粒缩短到一定程度时，细胞无法继续分裂，启动一系列相应的应答事件，进而进入了细胞衰老或凋亡的进程。因此，端粒和细胞衰老有着密切的联系。
[0003]端粒酶是细胞内存在的一种逆转录酶。人源端粒酶由催化亚基(human Telomerase Reverse Transcriptase，hTERT)和RNA亚基(Telomerase RNA，hTR)以及其他端粒酶相关蛋白组成。端粒酶的激活或者高表达端粒酶可以逆转端粒的缩短。由于hTR携带了一段与端粒重复序列互补的序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种以人内源性TERT蛋白为靶点筛选端粒酶调控剂的细胞模型，其特征在于，为采用外源稳定表达hTERT蛋白的细胞作为目的报告细胞，将P2A
‑
GFP敲入到hTERT的3
’
端、终止密码子TGA的前面，并稳定转染内参蛋白，得到所述hTERT
‑
P2A
‑
GFP报告细胞系，即得。2.根据权利要求1所述的细胞模型，其特征在于，所述外源稳定表达人TERT蛋白的细胞为将体外克隆的hTERT全长的编码序列连接到EF1a启动子的真核表达载体中，稳定转染到细胞内获得。3.根据权利要求1或2所述的细胞模型，其特征在于，所述细胞为293T细胞。4.根据权利要求1所述的细胞模型，其特征在于，所述敲入为采用CRISPR
‑
CAS9技术。5.根据权利要求1所述的细胞模型，其特征在于，所述内参蛋白为dsRed2蛋白。6.根据权利要求1～5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：松阳洲，马文宾，黄燕，颜思宇，刘峰，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：