一种多窦联合的脑静脉血栓动物模型及其构建方法技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，具体公开了一种多窦联合的脑静脉血栓动物模型及其构建方法。本发明专利技术通过半结扎联合氯化铁和凝血酶的方法，诱导出多个静脉窦联合血栓(如上矢状窦+横窦，上矢状窦+横窦+颈内静脉)，大面积静脉性脑梗死，脑出血等病理变化，且神经功能缺损更加严重、血栓持续时间更长的重症CVT动物模型，可用于重症CVT病理生理机制的研究和治疗策略的研究及评估，从而可能更有利于重症CVT患者的治疗和促进良好的预后、探寻新靶点和研发新型药物，以降低重症CVT患者的死亡率。以降低重症CVT患者的死亡率。

【技术实现步骤摘要】
一种多窦联合的脑静脉血栓动物模型及其构建方法


[0001]本专利技术涉及医药
，尤其涉及一种脑静脉血栓动物模型。

技术介绍

[0002]颅内静脉系统血栓形成(cerebral venous thrombosis,CVT)是一种不同于动脉性卒中的特殊类型的脑血管疾病，主要影响年轻人和儿童，是青年和中年卒中的重要原因，发病率有逐年增加的趋势，一项来自澳大利亚的流行病学调查显示，CVT年发病率为1.57/10万人/年，比以前报道的1.3/10万人更高，病变部位依次为多静脉窦[57.14％]、上矢状窦[16.19％]、横窦[11.43％]和乙状窦[8.57％]。约60％的CVT患者发生静脉性脑梗死或出血，即由闭塞的脑静脉窦或皮层静脉引起的脑组织局部水肿、出血。有静脉性脑梗死或出血的CVT属于重症CVT范畴，患者常有更严重的临床表现和更差的预后。有报道称，尽管颅内静脉血栓死亡率随着诊疗技术的发展在降低，但是严重的颅内静脉血栓患者死亡率仍高达34.2％，这可能与重症CVT的病理生理学机制目前仍然不是很清楚有关系。然而，脑静脉血栓动物模型对探讨其发病机制、病理生理学过程和治疗策略具有重要价值。
[0003]CVT动物模型能用来模拟人类的颅内静脉窦血栓形成，通过研究动物疾病模型，以便于对CVT这种疾病的病因及病理生理过程进行更深入的研究和探讨，从而有利于研发新的治疗靶点，促进疾病良好转归，所以CVT动物模型的科研价值是巨大的。
[0004]目前的CVT动物模型有永久性结扎型、临时阻断型、化学诱导型、介入型或插管型、植入自制移植物型、双极电凝型。永久性结扎型模型，能诱导上矢状窦血栓、静脉性脑梗死、脑出血病理变化，但是永久性结扎限制了治疗策略的研究；临时阻断型，操作简单，但是血栓不稳定；化学诱导型，同样也是操作简单，但是血栓不稳定，不能持续一周；介入或插管型，能诱导出上矢状窦血栓、静脉性脑梗死，但是操作比较复杂,耗材高昂；植入自制移植物型，操作简单，模拟上矢状窦血栓，但不是真正意义上的血栓形成，且不能用于治疗策略的研究；双极电凝型，适合研究皮层静脉血栓，但是创伤比较大。各类型模型优缺点见下表(表1引自中国现代神经疾病杂志)。
[0005]表1.各种脑静脉血栓模型制作方法优缺点
[0006][0007]以上动物模型大部分诱导的单纯上矢状窦血栓，多窦联合血栓并且合并大面积静脉性脑梗死的重症CVT模型，目前国内外尚未见报道。而临床工作中以多窦联合血栓患者最为多见，所以，目前急需一种能模拟多窦联合的、人类重症CVT的动物模型。

技术实现思路

[0008]为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种多窦联合的脑静脉血栓动物模型及其构建方法。
[0009]为了实现本专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0010]第一方面，本专利技术提供了一种多窦联合的脑静脉血栓动物模型的制备方法，包括如下步骤：
[0011](1)以非人动物为动物模型构建对象，麻醉后采用非吸收性外科缝线对上矢状窦(sss)进行半结扎；
[0012](2)结扎后，在上矢状窦表面贴敷20～40％氯化铁溶液，贴敷时间为5～10分钟；优选采用40％氯化铁溶液贴敷5分钟；
[0013](3)向上矢状窦的窦腔内注射凝血酶溶液，凝血酶的注射总量为150u。
[0014]所述方法先贴敷氯化铁溶液可造成静脉窦内皮细胞的损伤，局部会形成小的血栓，后注射凝血酶，更有利于血栓的形成及蔓延。若先注射凝血酶，容易造成进针部位的出血，同时凝血酶会迅速进入大鼠的肺循环容易造成肺栓塞致大鼠死亡。
[0015]进一步地，步骤(1)中，分别对上矢状窦的头侧和尾侧进行半结扎。
[0016]进一步地，所述步骤(2)在黑暗条件下进行，氯化铁溶液具有强氧化性，避光更有利于损伤静脉窦内皮细胞，不避光的情况下，可能会影响它的氧化作用。
[0017]进一步地，所述步骤(3)在1分钟之内完成，这样更有利于血栓的形成，速度太快容易造成大量的凝血酶进入大鼠肺循环，继发肺栓塞而致大鼠死亡，速度太慢也不利于血栓形成。
[0018]更进一步地，步骤(3)中，利用微量注射器向上矢状窦的窦腔内分3次注射凝血酶溶液，每次注射凝血酶溶液0.1mL，凝血酶含量50u。
[0019]在实际操作中，为确保操作目的的实现，在步骤(1)完成后，利用激光散斑仪探测上矢状窦结扎段内血流信号，血流信号下降到结扎前的50％
±
5％，验证半结扎操作完成；在步骤(3)完成后，利用激光散斑仪探测上矢状窦结扎段内血流信号，确定血流信号相较半结扎后进一步下降(图10)。
[0020]在本专利技术的具体实施方式中，作为示例性说明，所述动物模型为大鼠。然而在实际应用中，并不限于此。
[0021]第二方面，本专利技术提供一种多窦联合的脑静脉血栓动物模型，所述动物模型由前述制备方法构建而成。
[0022]所述动物模型具有多个静脉窦联合血栓，至少包括上矢状窦血栓和横窦血栓，还可包括颈内静脉血栓。
[0023]本专利技术通过半结扎上矢状窦，可造成上矢状窦血流淤滞，上矢状窦表面贴氯化铁线段，可造成上矢状窦内皮的损伤，注射凝血酶可造成血液高凝状态，即模拟了血栓形成的三要素，并且能诱导出多个静脉窦的血栓，所以更加接近人类重症CVT的病理过程。本专利技术
所提供的动物模型可以模拟人类重症CVT，可作为新型重症CVT动物模型，可用于重症CVT病理生理机制的研究和治疗策略的评估，具有很好的应用前景。
[0024]第三方面，本专利技术进一步提供所述动物模型在研究或筛选脑静脉血栓治疗靶点或治疗药物方面的应用，以及所述动物模型在评价脑静脉血栓治疗效果方面的应用。
[0025]本专利技术提供的动物模型，可用于人类重症CVT病理生理机制的研究和探讨，以及研究和探索新型治疗靶点，并用于治疗重症CVT的新型药物的研发，可能有利于重症CVT患者的治疗及转归。
[0026]本专利技术涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。
[0027]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，得到具体实施方式。
[0028]本专利技术的有益效果在于：
[0029]本专利技术通过半结扎联合氯化铁和凝血酶的方法，构建得到一种多窦联合的脑静脉血栓动物模型，该方法能诱导出多个静脉窦联合血栓(如上矢状窦+横窦，上矢状窦+横窦+颈内静脉)，大面积静脉性脑梗死，脑出血等病理变化，且神经功能缺损更加严重、血栓持续时间更长的重症CVT动物模型，可用于重症CVT病理生理机制的研究和治疗策略的研究及评估，从而可能更有利于重症CVT患者的治疗和促进良好的预后、探寻新靶点和研发新型药物，以降低重症CVT患者的死亡率。
[0030]本专利技术动物模型的构建方法操作简单，耗材低廉。动物模型稳定性好，血栓能维持超过一周，且能诱导出多个静脉窦联合血栓，大面积静脉性脑梗死，能很好的模拟人类重症CVT。
附图说明
[0031]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多窦联合的脑静脉血栓动物模型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以非人动物为动物模型构建对象，麻醉后采用非吸收性外科缝线对上矢状窦进行半结扎；(2)结扎后，在上矢状窦表面贴敷20～40％氯化铁溶液，贴敷时间为5～10分钟；(3)向上矢状窦的窦腔内注射凝血酶溶液，凝血酶的注射总量为150u。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，分别对上矢状窦的头侧和尾侧进行半结扎。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)在黑暗条件下进行。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)在1分钟之内完成。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，利用微量注射器向上矢状窦的窦腔内分3次注射凝血酶溶液，每次注射凝血酶溶液0.1m...

【专利技术属性】
技术研发人员：段建钢，肖立坡，吉训明，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：