一种杨树遗传转化方法技术

本发明专利技术涉及植物基因工程技术领域，公开了一种以杨树叶柄为外植体进行农杆菌侵染的高效遗传转化方法。本发明专利技术选择美洲黑杨和欧美杨的杂交种为实验材料，通过农杆菌介导法将pCAMBIA1301载体转化NL895外植体。对本发明专利技术以叶柄为外植体和以叶片为外植体的对照组进行侵染后的转化效率进行比较，发现以叶柄为外植体转化效率高达80.6％，比传统方法以叶片为外植体进行侵染转化效率提高5倍以上。首次公开了以NL895叶柄为外植体进行农杆菌侵染的方法，建立了一套针对NL895叶柄的杨树高效遗传转化完整体系，与选择叶片为外植体的传统方法相比转化效率有大幅度提高，同时可以提高分子育种效率，也可以为杨树转基因材料的创制和重要性状基因的功能验证提供了重要工具。要性状基因的功能验证提供了重要工具。要性状基因的功能验证提供了重要工具。

【技术实现步骤摘要】
一种杨树遗传转化方法


[0001]本专利技术属于植物基因工程
，涉及一种以杨树良种NL895叶柄为外植体进行农杆菌侵染的高效的杨树遗传转化方法。

技术介绍

[0002]杨树(Populus spp.)世界上分布最广、栽培面积最大的速生用材树种之一，是环境绿化的重要的树种。杨树也是全球第一个完成全基因组测序的木本植物，已被广泛用做木本植物基因功能研究和分子育种设计的模式树种。“南林895”(Populus deltoides
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P.euramericana
‘
NL895
’
)是南京林业大学以美洲黑杨(Populus deltoides)为母本，欧美杨(Populus euramericana cv)为父本杂交选育而成的优良无性系，其材质优良，木材产量高，在生产上大面积推广。NL895易于无性繁殖，是应用较为广泛的林木转基因受体材料，成为木本植物遗传基础研究的模式体系之一。建立高效的遗传转化体系是开展杨树基因功能研究和进行分子育种设计的基础。杨树遗传转化普遍以叶片为外植体，NL895现有的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种以杨树叶柄为外植体的遗传转化方法，包括以下步骤：(1)选择长势良好的美洲黑杨和欧美杨的杂交种无性系NL895组培苗为实验材料，剪取倒2
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4片展开叶叶柄作为外植体，用侵染液进行侵染；(2)侵染完成共培养2天后，将外植体在加有头孢羟氨苄(Cefadroxil/Cef，200mg/L)的无菌水中浸泡1
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10min，取出，用无菌纸吸干，置于分化培养基，在25℃培养室光照培养5
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10天，然后进行筛选培养；(3)筛选培养待外植体分化产生愈伤组织，用手术刀将愈伤组织切下转移到芽伸长培养基，直至长出抗性不定芽；(4)抗性不定芽生长到0.5
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2cm，分成单株转移到生根培养基，直至长成完整植株；(5)以pCAMBIA1301载体卡那霉素抗性基因(Kanamycin resistant gene)序列为模板设计引物，pCAMBIA1301
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Kan
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F：CGATACCGTAAAGCACGAGGAAG；pCAMBIA1301
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Kan
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R：TCACTGAAGCGGGAAGGGACT，选取生根良好的抗性苗提取DNA进行分子检测计算转化效率。2.权利要求1所述方法，其特征在于，所述分化培养基的组成包括MS 4.43g/L、蔗糖30g/L、6
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BA 0.5mg/L、TDZ 0.004mg/L、国产琼脂粉8g/L或进口琼脂粉6g/L或PHTAGEL 2.5g/L，所述分化培养基的pH值为5.80
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5.85。3.权利要求1所述的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：周芳伟，李淑娴，尹佟明，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：