一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法，包括如下步骤：(1)向赖氨酸营养缺陷型菌株中导入含赖氨酸脱羧酶基因的质粒，得到重组工程菌；(2)将步骤(1)所得重组工程菌于含赖氨酸的培养基中培养，通过测定OD

【技术实现步骤摘要】
一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法。

技术介绍

[0002]赖氨酸脱羧酶是一种专一对L
‑
赖氨酸进行脱羧反应的生物酶，其催化特点：专一性高，在合适反应条件下具备非常高的酶活；但是存在反应pH范围窄、温度稳定性差等特点。因此，开发一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法对赖氨酸脱羧酶的定向进化具有现实意义。
[0003]CRISPR
‑
Cas系统是一种细菌的免疫防御系统，由细菌在长期抵御外源DNA的过程中进化而形成，能够降解入侵的外源DNA(病毒或噬菌体等)，广泛存在于细菌和古细菌中。II型CRISPR
‑
Cas9系统在目前基因编辑方面应用最为广泛。该系统主要由三部分组成：起靶向目的序列的crRNA、能够和crRNA配对连接的tracrRNA以及酶切目的序列的Cas9蛋白。CRISPR序列转录成熟的crRNA与tracrRNA通过碱基互补配对，形成部分具有双链的RNA结构，进而和Cas9蛋白形成复合体，剪切外源DN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)向赖氨酸营养缺陷型菌株中导入含赖氨酸脱羧酶基因的质粒，得到重组工程菌；(2)将步骤(1)所得重组工程菌于含赖氨酸的培养基中培养，通过测定OD
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筛选表达赖氨酸脱羧酶的重组工程菌。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述赖氨酸营养缺陷型菌株的构建方法为将大肠杆菌工程菌株MG1655中的lysA基因敲除。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含赖氨酸脱羧酶基因的质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含赖氨酸脱羧酶基因的质粒的构建方法为将PCR复制大肠杆菌工程菌株...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈可泉，王昕，许晟，欧阳平凯，刘福建，陈昌主，谭伟民，马仁，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：