一种基于序列设计的无细胞体系线形模板降解抑制方法技术

本发明专利技术属于合成生物学蛋白表达模板设计领域，具体提供了一种基于序列设计的用于大肠杆菌无细胞基因表达体系线形基因模板降解抑制的方法：向线形基因模板的端部添加规律的富含鸟嘌呤、胞嘧啶碱基对的保护序列来抑制线形基因模板在无细胞基因表达体系内的降解；本发明专利技术的方法能够有效提高基于线形基因模板的无细胞基因表达体系的蛋白表达量，推动基于线形基因模板的无细胞基因表达体系的发展，扩大无细胞基因表达体系的应用范围。细胞基因表达体系的应用范围。细胞基因表达体系的应用范围。

【技术实现步骤摘要】
一种基于序列设计的无细胞体系线形模板降解抑制方法


[0001]本专利技术属于合成生物学蛋白表达模板设计领域，具体涉及一种用于无细胞蛋白质表达模板设计的方法。

技术介绍

[0002]无细胞基因表达在生命科学中用作基础研究工具已有五十多年的历史。但数十年来一些关键因素限制了其在工程应用上的潜力：蛋白质产量低且不稳定，反应时间不足，试剂成本较高，反应规模小，无法正确折叠复杂蛋白质和蛋白质组件，转录限于内源性细胞RNA聚合酶。近年来，技术的发展已经开始系统地解决这些局限性，从而使得无细胞基因表达能够在新兴的合成生物学领域中得到广泛的应用。近年来，以线形DNA为模板的无细胞基因表达逐渐受到人们的关注。无细胞基因表达体系通常采用环形质粒DNA作为模板。与环形质粒DNA相比，线形DNA的构建更为简单。环形质粒DNA的克隆通常是将目标质粒化转入感受态细胞内，而后通过细胞克隆，从细胞中提取出大量的目标质粒。而线形DNA的获取只需通过聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增得到复数的线形DNA，简化了克隆步骤，进一步缩短了实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于序列设计的用于大肠杆菌无细胞基因表达体系线形基因模板降解抑制的方法，其特征在于：向其中线形基因模板的端部添加规律的富含鸟嘌呤、胞嘧啶碱基对的保护序列来抑制线形基因模板在无细胞基因表达体系内的降解。2.根据权利要求1所述的方法，其中向线形基因模板的两端添加规律的富含鸟嘌呤、胞嘧啶碱基对的保护序列。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述无细胞基因表达体系为基于大肠杆菌细胞提取物的无细胞体系。4.根据权利要求1
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3任一项所述的方法，其中所述线形基因模板为线形DNA，其获得方式为以质粒模板进行PCR。5.根据权利要求1
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4任一项所述的方法，其中所述规律的富含鸟嘌呤、胞嘧啶碱基对的保护序列GC含量为60
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65％，优选为选自SEQ ID NO.1
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6的序列。6.根据权利要求1
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5任一项所述的方法，其中所述规律的富含鸟嘌呤、胞嘧啶碱基对的保护序列长度为5
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40个碱基对。7.一种基于序列设计的，通过大肠杆菌无细胞基因表达体系线形基因模板降解抑制，从而提高以线形DNA为模板的无细胞基因表达体系的蛋白质表达量的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢元，陈鑫杰，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：