在血液中的循环细胞生物标记在检测和诊断疾病中的应用及其分离方法技术

鉴定血液中的实体瘤和病毒感染的新的敏感细胞生物标记。这种生物标记可被用来确定癌、肉瘤和病毒的存在，快速测定治疗反应，早期检出癌症，早期检出癌症的复发，并可用来确定疗法。

【技术实现步骤摘要】
在血液中的循环细胞生物标记在检测和诊断疾病中的应用及其分离方法本申请是申请日为2015年8月25日，中国国家申请号为201580058052.7，专利技术名称为“在血液中的循环细胞生物标记在检测和诊断疾病中的应用及其分离方法”的专利技术申请的分案申请。背景。专利
本专利技术总体上涉及血液和其它体液中的生物标记的发现和表征，所述生物标记可被用来筛查受试者的实体瘤的存在，帮助选择癌症疗法的疗程，监测癌症治疗的功效，并检测和监测受试者的病毒感染，癌症筛查，癌症复发的早期检测，以及其它重要的目标。本专利技术的生物标记可单独使用或与循环肿瘤细胞、游离血浆和血清DNA癌症标记、癌症-相关蛋白标记和其它生物标记组合使用。相关领域当肿瘤细胞从原发性实体瘤脱离时，它们渗透进入血液或淋巴循环，并最终离开血流而进入其它器官或组织形成转移。90%的癌症-相关死亡由转移过程引起。最常见的转移部位是肺、肝、骨和脑。循环中发现的肿瘤细胞被称为循环肿瘤细胞(CTC)。许多研究出版物和临床试验显示CTC具有在以下方面的临床用途：(i)通过在血流中CTC的计数，提供预后生存和癌症复发信息，和(ii)通过检查CTC中的蛋白表达水平，以及基因突变和易位的发生，提供治疗信息。然而，CTC并不与受试者(甚至IV期癌症患者)中癌症的发生和/或存在一直相关。除了癌症外，还有许多医学病症可通过检测体液中的某些细胞类型来诊断。特别是，指示某些医学病症的或某些医学病症特有的细胞可比在选择的体液中发现的其它细胞具有更多和/或更少的适应性。因此，通过从体液的样品收集这样的更多和/或更少的适应性的细胞，有可能基于收集的细胞诊断医学病症。可被用来筛查受试者的医学病症的血液和其它体液中的生物标记的鉴定和特征表征将给临床医师提供另外的工具。本专利技术涉及这个和其它重要的目标。概述本专利技术涉及和公开了一类具有独特特征的细胞，所述细胞在患有实体瘤(包括癌、肉瘤、神经母细胞瘤和黑色素瘤)的癌症患者的血液中发现。细胞，称为“循环癌症相关巨噬细胞-样细胞”(CAML)，在本文描述并显示与患者中实体瘤的存在相关。与CAML相关的5种形态学已被表征和描述(Adams,D.等,作为实体瘤的潜在生物标记的循环巨大巨噬细胞(Circulatinggiantmacrophagesasapotentialbiomarkerofsolidtumors)PNAS2014,111(9):3514-3519和WO2013/181532)。通过在此提出的数据，CAML显示具有临床用途，即它们可用作多种医学应用的生物标记。使用精密微量过滤器，通过微过滤，在患有上皮来源的I期-IV期癌症的受试者的外周血中始终发现有CAML。在此提出在癌症患者的血液中发现的另外的CAML形态学。与CAML相关的医学应用包括，但不限于，细胞作为生物标记以提供癌症的诊断，特别是在癌症的早期检测，在癌症复发或再发的早期检测，和在癌症突变的测定中的用途。CAML也可在确定适宜的疗程中用作生物标记；特别是，所述细胞可用于化疗和放疗治疗反应的效力的快速测定。CAML可独立地用作癌症标记，或与CTC、无细胞的DNA、蛋白和其它生物标记组合，以提供对患者疾病的更全面的了解。更特别地，且在第一个实施方案中，本专利技术涉及筛查受试者的癌症的方法，其包括在得自受试者的生物样品中检测CAML。在特定的方面，当在生物样品中检出CAML时，受试者被鉴定为可能具有实体瘤，例如癌、肉瘤、神经母细胞瘤或黑色素瘤，以及其它等。在其它方面，当在生物样品中检出CAML时，受试者被鉴定为患有实体瘤，例如癌、肉瘤、神经母细胞瘤或黑色素瘤，以及其它等。特定类型的癌症的鉴定可通过标准方法，例如对癌症标记染色来进行。CAML的一个有用的属性是它们可经受猝灭和再染色，因此大量的癌细胞标记可使用相同的细胞样品测定。特定类型的癌症的鉴定因此也可通过对癌症标记染色，然后对另外的标记再染色相同细胞来进行。在某些方面，由该实施方案涵盖的方法也包括检测生物样品中的循环肿瘤细胞(CTC)和/或结合于CTC的白细胞(WBC)。在该实施方案的特定方面，受试者是疑似患有癌症的受试者。在该实施方案的特定方面，治疗决定基于该方法的结果作出。在该实施方案的特定方面，该方法还包括当受试者被鉴定为患有实体瘤时，给予受试者抗癌疗法。在第二个实施方案中，本专利技术涉及在受试者中诊断癌症的方法，其包括在得自受试者的生物样品中检测CAML，其中当在生物样品中检出CAML时，所述受试者被诊断患有癌症。特定类型的癌症的鉴定可通过标准方法，例如对癌症标记染色来进行。特定类型的癌症的鉴定也可通过对癌症标记染色，然后对另外的标记再染色相同细胞来进行。在某些方面，由该实施方案涵盖的方法也包括检测生物样品中的CTC和/或结合于CTC的WBC，其中当在生物样品中检出CAML、CTC和结合于CTC的WBC的一种或多种时，所述受试者被诊断患有癌症。在该实施方案的特定方面，治疗决定基于该方法的结果作出。在该实施方案的特定方面，该方法还包括当所述受试者被诊断患有癌症时，给予受试者抗癌疗法。在第三个实施方案中，本专利技术涉及检测受试者的癌症复发的方法，其包括在得自先前治疗过癌症的受试者的生物样品中检测CAML，其中当在生物样品中检出CAML时，则检出癌症复发。特定类型的癌症的鉴定可通过标准方法，例如对癌症标记染色来进行。特定类型的癌症的鉴定也可通过对癌症标记染色，然后对另外的标记再染色相同细胞来进行。在某些方面，由该实施方案涵盖的方法也包括检测生物样品中的CTC和/或结合于CTC的WBC，其中当在生物样品中检出CAML、CTC和结合于CTC的WBC的一种或多种时，则检出癌症复发。在该实施方案的特定方面，治疗决定基于该方法的结果作出。在该实施方案的特定方面，该方法还包括当检出癌症复发时，给予受试者抗癌疗法。在第四个实施方案中，本专利技术涉及确认受试者的癌症诊断的方法，其包括在得自经诊断患有癌症的受试者的生物样品中检测CAML，其中当在生物样品中检出CAML时，受试者的癌症诊断被确认。在某些方面，由该实施方案涵盖的方法也包括检测生物样品中的CTC和/或结合于CTC的WBC，其中当在生物样品中检出CAML、CTC和结合于CTC的WBC的一种或多种时，受试者的癌症诊断被确认。在特定的方面，初步癌症诊断是通过乳房X线照相术、PSA测试、CA125的存在、CT、MRI或PET成像进行。在一个特定的方面，受试者被怀疑患有癌症。特定类型的癌症的鉴定可通过标准方法，例如对癌症标记染色来进行。特定类型的癌症的鉴定也可通过对癌症标记染色，然后对另外的标记再染色相同的细胞来进行。在该实施方案的特定方面，治疗决定基于该方法的结果作出。在该实施方案的特定方面，该方法还包括当受试者的癌症诊断被确认时，给予受试者抗癌疗法。在本专利技术的第一至第四实施方案中，结合于CTC的WBC的检测是确定结合于CTC的WBC的数目。当CTC渗透进入循环时，免疫细胞(T-细胞，白细胞的一个亚类)可通过结合于CTC识别它们；免疫细胞也可杀死CTC。过滤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在循环癌症相关巨噬细胞-样细胞(CAML)和/或循环肿瘤细胞(CTC)中筛查选择的药物靶标记的伴侣诊断方法，其包括从得自受试者的生物样品收集CAML和/或CTC并确定CAML和/或CTC是否表达或具有选择的药物靶标记。/n

【技术特征摘要】
20140825 US 62/041540;20150310 US 62/131051;2015031.一种在循环癌症相关巨噬细胞-样细胞(CAML)和/或循环肿瘤细胞(CTC)中筛查选择的药物靶标记的伴侣诊断方法，其包括从得自受试者的生物样品收集CAML和/或CTC并确定CAML和/或CTC是否表达或具有选择的药物靶标记。


2.权利要求1的方法，其中选择的药物靶标记是细胞表面标记。


3.权利要求2的方法，其中细胞表面标记是PD-L1。


4.权利要求1的方法，其中选择的药物靶标记是多核苷酸。


5.权利要求1的方法，其中选择的药物靶标记是基因突变、扩增或易位。


6.检测循环癌症相关巨噬细胞-样细胞(CAML)的试剂在制备用于筛查受试者的癌症的诊断试剂中的用途，包括检测来自所述受试者的生物样品中的CAML，其中当检出CAML时所述受试者患有癌症，并且其中选择的CAML的特征是(i)CAML数和(ii)CAML的平均大小。


7.权利要求6的用途，其中当在生物样品中检出CAML时，受试者被鉴定为潜在地患有癌、肉瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤或其它实体瘤。


8.权利要求6的用途，其中当在生物样品中检出CAML时，受试者被鉴定为患有癌、肉瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤或其它实体瘤。


9.权利要求6的用途，其还包括检测生物样品中的循环肿瘤细胞(CTC)和/或结合于CTC的白细胞(WBC)。


10.检测循环癌症相关巨噬细胞-样细胞(CAML)的试剂在制备用于诊断受试者的癌症的诊断试剂中的用途，包括检测来自所述受试者的生物样品中的CAML，其中当在生物样品中检出CAML时所述受试者被诊断患有癌症，并且其中选择的CAML的特征是(i)CAML数和(ii)CAML的平均大小。


11.权利要求10的用途，其还包括检测生物样品中的CTC和/或结合于CTC的WBC，其中当在生物样品中检出CAML、CTC和结合于CTC的WBC的一种或多种时，所述受试者被诊断患有癌症。


12.检测循环癌症相关巨噬细胞-样细胞(CAML)的试剂在制备用于检测受试者的癌症复发的诊断试剂中的用途，包括检测得自先前治疗过癌症的受试者的生物样品中的CAML，其中当在生物样品中检出CAML时检出癌症复发，并且其中选择的CAML的特征是(i)CAML数和(ii)CAML的平均大小。


13.权利要求12的用途，其还包括在生物样品中检测CTC和/或结合于CTC的WBC，其中当在生物样品中检出CAML、CTC和/或结合于CTC的W...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤家楣，D亚当斯，
申请(专利权)人：创新微技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US