一种诱导型碱基编辑系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种诱导型碱基编辑系统及其应用。该碱基编辑系统包括可诱导的人来源胞嘧啶脱氨酶(A3A)与单切口活性的SpCas9组成；脱氨酶能基于潜在的氨基酸位点进行拆分；雷帕霉素通过FRB/FKBP与氨基酸拆分位点的N端和C端相互作用而重组装分裂的脱氨酶，并诱导完成碱基编辑。本申请通过构建诱导型碱基编辑系统来控制其碱基编辑活性，从而减少脱靶编辑；同时，本申请中的拆分设计不会减少目标编辑，因此，可以作为蛋白质突变的补偿策略，并且可以与这些突变的脱氨酶结合使用，以进一步减少脱靶编辑。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导型碱基编辑系统及其应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种诱导型碱基编辑系统及其应用。
技术介绍
碱基编辑是一种基因组编辑策略，可直接在基因组DNA中转换特定的单个核苷酸(ReesandLiu2018)。目前，碱基编辑器有两种类型，胞嘧啶碱基编辑器(CBE)和腺嘌呤碱基编辑器(ABE)，两者都由脱氨酶与催化缺陷的Cas9蛋白组成，该酶可催化胞嘧啶或腺嘌呤的脱氨反应。在sgRNA的指导下，碱基编辑器可以在靶点内特定窗口的几个碱基对中将C-G碱基对转换为T-A碱基对，或将A-T碱基对转换为G-C碱基对。因为它高效且精确，并且不会产生由DNA双链断裂(DSB)引入的插入或缺失等副产物，所以该技术很快被广泛用于各种模式生物中，例如小鼠，斑马鱼，拟南芥和酿酒酵母。尽管碱基编辑技术在广泛的基础研究中取得了许多令人振奋的成果，但是碱基编辑在临床应用中仍然存在一个主要阻碍，即在DNA或RNA水平上的脱靶效应。当前的CBE和ABE通常会引起RNA中全转录组范围内的脱靶，引起了对安全性问题的关注。更严重的是，由于CBE还会造成DNA水平的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导型碱基编辑系统，其特征在于，所述碱基编辑系统包括碱基编辑器，以及与其结合的雷帕霉素；所述碱基编辑器包括脱氨酶；/n所述脱氨酶能基于任一氨基酸位点进行拆分；所述雷帕霉素通过拆分后的氨基酸位点与脱氨酶结合，并诱导完成碱基编辑。/n

【技术特征摘要】
1.一种诱导型碱基编辑系统，其特征在于，所述碱基编辑系统包括碱基编辑器，以及与其结合的雷帕霉素；所述碱基编辑器包括脱氨酶；
所述脱氨酶能基于任一氨基酸位点进行拆分；所述雷帕霉素通过拆分后的氨基酸位点与脱氨酶结合，并诱导完成碱基编辑。


2.根据权利要求1所述的诱导型碱基编辑系统，其特征在于，所述雷帕霉素的FRB和FKBP分别与脱氨酶氨基酸拆分位点的非结构性环的分裂处偶联。


3.根据权利要求2所述的诱导型碱基编辑系统，其特征在于，所述FRB和FKBP分别与脱氨酶氨基酸拆分位点的N端和C端融合，并二聚化形成异二聚体，完成碱基编辑器的组装。


4.根据权利要求1所述的诱导型碱基编辑系统，其特征在于，所述脱氨酶的拆分位点为第44位、85位、118位或147位氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚少华，龙洁，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51