一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段及其编码基因、制备方法和应用技术

技术编号:28660892 阅读:25 留言:0更新日期:2021-06-02 02:33
本发明专利技术提出了一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段及其编码基因、制备方法和应用,所述DNA聚合酶来源于光合藻类,属于I型DNA聚合酶,其具有很高的DNA聚合酶和外切酶活性,同时具有一定的反转录酶活性。本发明专利技术具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段可以用于延伸DNA,制备DNA,同时可以用于以RNA为模板连,利用其反转录酶活性,合成互补的DNA链(cDNA)。将其克隆到pET28表达载体,通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达,经固定化镍离子亲和纯化,制备DNA聚合酶。将其用于反转录反应,合成cDNA,用于RNA检测与cDNA编码基因的克隆。

【技术实现步骤摘要】
一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段及其编码基因、制备方法和应用
本专利技术涉及生物工程
,具体涉及一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段及其编码基因、制备方法和应用。
技术介绍
细菌、古菌和真核生物等编码众多DNA聚合酶作为DNA复制的核心蛋白,完成基因组DNA的复制、加工和分配过程。DNA聚合酶的主要功能是催化DNA合成反应,以DNA单链作为模板,利用dNTP作为原料合成新的互补DNA;另外DNA聚合酶还会对新链进行校对(3’-5’外切酶活性)和修复(5’-3’外切酶活性),以确保复制过程的保真度和准确性。部分DNA聚合酶还可以RNA为模板,合成互补的DNA链,因此又称为反转录酶。反转录酶在RNA分子的检测与基因克隆方面有着重要应用。DNA聚合酶的种类繁多,各种DNA聚合酶在结构和功能上既有相似的地方,又有各自的特性。例如众多热稳定性DNA聚合酶用于PCR(聚合酶链式反应)技术,在生命科学研究及相关领域发挥重要作用。反转录酶用于将RNA模板合成互补DNA链。DNA与RNA的检测在现在生命科学中具有广泛本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段,其氨基酸序列如序列表中序列1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段,其氨基酸序列如序列表中序列1所示。


2.一种编码权利要求1所述具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段的基因,其核苷酸序列如序列表中序列2所示。


3.含权利要求1所述基因的重组表达载体。


4.含权利要求3所述重组表达载体的重组菌。


5.根据权利要求4所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌为大肠杆菌。


6.一种如权利要求1所述的具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.构建如权利要求3所述的重组表达载体;
S2.将重组表达载体转入宿主细胞,并对宿主细胞进行扩大培养、诱导表达;

【专利技术属性】
技术研发人员:刘喜朋翁妍
申请(专利权)人:上海交通大学
类型:发明
国别省市:上海;31

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