用于转导蛋白质-蛋白质相互作用的新方法技术

本发明专利技术涉及细胞，其包含第一核酸序列、第二核酸序列和第三核酸序列，所述第一核酸序列编码融合至包含DHp结构域和CA结构域的组氨酸激酶第一变体的N‑末端的第一多肽，其中所述第一变体不包含跨膜结构域，所述第二核酸序列编码融合至包含DHp结构域和CA结构域的所述组氨酸激酶第二变体的N‑末端的第二多肽，其中所述第二变体不包含跨膜结构域，所述第三核酸序列编码可被所述第一或所述第二变体的所述DHp结构域特异性磷酸化的应答调节蛋白。本发明专利技术还涉及本发明专利技术的细胞的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于转导蛋白质-蛋白质相互作用的新方法本申请要求提交于2018年10月15日的欧洲专利申请EP18200357.4的优先权的权益，其通过引用并入本文。本专利技术涉及用于评估或响应蛋白质-蛋白质相互作用并将该相互作用转导至目的基因的表达的方法和手段。
技术介绍
分子相互作用，例如蛋白质/蛋白质相互作用，几乎参与活细胞中的每个细胞过程。蛋白质/蛋白质相互作用的表征是更好地理解和控制生物系统的重要步骤。将蛋白质/蛋白质相互作用转导至可检测信号或目的基因的表达，对于新药的发现，和用作基于细胞的生物传感器或细胞疗法的具有新功能的细胞的开发是重要的。不同的细胞途径通过促进或抑制蛋白质/蛋白质相互作用的化合物的存在/不存在来调节。鉴定调节蛋白质/蛋白质相互作用的分子是药物发现和开发中使用的主要工具之一。此外，将蛋白质/蛋白质相互作用转导成新的应答是用于治疗目的细胞工程的主要工具。由化合物调节的蛋白质相互作用的实例是G蛋白偶联受体(GPCRs)和下游途径蛋白(如β-抑制蛋白)之间的相互作用。GPCRs是哺乳动物细胞中的膜受体，其可检测各种配体(内源激素、生长本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细胞，特别是哺乳动物细胞，更特别是人细胞，其中所述细胞包含/n-第一核酸序列，其编码融合至组氨酸激酶第一变体的N-末端的第一多肽，所述组氨酸激酶包含DHp结构域和CA结构域，/n-第二核酸序列，其编码融合至组氨酸激酶第二变体N-末端的第二多肽，所述组氨酸激酶包含DHp结构域和CA结构域，和/n-第三核酸序列，其编码可由所述第一或所述第二变体的所述DHp结构域特异性磷酸化的应答调节蛋白。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181015 EP 18200357.41.细胞，特别是哺乳动物细胞，更特别是人细胞，其中所述细胞包含
-第一核酸序列，其编码融合至组氨酸激酶第一变体的N-末端的第一多肽，所述组氨酸激酶包含DHp结构域和CA结构域，
-第二核酸序列，其编码融合至组氨酸激酶第二变体N-末端的第二多肽，所述组氨酸激酶包含DHp结构域和CA结构域，和
-第三核酸序列，其编码可由所述第一或所述第二变体的所述DHp结构域特异性磷酸化的应答调节蛋白。


2.根据权利要求1所述的细胞，其中所述第一变体和/或所述第二变体不包含所述组氨酸激酶的跨膜结构域。


3.根据权利要求1或2所述的细胞，其中
-所述第一变体不包含所述组氨酸激酶的功能性传递器结构域和/或功能性传感器结构域，和/或
-所述第二变体不包含所述组氨酸激酶的功能性传递器结构域和/或功能性传感器结构域。


4.根据前述权利要求任一项的细胞，其中所述应答调节蛋白包含与效应器结构域融合的受体结构域，其中所述受体结构域可被所述第一或所述第二变体的所述DHp结构域磷酸化，并且所述效应器结构域可被磷酸化的受体结构域激活或抑制。


5.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中
-所述效应器结构域是转录激活结构域，
-所述细胞包含第四核酸，其包含在可被所述转录激活结构域识别的诱导型启动子控制下的目的基因，
其中在所述转录激活结构域激活后，诱导所述目的基因的表达。


6.根据权利要求5的细胞，其中所述目的基因编码目的蛋白或目的RNA，其中特别地所述目的蛋白是发光蛋白。


7.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中
-所述第一和第二变体是EnvZ激酶的变体，所述应答调节蛋白包含或a是OmpR应答调节蛋白，或
-所述第一变体和所述第二变体是NarX激酶的变体，所述受体结构域包含或a是NarL应答调节蛋白(SEQID6)，并且所述效应器结构域是或包含VP16转录激活结构域(Vp48，SEQID7)。


8.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中所述第一或所述第二变体是或包含选自EnvZ180-450(SEQID8)、EnvZ223-450(SEQID9)、NarX176-598(SEQID10)和NarX379-598(SEQID11)的变体。


9.根据权利要求5至8中任一项所述的细胞，其中所述诱导型启动子选自OmpR启动子(SEQIDNO1)和NarL-RE(SEQIDNO2)。


10.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述第一核酸序列和/或所述第二核酸序列和/或所述第三核酸序列针对所述细胞的密码子使用进行优化。


11.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述第一核酸序列和/或所述第二核酸序列和/或所述第三核酸序列在组成型启动子的转录控制下。


12.根据权利要求11的细胞，其中所述组成型启动子选自CMV(SEQIDNO3)、EF1α(SEQIDNO4)和EF1α-V1(SEQIDNO5)。


13.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中所述第一变体和所述第二变体是相同的。


14.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中所述组氨酸激酶属于转磷酸化家族。


15.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中
-所述第一变体包含DHp结构域，其不包含所述组氨酸激酶的第一或所述第二变体的所述CA结构域可接近的组氨酸残基，和/或
-所述第二变体包含不能结合ATP的CA结构域。


16.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中
-所述第一变体是或包含变体NarX379-598(H399Q)(SEQIDNO12)或NarX176-598(H399Q)，和/或
-所述第二变体是或包含变体NarX379-598(N509A)(SEQIDNO13)或NarX176-598(N509A)。


17.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中所述第一多肽和所述第二多肽的特异性结合可由所述第一和/或所述第二多肽特异性识别的配体触发。


18.根据权利要求17的细胞，其中所述第一多肽是受体或包含受体，所述第二多肽是所述受体的结合配偶体或包含所述受体的结合配偶体，其中所述受体和所述结合配偶体的结合可由所述受体可识别的所述配体触发。


19.根据权利要求18的细胞，其中所述受体是跨膜受体，所述结合配偶体是胞质蛋白。


20.根据前述权利要求中任一项的细胞，其中
-所述第一多肽由G蛋白偶联受体组成或包含G蛋白偶联受体，所述第二多肽由所...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿兰·玛兹，雅科夫·贝宁森，
申请(专利权)人：苏黎世联邦理工学院，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH