一种检测DNA甲基化的荧光生物传感器、检测方法和应用技术

本公开涉及DNA甲基化检测技术领域，具体为一种检测DNA甲基化的荧光生物传感器、检测方法和应用。荧光生物传感器包括限制性核酸内切酶HpaII、含有AP位点的信号探针、核酸内切酶IV和链霉亲和素修饰的磁珠；所述探针由生物素和Cy5共同修饰。将核酸内切酶IV(Endo IV)辅助信号放大与单分子荧光检测相结合，用于DNA甲基化的超灵敏检测。该方法操作简单、灵敏度高、特异性好，甚至能够定量单个癌细胞中的DNA甲基化水平，在疾病诊断和临床医学研究中具有巨大潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种检测DNA甲基化的荧光生物传感器、检测方法和应用
本专利技术涉及DNA甲基化检测
，具体为一种检测DNA甲基化的荧光生物传感器、检测方法和应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。DNA甲基化是哺乳动物基因组中最常见的表观遗传修饰之一，主要发生在胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)对中胞嘧啶残基的第五位碳原子上。通过将甲基共价添加到胞嘧啶上，DNA甲基化影响基因表达的可遗传状态，而无需改变DNA序列。正常的DNA甲基化状态在各种生理过程中起着至关重要的作用，包括胚胎发育，基因组印记，分化，细胞记忆和衰老等。然而，异常的DNA甲基化状态可能导致基因表达失调，从而引发多种疾病包括癌症，例如肺癌，肝癌，肾癌，结肠癌，乳腺癌和宫颈癌等。因此，准确而有效的检测DNA甲基化对表观遗传学的研究及相关临床应用具有十分重要的意义。迄今为止，已发展出多种DNA甲基化检测方法，主要是基于对DNA中胞嘧啶(C)和甲基胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测DNA甲基化的荧光生物传感器，其特征是，包括限制性核酸内切酶HpaII、含有AP位点的信号探针、核酸内切酶IV和链霉亲和素修饰的磁珠；所述信号探针由生物素和Cy5共同修饰。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测DNA甲基化的荧光生物传感器，其特征是，包括限制性核酸内切酶HpaII、含有AP位点的信号探针、核酸内切酶IV和链霉亲和素修饰的磁珠；所述信号探针由生物素和Cy5共同修饰。


2.如权利要求1所述的一种检测DNA甲基化的荧光生物传感器，其特征是，甲基化的DNA的序列为5’-GCTGCTTCmCGGCTGGTGC-3’
3’-CGACGAAGGmCCGACCACG-5’
其中，加粗的mC是甲基化位点。


3.如权利要求1所述的一种检测DNA甲基化的荧光生物传感器，其特征是，信号探针的序列为Biotin-AAAAAAAAAAGCACCAGCCXGAAGCAGC-Cy5，其中X为无碱基位点即AP位点。


4.一种检测DNA甲基化检测试剂盒，其特征是，所述试剂盒包括限制性内切酶HpaII、10×Cutsmart缓冲液、牛血清白蛋白(BSA)、生物素和Cy5共修饰的含有AP位点的信号探针、链霉亲和素修饰的磁珠、1×B&W缓冲液、10×NEB缓冲液3、核酸内切酶Ⅳ。


5.如权利要求5所述的一种检测DNA甲基化检测试剂盒，其特征是，所述10×Cutsmart缓冲液包括500毫摩尔醋酸钾(KAc)，200毫摩尔三(羟甲基)氨基甲烷-醋酸(Tris-Ac)，100毫摩尔醋酸镁(Mg(Ac)2；
1×B&W缓冲液包括5毫摩尔三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)，500微摩尔乙二胺四乙酸(EDTA)，1摩尔氯化钠(NaCl)，pH7.5；
10×NEB缓冲液3包括1摩尔氯化钠(NaCl),500毫摩尔三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl),100毫摩尔氯化镁(MgCl2),10毫摩尔二硫苏糖醇(DTT),pH7.9。


6.一种检测DNA甲基化的方法，其特征是，所述方法包括：限制性核酸内切酶HpaII切割甲基化状态的DNA得到单链DNA，单链DNA与含有AP位点...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春阳，张艳，马飞，胡金萍，邹笑然，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37