一种C5aR抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种C5aR抗体及其制备方法和应用。所述C5aR抗体包括C5aR抗体的重链可变区重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和C5aR抗体的轻链可变区轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种。所述C5aR抗体对人源C5aR蛋白具有高亲和力，能有效阻止C5aR蛋白与C5a的结合，从而下调或切断相应的信号通路，中止体外中性粒细胞的C5a定向迁移；并能够显著抑制中性粒细胞的趋化作用。因此该C5aR抗体能够运用于治疗炎症、血管疾病或神经系统疾病等药物的制备中。

【技术实现步骤摘要】
一种C5aR抗体及其制备方法和应用本申请是优先权日为2016年1月12日、申请号为201780003251.7、专利技术创造名称为“一种C5aR抗体及其制备方法和应用”的专利申请的分案申请。
本专利技术涉及抗体领域，具体涉及一种C5aR抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
补体系统是由30多种血浆蛋白和膜蛋白组成，广泛存在于血液、组织液和细胞表面的、具有精密调控机制的蛋白反应系统。补体的主要生理功能是促进吞噬细胞的吞噬能力和溶解靶细胞，因此是机体免疫防御机制的重要组成部分。C5aR的配体C5a，是补体系统活化产物，是炎症反应的重要介质和趋化因子。C5aR与配体C5a结合后诱导炎症反应并影响凝血及纤溶系统，导致正常组织细胞的损伤，其参与多种疾病的病理过程。C5a是补体裂解片段中显示过敏毒素作用最强的介质，其过敏毒素作用分别为C3a和C4a作用的20倍和2500倍。此外，C5a还可以增加血管的通透性，刺激平滑肌收缩。高浓度的C5a是中性粒细胞、嗜酸粒细胞和单核细胞的趋化剂，可诱导这些细胞顺浓度梯度方向移动。C5a对免疫应答有明显增强作用，可诱导单核细胞分泌白介素IL-l、IL-6、IL-8及肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子的表达，促进抗原及同种异体抗原诱导的T细胞增殖及促进B细胞产生抗体等。C5aR属于七次跨膜的G-蛋白偶联受体家族。C5aR是对C5a具有高亲和力的受体，其中Kd约为1nM，其位于包括白细胞在内的不同类型的细胞上。每个细胞的受体数量都非常高，每个白细胞可高达200000个位点。C5a还有另外一个受体，称为C5a样受体(c5alikereceptor，C5L2)，但由于其不含G蛋白，又称GPR77。GPR77属于C5a受体亚家族成员，在氨基酸序列上与CD88有35％的同源性，目前其生物学功能仍不明确。C5aR参与包括风湿性关节炎、牛皮癣、败血症、再灌注损伤和成年呼吸窘迫综合症在内的各种疾病的发病机制(GerardandGerard，1994；MurdochandFinn，2000)。如何阻断C5aR信号的向下游信号通路传导，从而减轻炎症反应一直是免疫学研究的热点问题。目前C5aR和C5a的拮抗剂主要分为抗C5a抗体、抗C5aR抗体、小分子拮抗剂、C5a反义肽、C5a突变体或细菌来源的趋化抑制蛋白等。但是目前仍未有上市的、针对C5aR及其配体的相关拮抗剂新药。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服目前缺少C5aR抗体的不足，提供一种亲和力高、特异性强的C5aR抗体及其制备方法和应用。所述的C5aR抗体与人源C5aR蛋白具有高度亲和力；能够高效地抑制或阻断C5aR与C5a的结合，显著降低钙流信号，从而下调或切断相应的信号通路，中止体外中性粒细胞的C5a定向迁移；并能够显著抑制中性粒细胞的趋化作用；从而给炎症、血管或神经系统的疾病的治疗带来希望。本专利技术人以人源C5aR蛋白作为免疫原，采用优化的杂交瘤技术，克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因，可变区基因可以嫁接到人源抗体恒定区基因从而形成人鼠嵌合抗体，即获得C5aR抗体的先导抗体。再通过一系列的对先导抗体的初步生产、纯化和检定，获得与人源C5aR蛋白等蛋白具有高度亲和力；能够高效地抑制或阻断C5aR与C5a的结合，显著降低钙流信号；并且能够显著抑制中性粒细胞的趋化作用的C5aR抗体。然后通过分子生物学方法测序获知C5aR抗体的重链可变区和C5aR抗体的轻链可变区的氨基酸序列。本专利技术提供一种分离的蛋白质，其包括C5aR抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，C5aR抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo:2、SEQIDNo:10、SEQIDNo:18、SEQIDNo:26、SEQIDNo:34、SEQIDNo:42或SEQIDNo:50所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:3、SEQIDNo:11、SEQIDNo:19、SEQIDNo:27、SEQIDNo:35、SEQIDNo:43或SEQIDNo:51所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo:4、SEQIDNo:12、SEQIDNo:20、SEQIDNo:28、SEQIDNo:36、SEQIDNo:44或SEQIDNo:52所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo:6、SEQIDNo:14、SEQIDNo:22、SEQIDNo:30、SEQIDNo:38、SEQIDNo:46或SEQIDNo:54所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo:7、SEQIDNo:15、SEQIDNo:23、SEQIDNo:31、SEQIDNo:39、SEQIDNo:47或SEQIDNo:55所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo:8、SEQIDNo:16、SEQIDNo:24、SEQIDNo:32、SEQIDNo:40、SEQIDNo:48或SEQIDNo:56所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo:2、SEQIDNo:10、SEQIDNo:18、SEQIDNo:26、SEQIDNo:34、SEQIDNo:42或SEQIDNo:50所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo:3、SEQIDNo:11、SEQIDNo:19、SEQIDNo:27、SEQIDNo:35、SEQIDNo:43或SEQIDNo:51所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo:4、SEQIDNo:12、SEQIDNo:20、SEQIDNo:28、SEQIDNo:36、SEQIDNo:44或SEQIDNo:52所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo:6、SEQIDNo:14、SEQIDNo:22、SEQIDNo:30、SEQIDNo:38、SEQIDNo:46或SEQIDNo:54所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo:7、SEQIDNo:15、SEQIDNo:23、SEQIDNo:31、SEQIDNo:39、SEQIDNo:47或SEQIDNo:55所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo:8、SEQIDNo:16、SEQIDNo:24、SEQIDNo:32、SEQIDNo:40、SEQIDNo:48或SEQIDNo:56所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。较佳地，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:2所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:3所示且所述重链CDR3的氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的蛋白质，其特征在于，其是一种抗C5aR的抗体，其包括重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No:10所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No:11所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No:12所示；/n所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No:14所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No:15所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No:16所示。/n

【技术特征摘要】
20160112 CN 20161001872711.一种分离的蛋白质，其特征在于，其是一种抗C5aR的抗体，其包括重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:10所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:11所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:12所示；
所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:14所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:15所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:16所示。


2.如权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，其包括C5aR抗体的重链可变区和C5aR抗体的轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:9所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:13所示。


3.如权利要求1或2所述的蛋白质，其特征在于，所述的蛋白质还包括抗体重链恒定区和/或抗体轻链恒定区。


4.如权利要求3所述的蛋白质，其特征在于，所述的抗体重链恒定...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨翠青，段清，徐丽娜，顾红专，刘礼乐，
申请(专利权)人：尚华科创投资管理江苏有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32