一种蛋白纳米材料及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种蛋白纳米材料及其制备方法与应用，该制备方法包括：用水洗净羊肠衣后进行匀浆处理，得到羊肠衣匀浆；向羊肠衣匀浆加入脂肪酶进行脱脂处理，在此过程中，进行间歇式超声处理，将制备得到羊肠衣处理液在70‑90℃水浴保温，然后冷却至室温，再进行离心得到离心液；将离心液依次进行超滤和透析后，进行减压浓缩，即制备得到所述蛋白纳米材料。该蛋白纳米材料以羊肠为原材料制备得到，具有良好的生物相容性、安全性，可达到理想临床填充再生作用和塑形效果，而无其它不良副作用。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白纳米材料及其制备方法与应用
本专利技术涉及生物材料
，具体涉及一种蛋白纳米材料及其制备方法与应用。
技术介绍
注射填充美容是非手术医疗美容的一种，利用注射的方法将生物材料或人工合成生物兼容性材料注射入真皮层或皮下通过不同的作用机理达到减少皮肤皱褶或塑型的一大类整形手术的方法。注射填充美容可用于改善和修饰面部软组织缺陷、皮肤静态皱纹及组织轮廓等，并具有使用方便、操作简便、创伤小、恢复快、延缓衰老和美容效果立竿见影等优点，广泛应用于医学美容、美容皮肤科及整形外科等领域。注射填充美容的关键是注射材料，到目前为止，可注射填充美容的外科材料的研究经历了3个发展阶段。(1)高分子化学阶段：产品以石蜡、羊毛脂、硅凝胶等不可降解材料为代表。多为天然提取物和化学合成物，具有组织充填、修复的作用。(2)高分子生物化学阶段：以胶原、透明质酸、聚乳酸、丙烯酸水凝胶、聚甲基丙烯酸甲酯等复合材料为代表。多为天然组织提取物和化学聚合物，具有组织充填或介导组织成形的作用。(3)生物组织工程阶段：以异体脱细胞真皮微粒、自体成纤维细胞、种子细胞加可降解或不可降解支架或基质成形或诱导、介导组织细胞生成的材料为代表。具有在分子水平精确引细胞分化、增殖、构架、形成组织，加速组织修复的作用。近年来，各种生物材料(如自体脂肪、自体或异体胶原)和人工材料在注射整形美容方面都得到了广泛的应用，但都有各自的缺点。因此，开发一种同时具有生物相容性、安全性、易操作性、锚定性和持久性的理想的注射性填充材料，是本领域亟需解决的技术难题。<br>
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蛋白纳米材料及其制备方法与应用，该蛋白纳米材料以羊肠为原材料制备得到，具有良好的生物相容性、安全性，可达到理想临床填充再生作用和塑形效果，而无其它不良副作用。为此，第一方面，本专利技术提供一种蛋白纳米材料的制备方法，包括以下步骤：(1)取新鲜的羊肠衣，用水洗净后进行匀浆处理，得到羊肠衣匀浆；(2)向步骤(1)制备得到的羊肠衣匀浆加入脂肪酶进行脱脂处理，在所述脱脂处理的过程中，进行间歇式超声处理；制备得到羊肠衣处理液；(3)将步骤(2)制备得到的羊肠衣处理液在70-90℃水浴保温，然后冷却至室温，再进行离心得到离心液；(4)将步骤(3)制备得到的离心液依次进行超滤和透析后，进行减压浓缩，即制备得到所述蛋白纳米材料。进一步，步骤(1)中，所述羊肠衣为山羊肠衣、青山羊肠衣、黑山羊肠衣或小尾寒羊肠衣。进一步，步骤(1)中，将所述羊肠衣置入高速组织匀浆机中，加入含有浓度为0.2-0.4％的硫酸钠溶液进行匀浆，所述羊肠衣和所述硫酸钠溶液的比例为1：1-2(w/v)。本专利技术在研究过程中发现，通过加入低浓度的硫酸钠溶液，有效地促进了后续步骤中的脂肪酶酶解反应，提高了酶解的效率。经试验，其它溶液例如氯化钠溶液无该效果，因此推测是由于硫酸根的加入导致该效果。进一步，步骤(1)中，所述羊肠衣经匀浆处理后的粒径为0.5-1mm。进一步，步骤(2)中，所述脱脂处理的时间为20-30min。进一步，步骤(2)中，所述间歇式超声处理的条件为：超声功率400-500W，超声20-30s，停歇5-10s，重复上述过程。本专利技术采用功率为400-500W的间歇式超声处理，配合同步进行的脂肪酶酶解反应。一方面，在保留大部分蛋白质完整性的情况下，可以有效地裂解细胞，同时对细胞中的细胞器、核酸分子等也有裂解作用，这样，在脱脂后仅需简单的过滤步骤，即可有效去除杂质，保留大部分蛋白质分子；另一方面，该功率的超声处理配合脂肪酶，在反应液中存在硫酸根的情况下，可显著提升酶解效率，以提高制得的蛋白纳米材料的纯度。如果采用较小的超声功率，例如小于100W的功率，则细胞可以得到有效裂解，但核酸大分子等仍保留，这会影响制得的蛋白纳米材料的纯度，在后续用于注射时，易引起炎症、过敏等反应；如果采用高于500W的功率或显著更长的超声时间，则会破坏部分蛋白质的完整性，从而导致后续用于注射时，易于被吸收，从而无法维持较长时间。超声处理的步骤对本专利技术而言是必要的，如果不进行超声处理，则细胞完整性较高，无法制备得到蛋白纳米材料，或者需要另外加入其它酶才能制备得到蛋白纳米材料，而引入更多的酶不利于后续注射的安全性。如果采用先进行超声处理，然后再进行脂肪酶酶解反应，会降低酶解效率。进一步，步骤(2)中，所述脂肪酶的浓度为1000-5000U/g，优选为2500-4000U/g。进一步，步骤(3)中，所述保温的时间为5-10min。进一步，步骤(3)中，所述离心的速度为3000-4000r/min，离心时间为5-10min。进一步，步骤(4)中，所述超滤包括：用截留分子量为100kD的中空超滤装置进行超滤。进一步，步骤(4)中，所述透析包括：用截留分子量为8-14Kd的透析袋在水中4℃透析12-24h，优选为16-24h。进一步，步骤(4)中，在所述透析过程中换液数次，经所述透析后，以1％BaCl2检查透析液中的SO42-，确认透析液中已无SO42-。进一步，步骤(4)中，在所述减压浓缩之后还包括以下步骤：灭菌和包装。本专利技术的第二方面，提供了一种蛋白纳米材料，所述蛋白纳米材料由本专利技术所述的制备方法制备得到。本专利技术的第三方面，提供了所述蛋白纳米材料在用于制备注射性医用生物材料方面的用途。本专利技术的第四方面，提供了一种注射整形方法，包括将本专利技术所述的蛋白纳米材料加水溶解后，采用中国专利文献CN201922288246.4所述的九孔一次性针头注射器，通过一次注射脂肪层一点扇形给药医术注射。进一步，该注射整形方法还包括：辅助B超前部位精准定位，注射后观察，治疗后随访检查吸收和再生情况。纳米材料是指在三维空间中至少有一维处在纳米尺度范围(1nm-100nm)或由它们作为基本单元构成的材料。纳米材料的晶体粒表面原子数与总原子数之比随粒径变小而急剧增大，从而引起性质上的变化，例如纳米材料具有表面与界面效应、小尺寸效应、量子尺寸效应和宏观量子隧道效应等。本专利技术制备得到的蛋白纳米材料中，蛋白质粒径小于20nm，在溶液中具有良好的分散性，注射后可在3个细胞周期完全吸收消化，与细胞受体相结合，无其他任何不良副作用，达到有理想临床填充再生作用和塑形效果。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：(1)在本专利技术提供的制备方法中，通过间歇式超声配合脂肪酶脱脂处理，不仅可有效裂解细胞和核酸分子，而且可以显著提高脂肪酶裂解的效率；无需使用其他酶，且仅需简单的超滤和透析，即可获得高纯度的蛋白纳米材料。(2)根据本专利技术的方法制备得到的蛋白纳米材料可在3个细胞周期(28-72天)完全吸收消化，与细胞受体相结合，达到有理想临床填充再生作用和塑形效果，且无其它不良副作用。该蛋白纳米材料的临床应用广泛，适用于医美塑形，皮肤重建修护，骨折修护，创伤，外伤，烧伤，凹陷修护，皱纹(眼周，颈部)眼本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白纳米材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：/n(1)取新鲜的羊肠衣，用水洗净后进行匀浆处理，得到羊肠衣匀浆；/n(2)向步骤(1)制备得到的羊肠衣匀浆加入脂肪酶进行脱脂处理，在所述脱脂处理的过程中，进行间歇式超声处理；制备得到羊肠衣处理液；/n(3)将步骤(2)制备得到的羊肠衣处理液在70-90℃水浴保温，然后冷却至室温，再进行离心得到离心液；/n(4)将步骤(3)制备得到的离心液依次进行超滤和透析后，进行减压浓缩，即制备得到所述蛋白纳米材料。/n

【技术特征摘要】
1.一种蛋白纳米材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)取新鲜的羊肠衣，用水洗净后进行匀浆处理，得到羊肠衣匀浆；
(2)向步骤(1)制备得到的羊肠衣匀浆加入脂肪酶进行脱脂处理，在所述脱脂处理的过程中，进行间歇式超声处理；制备得到羊肠衣处理液；
(3)将步骤(2)制备得到的羊肠衣处理液在70-90℃水浴保温，然后冷却至室温，再进行离心得到离心液；
(4)将步骤(3)制备得到的离心液依次进行超滤和透析后，进行减压浓缩，即制备得到所述蛋白纳米材料。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，将所述羊肠衣置入高速组织匀浆机中，加入含有浓度为0.2-0.4％的硫酸钠溶液进行匀浆，所述羊肠衣和所述硫酸钠溶液的比例为1：1-2(w/v)。


3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述脱脂处理的时间为20-30min。


4.如权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述间歇式超声处理的条件为：超...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敏，胡婧，张立佳，
申请(专利权)人：吴敏，胡婧，张立佳，
类型：发明
国别省市：北京;11