一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用，属于生物技术领域。本发明专利技术首先利用1,6‑α‑D‑葡聚糖与棕榈酰氯反应生成棕榈酰化葡聚糖，分离纯化得到棕榈酰化葡聚糖化合物；再将得到的棕榈酰化葡聚糖溶于乙醇中制成薄膜，加入含海参皂苷的磷酸盐缓冲溶液，搅拌形成包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装体系。本发明专利技术制备的包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装体系包封率为69％，在海参皂苷浓度为600μg/mL时溶血率小于5％，符合注射药物的要求。通过细胞毒性试验证明了本发明专利技术制备的包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装体系具有抑制肿瘤细胞的作用，能够用于制备抗肿瘤药物。

【技术实现步骤摘要】
一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用。
技术介绍
海参皂苷是海参体内重要的次生代谢产物，具有抗肿瘤、抗真菌等多种药理活性。近年来，海参皂苷较好的抗肿瘤活性逐渐引起大家的关注。但口服海参皂苷易被消化系统内的酶降解，影响其生物利用度。静脉注射给药海参皂苷，因其可与生物膜上的甾醇分子结合，使红细胞穿孔引起溶血，以上原因限制了海参皂苷作为抗肿瘤药物的开发利用。因此，降低海参皂苷类化合物的溶血毒性对其临床抗肿瘤药物的开发具有重要的意义。据文献报道，目前仅从几种滋补品如龙眼、人参、甘薯等中分离得到1,6连接的α-D-葡聚糖。非专利文献“葛根中(1→6)-α-D-葡聚糖的结构，构象及其硫酸化衍生物抗氧化活性，崔恒祥等”公开了葛根中提取的(1→6)-α-D-葡聚糖，中国专利文件CN104861085A公开了板栗中提取的1,6-α-D-葡聚糖。但现有尚未有利用1,6-α-D-葡聚糖降低海参皂苷溶血毒性的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，将海参皂苷包载于棕榈酰化葡聚糖的自组装体系中形成纳米复合物，克服了海参皂苷的溶血毒性，为海参皂苷作为抗肿瘤药物的开发利用提供一个安全有效的纳米载药体系。为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：本专利技术提供一种包载海参皂苷的自组装纳米体系，所述的自组装纳米体系为棕榈酰化葡聚糖自组装纳米体系。本专利技术提供一种所述的包载海参皂苷的自组装纳米体系的制备方法，包括以下步骤：1)棕榈酰化葡聚糖合成：用1,6-α-D-葡聚糖与棕榈酰氯反应生成棕榈酰化葡聚糖，分离纯化得到棕榈酰化葡聚糖化合物；2)包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖自组装体系构建：将步骤1)中得到的棕榈酰化葡聚糖化合物溶于乙醇中制成薄膜，加入含海参皂苷的磷酸盐缓冲溶液，搅拌形成包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装纳米体系。优选的，所述步骤1)具体步骤为：称取1,6-α-D-葡聚糖至无水N,N-二甲基甲酰胺中，加热使其充分溶解，再加入无水吡啶和无水棕榈酰氯，搅拌反应，反应结束后加入去离子水终止反应，乙醇醇沉，离心收集多糖衍生物，凝胶色谱分离纯化，硫酸-苯酚检测，收集多糖组分，浓缩冻干后即得棕榈酰化葡聚糖化合物。优选的，所述1,6-α-D-葡聚糖与无水N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为12.5mg：1ml。优选的，所述无水棕榈酰氯与1,6-α-D-葡聚糖的质量比为3：10。优选的，所述步骤1)中搅拌反应的时间为80h。优选的，步骤2)中将棕榈酰化葡聚糖化合物溶于乙醇中制成薄膜的具体步骤为：棕榈酰化葡聚糖化合物30mg溶于乙醇溶液中，40℃减压旋转蒸发干燥，制备棕榈酰化葡聚糖的薄膜。优选的，所述步骤2)中的含海参皂苷的磷酸盐缓冲溶液中海参皂苷的浓度为1mg/mL。优选的，所述步骤2)中搅拌的方法为：轻轻振摇，室温搅拌过夜后，超声探头超声2min。本专利技术还提供所述的包载海参皂苷的自组装纳米体系在制备抗肿瘤或抗肿瘤辅助药物中的应用。1,6-α-D-葡聚糖为多羟基化合物，可与棕榈酰氯(十六烷酰氯)发生反应生成棕榈酰化葡聚糖。在水相体系中，亲水端的葡聚糖和疏水端的棕榈酰基会发生自组装行为形成自组装体系。本专利技术公开了以下技术效果：(1)将海参皂苷装载于棕榈酰葡聚糖的纳米自组装体系中，解决了海参皂苷类化合物具有溶血毒性的问题，可用于体内注射给药。(2)提供了一种包封率在69％以上的包载海参皂苷棕榈酰葡聚糖的纳米自组装体系的制备方法，能更大程度上发挥海参皂苷的抗肿瘤、抗菌等药理活性。(3)提供了一种无溶血毒性的海参皂苷棕榈酰葡聚糖的纳米自组装体系在抗肿瘤药物或抗肿瘤辅助药物中的应用。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为棕榈酰化葡聚糖红外光谱图；图2为包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖自组装体系的扫描电镜图；图3为不同浓度包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖自组装体系对红细胞悬浊液的影响图；图中从左到右依次为生理盐水，去离子水，5μg/mLEA，1000μg/mLEA，800μg/mLEA，600μg/mLEA；图4为包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖自组装体系溶血毒性图；图中1为生理盐水，2为去离子水，3为5μg/mLEA，4为1000μg/mLEA，5为800μg/mLEA，6为600μg/mLEA；图5为包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖纳米自组装体系对MCF-7细胞的细胞毒性图；图6为包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖纳米自组装体系对SMMC-7721细胞的细胞毒性图；图7为包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖纳米自组装体系对HeLa细胞的细胞毒性图。具体实施方式现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。本专利技术所使用的材料和试剂，如无特殊说明，均可由商业途径获得。实施例11、包载海参皂苷的棕榈酰葡聚糖自组装纳米体系的制备(1)棕榈酰葡聚糖的制备：首先把1,6-α-D-葡聚糖进行减压干燥，反应瓶烘箱中进行干燥，DMF、吡啶、棕榈酰氯经分子筛除水，保证反应容器、样品、试剂均干燥无水。称取100mg的无水1,6-α-D-葡聚糖溶于8mL的无水N,N-二甲基甲酰胺溶剂中，45℃加热使其溶解本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包载海参皂苷的自组装纳米体系，其特征在于，所述的自组装纳米体系为棕榈酰化葡聚糖自组装纳米体系。/n

【技术特征摘要】
1.一种包载海参皂苷的自组装纳米体系，其特征在于，所述的自组装纳米体系为棕榈酰化葡聚糖自组装纳米体系。


2.一种权利要求1所述的包载海参皂苷的自组装纳米体系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)棕榈酰化葡聚糖合成：用1,6-α-D-葡聚糖与棕榈酰氯反应生成棕榈酰化葡聚糖，分离纯化得到棕榈酰化葡聚糖化合物；
2)包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖自组装体系构建：将步骤1)中得到的棕榈酰化葡聚糖化合物溶于乙醇中制成薄膜，加入含海参皂苷的磷酸盐缓冲溶液，搅拌形成包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装纳米体系。


3.根据权利要求2所述的包载海参皂苷的自组装纳米体系的制备方法，其特征在于，所述步骤1)具体步骤为：称取1,6-α-D-葡聚糖至无水N,N-二甲基甲酰胺中，加热使其充分溶解，再加入无水吡啶和无水棕榈酰氯，搅拌反应，反应结束后加入去离子水终止反应，乙醇醇沉，离心收集多糖衍生物，凝胶色谱分离纯化，硫酸-苯酚检测，收集多糖组分，浓缩冻干后即得棕榈酰化葡聚糖化合物。


4.根据权利要求3所述的包载海参皂苷的自组装纳米体系的制备方法，其特征在于，所述1,6-α-D-葡聚糖与无水N,N-二甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：李红燕，解万翠，杨锡洪，车红霞，董秀芳，宋琳，
申请(专利权)人：青岛科技大学，
类型：发明
国别省市：山东;37